一种微藻藻种长期保藏方法技术

本发明专利技术公开了一种微藻藻种长期保藏方法。它是将微藻接种于固体培养基上培养，无菌条件下将携带有微藻细胞的固体培养基风干，弱光条件下保藏。本发明专利技术的微藻藻种长期保藏方法，具有操作简单，工作量小，保存时间长，不易污染，能很好的维持藻细胞活性及特性，易复苏，耗能低，运输便捷等优点，为实验及生产保藏微藻藻种具有非常重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
一种微藻藻种长期保藏方法
：本专利技术属于微生物
，具体涉及一种微藻藻种长期保藏方法。
技术介绍
：微藻种类繁多，是世界上生物量最大、最古老的一类生物(比三叶虫还早)；微藻的光合利用效率较高，地球每年固定的生物质中有40％来源于微藻；同时，微藻的存在决定着生命起始至今地球的大气成分与变化。微藻因其生长周期短、生长速率快、光合作用效率高、可生产丰富多样的生物质(特别是具有生物活性的高附加值产品)、不与粮食生产竞争资源、环境效益显著(可回收废水废气中的碳氮硫元素)等优势，成为了全球新型生物质能源领域的研究前沿和热点。地球上已知的微藻种类超过40,000种，它们的种间甚至株系间的生长特性、含有的生物质种类及含量和在环境中的功能差异很大。藻类的生境类型广阔多样，可在淡水、海水、咸水、半咸水、高盐度水及土壤等环境中生存。许多微藻细胞内含有30％～50％DW的脂类，有的甚至高达80％DW，其中绿藻门和硅藻门种类较多；一些门类的微藻可以积累一定量的高附加值生物活性物质，如雨生红球藻(Haematococcuspluvialis)是天然虾青素的理想来源(最高可达干重的8％)；盐生杜氏藻(Dunaliellasalina)在逆境条件下可大量积累具有抗氧化活性的β-胡萝卜素；紫球藻含有抗肿瘤活性的紫球藻多糖；波氏藻富含人体的必需脂肪酸二十碳五烯酸(脑黄金)等。因此，不论是基于生态环境(物种多样性)保护，还是藻类生物质的生产，藻株的选育工作具有重要意义，藻种的保藏十分关键。微藻藻种的保藏方法应该要具备：(1)操作简单、快速，工作量适宜；(2)培养条件稳定、清洁，不易污染(可抵抗环境中细菌、杂藻、真菌)和变异；(3)细胞易于复苏；(4)保藏工作节能环保，成本低廉；(5)方便运输，运输条件常规不苛刻。目前微藻藻种保藏方法存在的问题主要包括：1)微藻繁殖生长快速，生物量大，用常规的液体培养基或是固体琼脂平板涂布保藏，为了保证藻种的特性，需要1-2个月进行一次传代工作。传代操作的前期准备工作繁杂，工作量大，耗时耗力；2)利用液体培养基保藏微藻藻种极易污染细菌和真菌，影响微藻的生长，也明显影响微藻生理机制的研究实验数据，同时，长期液体培养的藻种不进行定期活化，容易发生性状变异；3)目前，采用固体培养基保藏藻种的方法借鉴于菌类保藏的方法，例如添加一些保护剂与藻种混合，然后经过超低温真空排水，安瓿管低温环境保存。这种保藏方法，由于微藻与菌类有很大的区别，其生命活动类似于高等植物，所以低温会造成细胞的冻伤，易出现结构损伤或功能丧失等现象，藻种复苏极其困难，甚至不能复苏；4)采用低温保藏的方法耗能大，保存条件苛刻；5)藻种运输不够便捷，在运输过程中，藻种样品易损坏，且运输条件有特殊要求。目前已公开的与微藻藻种保藏相关的专利主要包括：1)一种有利于长期储存雨生红球藻藻种的固态培养基及其制备方法(专利申请号：CN201610369738.4)，该专利技术公开了一种有利于长期储存雨生红球藻藻种的固态培养基，按照申请人提供的新配方以及制备方法，解决现有配方抑制雨生红球藻繁殖，生长因子不够或过量，易污染细菌等弊端，达到延长雨生红球藻藻种保存时间的效果。2)微藻藻种的保藏方法(专利申请号：CN201610333908.3)，本专利技术涉及一种微藻藻种的保藏方法。该方法将微藻培养到稳定生长阶段后，微藻的藻液与保存液按照1:1等体积比例混合，将混合液保存在温度20℃、光照强度20μE/mol/s、光照时间4小时/天的条件下，方法提供的保护液包括了氮盐、磷盐、铁盐、EDTA-Na2、NaHCO3、Gly、甘油、VB10、VB12、抗生素、和植物生长调节剂。3)一种保藏微藻藻种的方法(专利申请号：CN201010222005.0)，本专利技术公开了一种保藏微藻藻种的方法，其方法为将所要保藏藻种收集获得藻泥，然后将藻泥与保护剂混合制成藻种细胞悬液，上述藻种细胞悬液经过程序预冻过程，最终完全冻结。冻结后的藻种细胞悬液在减压的条件下使水分升华，形成固形海绵体状物质保藏即可。保护剂为脱脂乳和维生素的复合保护剂，以重量计脱脂乳的含量为5％～20％，维生素0.5％～2％。通过对现有的微藻藻种保藏方法进行分析发现，现有的微藻藻种保藏方法，多数为藻类常规保藏方法(各方法没有明显差异及有意义的关键技术)或是借鉴菌类保藏的方法，这些方法并没有在保持微藻细胞活性的条件下减少传代的工作量，特别是对于拥有种类数量庞大的藻种种质资源库，难以进行推广应用；同时这些方法，耗能大，易污染，易冻伤微藻细胞，难以复苏及维持驯化后的生长和遗传特性；运输不便捷，易损坏，且有的还需要特殊的环境条件；这些方法中有一些还仅提供为专一藻种所用，应用范围较窄。
技术实现思路
：本专利技术的目的是提供一种适用范围广，简单便捷，能在常温下有效长期保持微藻细胞活性的微藻藻种长期保藏方法。本专利技术的微藻藻种长期保藏方法，其特征在于，将微藻接种于固体培养基上培养，无菌条件下将携带有微藻细胞的固体培养基风干，弱光条件下保藏。具体步骤如下：将微藻接种于固体培养基上，15～30℃，持续光照，光照强度为20～100μmolphotonsm-2s-1，培养7～14d，无菌条件下将携带有微藻细胞的固体培养基风干，15～30℃，持续光照，光照强度20～100μmolphotonsm-2s-1条件下保藏。所述的微藻优选为淡水微藻或海洋微藻。所述的淡水微藻优选为绿球藻。所述的海洋微藻优选为海洋小球藻。当所述的微藻为淡水微藻时，所述的固体培养基为BG-11固体培养基，当所述的微藻为海洋微藻时，所述的固体培养基为F/2固体培养基。所述的固体培养基的厚度优选为2～3mm。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：1)本专利技术的微藻藻种长期保藏方法，适用于绝大部分的微藻种类，培养基具有广谱性。同时，该方法可以让微藻细胞在常温光照条件下，生长较慢，保藏时间延长。2)本专利技术的微藻藻种长期保藏方法，减少了培养基中水分的含量，且培养过程中利用透气膜封存样品，既能有效隔离污染，大大减小了滋生细菌和真菌的条件，又使细胞能正常呼吸。3)本专利技术的微藻藻种长期保藏方法，操作过程耗能小，不需要超低温抽真空脱水，藻细胞不会受到损伤，结构与功能不会被破坏，色素体完整，保藏过程中持续低水平的光合作用，细胞复苏方法简单。4)本专利技术的微藻藻种长期保藏方法，在运输过程中，较液体或者琼脂保藏的藻种样品不易损坏，也不用低温保藏的特殊条件，且样品体积小，重量轻，十分便捷。5)本专利技术的微藻藻种长期保藏方法，操作简单，不需要频繁传代，工作量大大减少，并且可以有效的保持细胞的活性及生物学特性，不易变异。本专利技术的微藻藻种长期保藏方法，具有操作简单，工作量小，保存时间长，不易污染，能很好的维持藻细胞活性及特性，易复苏，耗能低，运输便捷等优点，为实验及生产保藏微藻藻种具有非常重要的意义。附图说明：图1是保藏1年的绿球藻藻种；图2是保藏1年的绿球藻在新鲜固体培养基复培的状态；图3是保藏1年的绿球藻在新鲜液体培养基复培的状态；图4是保藏1年的海洋小球藻藻种；图5是保藏1年的海洋小球藻在新鲜固体培养基复培的状态；图6是保藏1年的海洋小球藻在新鲜液体培养基复培的状态。具体实施方式：以下实施例是对本专利技术的进一步说明本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微藻藻种长期保藏方法，其特征在于，将微藻接种于固体培养基上培养，无菌条件下将携带有微藻细胞的固体培养基风干，弱光条件下保藏。

【技术特征摘要】
1.一种微藻藻种长期保藏方法，其特征在于，将微藻接种于固体培养基上培养，无菌条件下将携带有微藻细胞的固体培养基风干，弱光条件下保藏。2.根据权利要求1所述的微藻藻种长期保藏方法，其特征在于，具体步骤如下：将微藻接种于固体培养基上，15～30℃，持续光照，光照强度为20～100μmolphotonsm-2s-1，培养7～14d，无菌条件下将携带有微藻细胞的固体培养基风干，15～30℃，持续光照，光照强度20～100μmolphotonsm-2s-1条件下保藏。3.根据权利要求1或2所述的微藻藻种长期保...

【专利技术属性】
技术研发人员：许瑾，王忠铭，孔晓英，朱顺妮，尚常花，
申请(专利权)人：中国科学院广州能源研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44