一种以幼孢子囊群为外植体的扇蕨组培快速繁殖方法技术

本发明专利技术公开一种以幼孢子囊群为外植体的扇蕨组培快速繁殖方法。该方法包括扇蕨无菌幼孢子囊群外植体的获得、绿色球状体的诱导、绿色球状体的增殖、绿色球状体的分化、组培苗培养和生根。本发明专利技术直接以扇蕨无菌幼孢子囊群为外植体诱导出扇蕨绿色球状体仅需为42天～50天，缩短了绿色球状体的诱导周期，且繁殖效率高，绿色球状体诱导率达96～100％，增殖倍数达6.21～7.47倍，绿色球状体的分化率达100％，生根率达100％，繁殖周期短，对于珍稀濒危植物扇蕨种群数量的扩大，以及扇蕨野生资源的可持续开发利用具有重要意义。

Tissue culture method for rapid propagation of fan fern with young spore sac as explant

The invention discloses a tissue culture method for rapid propagation of a fan fern with young spore sac as explant. The method includes the obtaining of young sterile sporophyte groups, the induction of green spheroids, the proliferation of green spheroids, the differentiation of green globular bodies, and the culture and rooting of plantlets. The present invention directly to palmatopedata aseptic immature sporangia were used as explants to induce palmatopedata green globular bodies only for 42 days to 50 days, shorten the induction period of green globular bodies, and the breeding efficiency is high, the green globular body induction rate ranging from 96 to 100%, the proliferation ratio of 6.21 to 7.47 times, the green ball the shape of the differentiation rate reached 100%, the rooting rate reached 100%, short reproductive cycle, to expand the number of rare and endangered plants palmatopedata populations, as well as the sustainable development and utilization of Neocheiropteris wild resources has important significance.

【技术实现步骤摘要】
一种以幼孢子囊群为外植体的扇蕨组培快速繁殖方法
本专利技术属植物组织培养领域，具体涉及一种以幼孢子囊为外植体的扇蕨组培快速繁殖方法。
技术介绍
扇蕨[Neocheiropterispalmatopedata(Barker)Christ],隶属水龙骨科(Polypodiaceae)扇蕨属，草本植物。根状茎粗壮横走，密被鳞片；叶片扇形，鸟足状掌形分裂，形态奇特，具有较高观赏价值。为中国特产的蕨类植物，产于云南、四川、贵州，生长于海报1500-2700米的密林或山崖林下。扇蕨不仅具有观赏价值，还在蕨类植物系统发育中具有重要研究价值，但由于生境的破坏，其野外分布种群数量急剧减少，《国家重点保护野生植物名录(第一批)》将其列为国家二级重点保护野生植物。野外调查中发现，扇蕨通过孢子繁殖产生的实生孢子体较少，大部分都过根状茎繁殖来维持种群。有性生殖周期长及配子体发育形成孢子体的百分率低是扇蕨主要的濒危原因，自然生境的破坏更加剧了濒危程度。蕨类植物组培快速繁殖方法主要包括：(1)孢子无菌培养，即：以孢子为外植体进行组培繁殖，繁殖周期较长，部分蕨类种类形成孢子体的百分率较低。(2)以孢子体为外植体的组本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以幼孢子囊群为外植体的扇蕨组培快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：(1)扇蕨无菌幼孢子囊群外植体的获得选择带有扇蕨幼孢子囊群的扇蕨叶片，用软的毛刷蘸1％体积分数的洗洁精水对扇蕨幼孢子囊群表面进行清洗，除去扇蕨幼孢子囊群表面的小鳞片和杂物，直至可见黄绿色的扇蕨幼孢子囊，然后用手术刀片将扇蕨幼孢子囊群从叶片上剥离，放置于烧杯中，流动水冲洗1～1.5小时，再在无菌条件，将扇蕨幼孢子囊群用5％体积分数的次氯酸钠溶液消毒12～15分钟，无菌水冲洗5～6次，每次冲洗5分钟，即得扇蕨无菌幼孢子囊群外植体；所述扇蕨幼孢子囊为黄绿色，且孢子囊壁完整，孢子囊外壁覆盖有棕褐色鳞片的扇蕨孢子囊；(2)扇蕨绿色球...

【技术特征摘要】
1.一种以幼孢子囊群为外植体的扇蕨组培快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：(1)扇蕨无菌幼孢子囊群外植体的获得选择带有扇蕨幼孢子囊群的扇蕨叶片，用软的毛刷蘸1％体积分数的洗洁精水对扇蕨幼孢子囊群表面进行清洗，除去扇蕨幼孢子囊群表面的小鳞片和杂物，直至可见黄绿色的扇蕨幼孢子囊，然后用手术刀片将扇蕨幼孢子囊群从叶片上剥离，放置于烧杯中，流动水冲洗1～1.5小时，再在无菌条件，将扇蕨幼孢子囊群用5％体积分数的次氯酸钠溶液消毒12～15分钟，无菌水冲洗5～6次，每次冲洗5分钟，即得扇蕨无菌幼孢子囊群外植体；所述扇蕨幼孢子囊为黄绿色，且孢子囊壁完整，孢子囊外壁覆盖有棕褐色鳞片的扇蕨孢子囊；(2)扇蕨绿色球状体的诱导将步骤(1)中获得的扇蕨无菌幼孢子囊群切成小块，接种于绿色球状体诱导培养基上，20℃～25℃暗培养48小时，然后转入光照培养，培养时间为40～48天，得到扇蕨绿色球状体，光照培养条件为：20℃～25℃,每天的光照时间为12小时，光照强度为2000lx；所述绿色球状体诱导培养基为：1/4MS～1/2MS+TDZ0.5～1.0mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+蔗糖30.0g/L+琼脂7.0g/L，pH为5.80；(3)扇蕨绿色球状体的增殖将步骤(2)诱导获得的扇蕨绿色球状体切割成块，接种于绿色球状体增殖培养基上，培养时间为30天，得到增殖的扇蕨绿色球状体，培养条件与步骤(2)中所述的光照培养条件相同；所述绿色球状体增殖培养基为：1/2MS～MS+6...

【专利技术属性】
技术研发人员：余蓉培，杨春梅，张颢，阮继伟，吴丽芳，汪国鲜，单芹丽，
申请(专利权)人：云南省农业科学院花卉研究所，玉溪云星生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53