pH偏移的等电位捕集离析物的方法技术

提供一种利用电泳分离两性组分的方法，该方法包括：将含ｐｌ值的两性组分的样品置于电泳分离系统中，所述的系统包括：具有ｐＨ的阳极电解液、具有ｐＨ的阴极电解液，阴极电解液的ｐＨ高于阳极电解液的ｐＨ，布置于阳极电解液和阴极电解液之间的一种或多种离子可渗透阻挡层，其中至少一个阻挡层是等电位的阻挡层，其ｐｌ值高于阳极电解液ｐＨ，但低于阴极电解液ｐＨ；提供等电位的缓冲液，其ｐｌ值高于阳极电解液的ｐＨ，但低于阴极电解液ｐＨ，不同于两性样品组分的ｐｌ值，也不同于离子可渗透等电位阻挡层的ｐｌ值；和在该电泳系统中，在等电位的缓冲液存在下，将样品置于电势下以收集非等电状态的两性样品组分。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术申请的领域是两性化合物的分离和浓缩。更具体地说，本专利技术申请涉及使用pH偏移捕集技术改变包含至少一种两性样品组份的样品组成的方法。
技术介绍
电泳技术和等电点聚焦(IEF)技术特别仍然是用于分离小的和大的、简单的和复杂的等两性组份的关键技术。IEF用于许多领域和工业中，可在分析和制备规模上进行。例如，IEF用于临床诊断、生物工艺学、药品和食品工业等，可以单独或者与其它的分析或者制备技术结合使用。在IEF中，在pH梯度中借助于电场分离两性组份，其中pH从阳极处较低的pH值增加到阴极处较高的pH值。(关于IEF的专题论文见例如，P.G.Righetti，Isoelectric focusingtheory，methodology andapplications，Elsevier Biomedical，Amsterdam，1983，在此引入作为参考。)因为两性组份的净电荷在等电状态下为零，每当它的环境pH变成等于它的等电点(pl)值时，两性组份的电泳迁移速度就变成零。因此，具有不同pl值的两性组份在pH梯度下在不同的点停止迁移。相对稳定的连续pH梯度可以由几种手段产生。例如，可使用载体两性电解质(在它们pl值邻近处具有足够缓冲能力和电导率的化合物)的混合物。此外，适当数量的适当的弱酸和弱碱或者弱酸和强碱或者强酸和弱碱可以体积控制方式结合为一种离子可渗透的基质，比如一种交联的聚丙烯酰胺凝胶，以形成并稳定pH梯度，其然后被用作固定不动的pH梯度IEF(IPGIEF)。(关于IPGIEF的专题论文见例如，P.G.Righetti，Immobilized pH gradientstheory and methodology，Elsevier，Amsterdam，1990，在此引入作为参考。)。做为选择，两性样品组份还可以使用基于等电位膜的多隔室电解槽(例如，Faupel et al，U.S.5,082,548，在此引入作为参考)通过等电位捕集(IET)彼此进行分离，其中在IET分离过程结束时，得到了处于它们等电状态的两性样品组份。
技术实现思路
本专利技术申请的实施方式，使用pH偏移的等电位捕集(IET)方法，通过加入一种或多种适当的在其pl值邻近具有足够缓冲量、滴定容量和电导率的等电位缓冲剂电泳改变包含至少一种两性组份样品的初始成分，以在IET过程结束时得到其非等电状态的两性样品组份。简要地，根据本专利技术申请的一种实施方法提供选择具有至少一个离子可渗透的等电位阻挡层的电泳分离体系，提供选择具有比两性样品组份pl值较低的pH值的阳极电解液，提供选择具有比两性样品组份pl值较高pH值的阴极电解液，提供具有比阳极电解液较高的和比阴极电解液pH值较低的pl值，而且与两性样品组份pl值不同的等电位缓冲液，将样品和等电位的缓冲液引入电泳体系，通过进行电泳分离捕集非等电状态的两性样品组份。一个方面提供选择具有一种或多种分离隔室的电泳分离系统。另外的方面提供选择两个或更多离子可渗透等电位的阻挡层，所述的阻挡层的pl值不同于两性样品组份和等电位缓冲液的pl值。另外的方面提供选择第二等电位的缓冲液，所述的缓冲液的pl值不同于两性样品组份、第一等电位缓冲液和等电位阻挡层的pl值。另外的方面提供通过进行电泳分离捕集第一两性样品组份和第二两性样品组份，所述的两性样品组份在非等电阻挡层的在两个边上都处于非等电状态。在第一方面，本专利技术提供一种关于利用电泳分离两性组份的方法，该方法包括在电泳分离系统中安置含具有一定pl值两性组份的样品，所述的系统包括具有一定pH的阳极电解液和具有一定pH的阴极电解液，该阴极电解液的pH比阳极电解液pH高，布置于该阳极电解液和阴极电解液之间的一种或多种离子可渗透阻挡层，其中至少一个阻挡层是具有一定pl值的非等电阻挡层，所述的pl值比阳极电解液pH高但比阴极电解液pH低；提供一种具有一定pl值的等电位的缓冲液，所述的pl值比该阳极电解液的pH高，但比该阴极电解液的pH低，而且不同于两性样品组份的pl值，不同于离子可渗透的等电位阻挡层的pl值；及使样品置于电位下以在电泳系统中在等电缓冲液存在下收集非等电状态的两性样品组份。优选，该电泳分离系统包括含阳极和适合于容纳该阳极电解液的阳极室，含阴极和适应于容纳阴极电解液的阴极室，布置于阳极室和阴极室之间以具有一定pl值的离子可渗透的等电位阻挡层形式的一个离子可渗透阻挡层。优选，该电泳分离系统进一步包括布置于该阳极室和该阴极室之间的第一和第二离子可渗透阻挡层，在阳极室和阴极室之间形成第一分离隔室。在优选的形式中，第一和第二离子可渗透阻挡层是等电位的阻挡层，每一个具有确定的但是不同的pl。将样品提供到样品隔室、阳极室或者阴极室的至少一个中。在一个优选的形式中，将样品提供到样品隔室，在样品隔室中在非等电状态下分离两性组份。做为选择，在样品隔室、阴极室或者阳极室中得到非等电状态的两性组份。预期样品包含两个或更多的两性组份，所述的组份在样品隔室、阴极室、阳极室、两个或更多的样品隔室、阳极室或者阴极室中以非等电状态得到。该电泳分离系统可进一步包含布置于阳极室和阴极室之间的第三离子可渗透阻挡层，形成邻近第一分离隔室的第二分离隔室，该系统具有第一pl值的第一离子可渗透等电位阻挡层和第二pl值的第二离子可渗透等电位阻挡层，第二pl值不同于第一离子可渗透等电位阻挡层的第一pl值。优选，所有的离子可渗透阻挡层是等电位的阻挡层，每一个具有确定的但是不同的pl。预期任一或更多的阻挡层可以是等电位的阻挡层。在该形式中，样品可以被提供到第一样品隔室、第二样品隔室、第一和第二样品隔室、阳极室或者阴极室。在第一样品隔室、第二样品隔室、阴极室或者阳极室中得到非等电状态的两性组份。样品包含两个或更多的两性组份，所述的两性组份在第一样品隔室、第二样品隔室、阴极室、阳极室或者第一样品隔室和第二样品隔室的每一个中以非等电状态得到。在另外的优选形式中，该电泳分离系统包括多个布置于阳极室和阴极室之间的离子可渗透阻挡层，形成布置于阳极阴极室之间的多个分离隔室， 其中，两个或更多的离子可渗透阻挡层是离子可渗透等电位阻挡层，每一个具有不同的pl值。三个或更多的离子可渗透阻挡层可以是离子可渗透等电位阻挡层，每一个具有不同的pl值。预期所有的离子可渗透阻挡层可以是离子可渗透等电位阻挡层，每一个具有pl值。该方法可以包括将每一个具有不同的pl值的第一等电位的缓冲液和第二等电位的缓冲液，提供到样品隔室、阳极室或者阴极室的至少两个中。该离子可渗透阻挡层可选自任何适当的材料或者物质，比如不溶混液体、多孔质固体、非离子膜、膜、等电位的膜、水凝胶膜、凝胶和水凝胶。本专利技术专利技术人已经发现水凝胶膜优选基于聚醚砜、基于聚(乙烯基)醇或者基于聚丙烯酰胺。预期任何其它类型的水凝胶膜可用于本专利技术。优选，该非离子的膜是支撑膜比如负载在玻璃纤维、滤纸、聚合物网状物和纸上的交联聚丙烯酰胺和聚(乙烯基)醇。该离子可渗透阻挡层可以是多孔玻璃料比如玻璃粉、陶瓷的玻璃料和聚合的玻璃料。在一个优选的形式中，该离子可渗透阻挡层可基本上限制尺寸或者水合离子半径大于预定尺寸的分子通过。该离子可渗透等电位阻挡层优选是等电位的多孔质固体、等电位的膜和等电位的凝胶。更优本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用电泳分离两性组份的方法，该方法包括：将含ｐｌ值的两性组份的样品置于电泳分离系统中，所述的系统包括具有ｐＨ的阳极电解液和具有ｐＨ的阴极电解液，阴极电解液的ｐＨ高于阳极电解液的ｐＨ，一种或多种离子可渗透阻挡层布置于阳极电解液和阴 极电解液之间，其中至少一个阻挡层是等电位的阻挡层，其ｐｌ值高于阳极电解液的ｐＨ，但低于阴极电解液的ｐＨ；提供等电位的缓冲液，其ｐｌ值高于阳极电解液的ｐＨ，但低于阴极电解液的ｐＨ，而且不同于两性样品组分的ｐｌ值和离子可渗透等电位阻挡层 的ｐｌ值；和在该电泳系统中，在等电位的缓冲液存在下，将样品置于电势下以收集非等电状态的两性样品组份。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：久洛维格，
申请(专利权)人：得克萨斯AM大学体系，
类型：发明
国别省市：US[美国]