多肽微粒化的方法技术

本发明专利技术涉及：多肽微粒分散液的制法，其特征在于把多肽不溶性的水混溶性的有机溶剂添加到含有多肽及相分离诱导剂的水溶液冻结物中，使其中的相分离诱导剂及冰溶解；用上述方法制得的多肽微粒分散液；从该多肽微粒分散液中除去相分离诱导剂、水及水混和性有机溶剂制得多肽微粒；微球体的制法其特征在于把该多肽微粒分散在在挥发性水不溶性有机溶剂中溶有生物体内分解性聚合物的溶液中，将其分散在水相中制得Ｏ／Ｗ乳液，通过蒸馏除去该水不溶性有机溶剂；以及由此制得的微球体制剂。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。此种多肽，由于在生物体内的半哀期短、经口给药消化道难以吸收，所以过去是多次注射给药。但是，因给药方法繁杂、患者负担等问题，人们正探讨更简便的给药方法。作为此种方法的一个例子可以举出经肺给药。但是，在经肺给药中为使多肽抵达肺泡内就有必要使多肽微粒化。而且，把多肽包封在生物体内分解性聚合物中制成微球体，通过注射植入生物体内，使多肽长期在生物体内释放的探讨也很广泛。作为这样的微球体的制法，已知的是，使多肽水溶液在溶有生物体内分解性聚合物的二氯甲烷等有机溶剂中乳化配制W/O乳液，使其在水中乳化得到微球体的方法。但在此法中，存在着多肽变性失活问题，只有一部分多肽能够适用。为避免此问题，正在探讨的是把粉状多肽直接分散在一种溶有生物体内分解性聚合物的有机溶剂中作为油相，用来配制微球体，但是在此方法中，由于多肽粒径大、包封率不高，加之溶出初期多量释放(初期破裂现象)，所以象气雾剂一样，有必要使多肽微粒化。作为，迄今已知的方法如下。(I)用喷雾干燥器使含有明胶等水溶性高分子物质及多肽的水溶液微粒化的方法(特开平4-36233)。(II)使含多肽和水溶性高分子物质的水溶液冷冻干燥，所得的冷冻干燥物用射流磨细粉碎的方法(特开平8-225454)。(III)向丙酮中添加多肽水溶液，使多肽微粒结晶析出的方法(J.ofMicroencapsulation，14(2)，p225-241，1997年)。(IV)使表面活性剂和多肽在水中混合，急速干燥的方法(特开平9-315997)。(V)向多肽水溶液中添加水混溶性有机溶剂或挥发性盐类，冷冻干燥的方法(特开平11-322631)。(VI)使多肽和聚乙二醇的混合水溶液冷冻干燥，用有机溶剂溶解聚乙二醇的方法(特开平11-302156)。但是，在所有上述方法中存在的问题是，多肽完全失活，回收率低，再分散性差，制造需时长等，这些问题全部解决的方法，尚未找到。本专利技术的目的在于提供一种简便快速、高回收率、不导致变性的。按照本专利技术的方法，能够简便快速地以高回收率制得多肽微粒，而且所得微粒的特征是保持高活性、再分散性也好。也就是说，本专利技术涉及一种多肽微粒分散液的制法，其特征在于向含有多肽及相分离诱导剂的水溶液冻结物中添加一种多肽不溶性、水混溶性有机溶剂，使冻结物中的相分离诱导剂及冰溶解。另外，本专利技术涉及从按照上述方法制得的多肽微粒分散液中除去相分离诱导剂、水及水混溶性有机溶剂制得的多肽微粒。本专利技术还涉及一种微球体的制法，其特征在于把上述多肽微粒分散在挥发性的非水混溶性有机溶剂中溶有生物体内分解性聚合物的溶液中，把其分散在水相中制得的O/W乳液，通过蒸馏除去该非水混溶性有机溶剂。本专利技术还涉及一种微球体的制法，其特征在于把含有多肽微粒、生物体内分解性聚合物及与水混和的上述聚合物的良溶剂(溶剂A)的聚合物溶液添加到一种含有与溶剂A混溶的上述聚合物的不良溶剂(溶剂B)和与溶剂A不混溶的上述聚合物的不良溶剂(溶剂C)的均匀混合液中，通过乳化制备以聚合物溶液为分散相、以均匀混合液为连续相的乳液，从分散相中除去溶剂A。本专利技术还涉及用上述方法制得的微球体制剂。图2按照本专利技术方法(实施例1)所得BSA微粒的电子显微镜相片模式图。图3是表示按照本专利技术方法所得BSA微粒分散液，将取自该液的粉状BSA微粒再分散的分散液中的BSA微粒的粒度分布的曲线4是表示用按照本专利技术方法制得的BSA微粒配制成的微球体(实施例15)的溶出试验结果的曲线图。图5按照比较对照方法(比较例1)所得BSA微粒的电子显微镜相片的模式图作为多肽可以举出种种具有对哺乳动物有用的有生物活性、可用于临床上的多肽或蛋白质。该多肽的分子量作为单体可用例如1,000～200,000的，特别优选为5,000～70,000。在这些多肽中，也含有生物化学领域所谓具有超级结构的分类属于蛋白质的高分子。本专利技术所用的多肽种类，只要达到本专利技术的目的，没有特别限制，优选为具有一定水溶性的，其对水的溶解度在20℃为约0.01mg/ml以上，优选为约1mg/ml以上。作为多肽的具体例子可以举出如激素类、酶类、细胞分裂素类、生长因子类等。更具体地可以举出下面的多肽。作为激素的例子可以举出生长激素(GH)、生长激素释放因子(GRF)、胰岛素、胰高血糖素、胃泌素、催乳激素、促肾上腺皮脂激素(ACTH)、促甲状腺激素(TSH)、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)、降血钙素等。作为酶类可以举出组织血纤维蛋白溶酶原活化剂(tPA)、尿激酶(UK)、链激酶、蛋白质C、金属蛋白酶类、超氧化物歧化酶(SOD)、第VIII及第IX因素、过氧化物酶等。作为细胞因子类可以举出干扰素类(IF/F-α、-β、-γ等)、白细胞介素(如IL-1～IL-11)、恶病质素、制瘤素、菌落刺激因子如G-，M-及GM-CSF等)、血小板生成素(TPO)及红血球生成素(EPO)。作为生长因子类可以举出神经生长因子(NGF-1、NGF-2等)、神经营养因子(NTF)、上皮细胞生长因子(EGF)、源于血小板的生长因子(PDGF)、类胰岛素生长因子(如IGF-1、IGF-2及IGF-3等)、成纤维细胞增殖因子(αFGF及bFGF)、成骨质生长因子(如BMP-1、BMP-2，BMP-3及BMP-4)，前房利钠尿多肽(ANP)、软骨诱导因子等。这些多肽既可含有糖链、或其糖链结构也可不同。而且，它们也可含有突变蛋白，衍生物、类似物及活性片段等。本专利技术中所用的多肽既可来自天然，也可由基因重组技术制得。而且，作为本专利技术所用的多肽也可为金属盐，作为金属盐中的金属可以举出如碱土类金属(如钙、镁等)、锌(II价)、铁(II、III价)、铜(II价)、锡(II、IV价)、铝(II、III价)等。在本说明书中所说的多肽也包括它的这些金属盐。作为本专利技术所用的相分离诱导剂，若是当多肽及相分离诱导剂高浓度地溶于水时(例如，多肽200mg/ml以上，相分离诱导剂50mg/ml以上)，能引起富含多肽相及富含相分离诱导剂相发生相分离作用的化合物，没有特别限制，例如可以举出非多肽性水溶性高分子。适于用作非多肽性水溶性高分子的平均分子量为400～200,000，优选为6,000～70,000。这种非多肽性水溶性高分子的具体例子可以举出聚氧乙烯类、纤维素衍生物、聚乙烯衍生物、环糊精衍生物等。作为聚氧乙烯类可以举出聚乙二醇、聚氧乙烯固化蓖麻油、聚氧乙烯-聚氧丙烯二醇、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯等。作为纤维素衍生物可以举出羟丙基纤维素等。作为聚乙烯衍生物可以举出聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇等。作为环糊精衍生物可以举出二甲基-β-环糊精等。其中特别优选的相分离诱导剂可以举出聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮，最优选的是聚乙二醇。聚乙二醇的平均分子量优选在400～200,000范围内，特别优选在6,000～70,000范围内。相分离诱导剂既可1种单用，也可2种以上组合使用。含多肽及相分离诱导剂的水溶液的配制方法既可把多肽、相分离诱导剂两者同时溶于水，也可使一个溶解后再使一个溶解、或者把多肽水溶液与相分离诱导剂水溶液混合。总之，多肽及相分离诱导剂最后溶解于水即可，对配制方法没有特别限制。多肽-相分离诱导剂水溶液中多肽的浓本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多肽微粒分散液的制法，其特征在于把多肽不溶性的水混溶性有机溶剂添加到含有多肽及相分离诱导剂的水溶液冻结物中，使冻结物中的相分离诱导剂及冰溶解。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：松本昭博，森田孝广，
申请(专利权)人：田边制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]