一种蛋鸡鸡蛋品质的分子遗传标记及应用制造技术

本发明专利技术属于蛋鸡分子遗传标记辅助选择技术领域，具体涉及一种蛋鸡鸡蛋品质的分子遗传标记及应用，它是蛋鸡VLDLR和CTSD基因的部分序列，VLDLR核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，VLDLR核苷酸序列如SEQ ID No.2‑4所示，利用本发明专利技术的分子标记方法对鸡蛋品质性状进行选择，不仅可为鸡育种工作中标记辅助选择提供一个更为有效、简便易行的分子标记方法，同时可以克服常规鸡蛋品质性状选择方法工作量大、易受环境影响和育种周期长等缺点，为鸡蛋品质性状改良提供一种有效的分子标记育种手段，从而加速鸡的遗传进展。

【技术实现步骤摘要】
一种蛋鸡鸡蛋品质的分子遗传标记及应用
本专利技术属于蛋鸡分子遗传标记辅助选择
，具体涉及一种蛋鸡鸡蛋品质的分子遗传标记及应用。
技术介绍
蛋品质直接影响蛋的营养成分、食用价值、进而影响蛋的市场售价，同时对鸡蛋的保存时间、种蛋孵化率、破损率等有一定的影响。蛋品质在很大程度上受遗传因素的影响，遗传力通常在0.5～0.7之间，其中蛋重、蛋壳强度等遗传力较高。品种是影响常规蛋品质的最主要因素，蛋品质遗传改良是未来蛋鸡育种的一个重要方向，也是蛋鸡生产中极为重要的一个指标。近年来，随着对鸡蛋品质研究的不断深入，已经鉴定出大量与蛋品质相关的基因。极低密度脂蛋白受体(VLDLR)是一个重要的多功能受体，在鸡卵黄前体形成的过程中起着关键作用。VLDLR基因在鸡繁殖中起着关键作用，包括卵母细胞的发育和卵黄脂蛋白沉积。Tacken等使用VLDLR基因缺陷型转基因小鼠进行研究，结果表明VLDLR在VLDL-甘油三酯代谢中发挥作用，这对脂肪细胞甘油三酯的储存有很重要的作用。Han等在对斑胸草雀的研究中发现，VLDLR基因mRNA的表达在卵生物种繁殖中有关键作用。VLDLR基因编码区的一个碱基位点突变(G/C)导致蛋白链上某处的半胱氨酸(Cys)突变为丝氨酸(Ser)，从而严重影响了VLDLR与卵泡膜结合，导致产蛋数急剧降低。因此，可以认为VLDLR基因是影响产蛋数的关键基因。最近有研究表明，VLDLR的单核苷酸突变对鸭的产蛋性状有显著影响。溶酶体组织蛋白酶(CathepsinD，CTSD)是天冬氨酸蛋白酶家族的重要成员，广泛参与胞内蛋白质的消化，同时也是VLDLR形成卵黄过程中的关建酶。CTSD含量在卵母细胞的卵黄形成过程中极其丰富，VTG和VLDL从血液到卵泡的转运不仅依赖VLDLR，在这个胞吞过程中，CTSD也是这个转运过程的关键酶。因此，可将VLDLR和CTSD基因作为研究家禽产蛋性状的候选基因。本专利技术采用直接测序法，检测VLDLR和CTSD基因在鸡中的单核苷酸多态性，并分析各多态位点不同基因型与10个鸡蛋品质的相关性，获得鸡蛋品质相关的分子遗传标记，为具有优良鸡蛋品质的鸡品种选择提供可靠的依据。
技术实现思路
本专利技术目的是，针对有关利用分子标记技术选择鸡蛋品质研究不足，提供一种在鸡的生命早期就可开始、准确性高、选育周期短、成本低的利用VLDLR和CTSD基因分子遗传标记技术选择鸡蛋品质性状的方法。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种鸡蛋品质的分子遗传标记，它是蛋鸡VLDLR和CTSD基因的部分序列，所述遗传标记VLDLR核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述遗传标记VLDLR核苷酸序列如SEQIDNo.2-4所示；所述VLDLR和CTSD基因型分别为CC、CT和TT三基因复合型个体，即在所述SEQIDNo.1序列在第13444位存在一个C/T位点，所述SEQIDNo.2位在第2614位存在一个T/C位点，所述SEQIDNo.3位在第9445位存在一个C/T位点、在第9457位存在一个C/T位点、在第9475位存在一个C/T位点，所述SEQIDNo.4位在第11028位存在一个T/C位点。本专利技术还提供一种用于扩增蛋鸡鸡蛋品质的分子遗传标记的特异性引物，用于扩增VLDLR基因的引物如SEQIDNo.5-6所示，用于扩增CTSD基因的引物如SEQIDNo.7-12所示，从而用于该遗传标记的检测，例如通过PCR扩增得到所述遗传标记，再通过克隆测序得到相应的序列，或者通过BsmI-RFLP多态性进行检测。因而，本专利技术还包括用于扩增所述分子遗传标记的引物或鉴定所述分子遗传标记的探针，以及含有所述引物或探针的试剂盒。本专利技术还提供一种蛋鸡鸡蛋品质的分子遗传标记在蛋鸡品质性状标记辅助选择中的应用。进一步的，所述蛋鸡品质性状包括300日龄产蛋量、500日龄产蛋量、蛋重、蛋形指数、蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋白高度、蛋黄颜色、哈氏单位、蛋黄重和/或蛋黄比例。本专利技术的原理：连接酶检测反应是一种高特异性基因检测技术，其主要基于核酸特异杂交原理，一对杂交探针杂交于待检DNA序列上相邻的位置，并在杂交后经连接酶连接形成一条完整的探针，再结合不同的检测方式实现检测。本专利技术的有益技术效果是：第一，本专利技术是根据基因型对鸡蛋品质的选择，具有精确度高、操作简单、费用低(选择成本约为0.3元/只)等特点，并可以进行自动化的规模检测；第二，利用本专利技术的分子标记方法可以在鸡的生命早期(出生后1周内)即可开始选择鸡蛋品质的性状，可以缩短世代间隔，提高选择强度，较早地选择出优良的种鸡亲本，从而加速鸡的育种进程，与常规的鸡蛋品质测定选择方法比较每代可缩短选择时间3个月；第三，利用本专利技术的分子标记方法对鸡蛋品质性状进行选择，不仅可为鸡育种工作中标记辅助选择提供一个更为有效、简便易行的分子标记方法，同时可以克服常规鸡蛋品质性状选择方法工作量大、易受环境影响和育种周期长等缺点，为鸡蛋品质性状改良提供一种有效的分子标记育种手段，从而加速鸡的遗传进展。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术中VLDLR基因688bp片段扩增电泳图；图2是本专利技术中CTSD基因323bp片段扩增电泳图；图3是本专利技术中CTSD基因331bp片段扩增电泳图；图4是本专利技术中CTSD基因340bp片段扩增电泳图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1.设计引物根据GenBank上鸡VLDLR基因的DNA序列(登录号：NC_006127)和CTSD基因的DNA序列(登录号：NC_006092)，设计以下引物(表1)。表1鸡VLDLR和CTSD基因多态性检测引物2.PCR扩增PCR反应体系为20μL，其中1×Buffer(含3mMMg2+)2.0μL，2mMdNTPs2.0μL，0.5pmol/L的上、下游引物各2.0μL，模板DNA50ng，1UTaqDNA聚合酶0.2μL，加ddH2O至20.0μL。PCR扩增反应程序：95℃预变性2min；94℃变性30s，59℃退火1min30s，72℃延伸1min，40个循环；最后72℃后延伸10min。PCR产物经3％琼脂糖凝胶电泳检测扩增效果，并送测序公司进行测序。3.PCR产物检测设计合成的4对引物在适宜的条件下都获得了条带清晰、特异性良好的PCR产物，且与预期目的片段长度一致(图1-4)，可进行后续测序。4.直接测序与基因分型以来自原种场的276只鸡的基因组DNA为模板，进行PCR扩增和直接测序，应用DNAMAN软件比对测序结果。在VLDLR基因的外显子17发现1个突变位点。在CTSD基因外显子3发现1个突变位点，外显子7发现3个突变位点，外显子9发现1个突变位点。所有突变本文档来自技高网...

【技术保护点】
鸡蛋品质的分子遗传标记，它是蛋鸡VLDLR和CTSD基因的部分序列，其特征在于，所述遗传标记VLDLR核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述遗传标记VLDLR核苷酸序列如SEQ ID No.2‑4所示；所述VLDLR和CTSD基因型分别为CC、CT和TT三基因复合型个体，即在所述SEQ ID No.1序列在第13444位存在一个C/T位点，所述SEQ ID No.2位在第2614位存在一个T/C位点，所述SEQ ID No.3位在第9445位存在一个C/T位点、在第9457位存在一个C/T位点、在第9475位存在一个C/T位点，所述SEQ ID No.4位在第11028位存在一个T/C位点。

【技术特征摘要】
1.鸡蛋品质的分子遗传标记，它是蛋鸡VLDLR和CTSD基因的部分序列，其特征在于，所述遗传标记VLDLR核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，所述遗传标记VLDLR核苷酸序列如SEQIDNo.2-4所示；所述VLDLR和CTSD基因型分别为CC、CT和TT三基因复合型个体，即在所述SEQIDNo.1序列在第13444位存在一个C/T位点，所述SEQIDNo.2位在第2614位存在一个T/C位点，所述SEQIDNo.3位在第9445位存在一个C/T位点、在第9457位存在一个C/T位点、在第9475位存在一个C/T位点，所述SEQIDN...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢立志，李国勤，田勇，陈黎，沈军达，陶争荣，曾涛，徐坚，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33