角膜血管生成和角膜扩张疾病的动物模型，其制备方法，以及其使用方法技术

描述了通过向非人动物的眼睛施用芳香族化合物来制备角膜血管生成和角膜扩张疾病(诸如，圆锥形角膜)的非人动物模型的方法。还描述了角膜血管生成和角膜扩张疾病的动物模型，以及使用所述的非人动物模型来筛选调节角膜血管生成和角膜扩张疾病的化合物的方法。

An animal model of corneal angiogenesis and corneal ectasia, a method of making the same, and a method of use thereof

A method is described for preparing a non-human animal model of corneal angiogenesis and corneal ectasia, such as keratoconus, by applying aromatic compounds to the eyes of non-human animals. Also described are animal models of corneal angiogenesis and corneal ectasia, and methods for screening compounds that modulate corneal angiogenesis and corneal ectasia using the non-human animal model.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】角膜血管生成和角膜扩张疾病的动物模型，其制备方法，以及其使用方法专利
本专利技术涉及角膜疾病的非人动物模型，尤其是角膜血管生成和角膜扩张疾病(诸如圆锥形角膜)的动物模型。专利技术背景血管生成是由先前存在的血管形成新血管的生理过程。抑制血管生成作为一种治疗策略，特别是用于治疗肿瘤和癌症的概念已经讨论了几十年，并且现在被广泛认为是治疗一系列病理和疾病状态(其中血管增殖是一个部分)的有前途的方法。抗血管生成的策略已经不仅用于抗癌治疗，还用于治疗关节炎、视网膜病，心脏病和血液循环问题。因此，血管生成的实验动物模型对于研究血管的血管生成和生长、评估不同化合物对血管生成的效果、以及筛选化合物以鉴定具有抗血管生成或促血管生成活性的化合物非常重要。角膜被认为是体内血管生成的理想模型，因为它无血管，因此任何血管发生(即新血管的发生)通常都可直接归因于施用于眼睛的角膜区域的物质或化合物。因此，开发出来以用于研究体内血管生成的许多动物模型都是角膜血管生成动物模型。通常，通过将角膜囊或虹膜移植物移入动物眼睛中来制备这些动物模型。在角膜囊模型中，将血管生成的诱发剂，诸如肿瘤组织、细胞悬液或生长因子置入在角膜中形成的囊内，其诱发新血管的形成。然而，角膜囊的形成常常是一个很困难的操作，通常通过用手术刀进行层状剥离以在角膜中产生空间或“囊”，向其中引入血管生成的诱发剂。由于所述操作的外科性质，该操作常常产生并发症，包括与以下相关的问题：使用的麻醉剂，在剥离期间眼睛的前房穿孔，血管生成诱发剂准备的不充分，以及外科伤口自身或用于缝合外科伤口所用的缝合线导致的血管生成。此外，可因组织操作和缝合、以及对插入到角膜囊的血管生成诱发剂(其通常是外来物质)的响应而产生炎症反应。外来物质插入到眼睛中所引起的反应还可导致纤维化，即器官或组织中过量纤维结缔组织的形成。纤维化通常是修复或反应过程的结果。此外，就本专利技术人所知，目前尚无角膜扩张疾病(诸如圆锥形角膜)的动物模型。角膜扩张是由于角膜变薄或弱化而引起的角膜的进行性凸起，同时伴随着视力恶化、视力损伤、或二者皆有。圆锥形角膜是更常见的角膜扩张疾病的一种，具有如下特征：角膜从典型的圆形结构性形变为圆锥形，所述圆锥形的角膜从眼睛的角膜区向外突出或凸起。角膜扩张疾病动物模型将为体内研究这些疾病提供工具。专利技术概述因此，存在开发可克服与现有血管生成模型相关的某些缺点的新的体内血管生成动物模型的需求。还需要开发可用于研究这些疾病的角膜扩张疾病的动物模型。本专利技术通过提供可克服与现有体内血管生成模型相关的某些缺点的角膜血管生成动物模型来满足这种需求。本专利技术还提供了角膜扩张疾病(诸如圆锥形角膜)的动物模型。在一个总的方面，本专利技术涉及一种制备角膜血管生成非人动物模型的方法，所述方法包括向非人动物的至少一只眼睛的角膜施用有效量的式(I)芳香族化合物：其中，R选自下组：羟基、卤素、烷基、烷氧基、和氨基，并且n为0、1、2、3、4、5、或6。在本专利技术所述的一种制备角膜血管生成非人动物模型方法的一个具体实施方式中，所述施用的式(I)芳香族化合物的有效量为约1μmol到约70μmol。在另一个总的方面，本专利技术涉及一种制备角膜扩张疾病非人动物模型的方法，所述方法包括：向非人动物的至少一只眼睛的角膜施用有效量的式(I)芳香族化合物：其中，R选自下组：羟基、卤素、烷基、烷氧基、和氨基，并且n为0、1、2、3、4、5、或6。在本专利技术所述的一种制备角膜扩张疾病非人动物模型方法的一个具体实施方式中，所述式(I)芳香族化合物的有效量为约30μmol到约85μmol。在另一总的方面，本专利技术涉及一种筛选调节角膜血管生成或角膜扩张疾病的化合物的方法，所述方法包括：(i)用下述方法制备角膜血管生成或角膜扩张疾病的非人动物模型，所述方法包括：向非人动物的至少一只眼睛的角膜施用有效量的式(I)芳香族化合物：(ii)向非人动物模型的所述至少一只眼睛施用测试化合物；和(iii)确定所述测试化合物对以下至少之一的影响：所述至少一只眼睛的角膜内的血管生长和角膜的结构性形变，其中R选自下组：羟基、卤素、烷基、烷氧基、和氨基，并且n为0、1、2、3、4、5、或6。本专利技术的其他方面涉及用本专利技术的方法制备的角膜血管生成和圆锥形角膜的非人动物模型。在本专利技术特别优选的实施方式中，所述式(I)芳香族化合物为苯或苯酚。在另一个总的方面，本专利技术涉及一种鉴定对人类健康有害的物质的方法，所述方法包括：(i)向非人动物的至少一只眼睛的角膜施用测试物质；和(ii)确定所述测试物质对以下至少之一的影响：角膜内的血管生长和角膜的结构性形变。本专利技术的一个或多个实施方式的细节列于以下说明中。其它特征和优点将从以下的详述、附图和所附权利要求书中明显得出。附图的简要说明结合附图阅读时，将更好地理解前述
技术实现思路
以及本专利技术的以下详述。为了阐述本专利技术，在附图中示出了目前优选的实施例。然而，应理解，本专利技术不限于附图所示和在本专利技术的以下详述中所描述的确切的排列和手段。在附图中：图1A、1B和1C显示了用3.0M苯酚溶液处理威斯塔大鼠(Wistarrat)右眼前后的摄影图像；图1A：施用苯酚前的右眼的摄影图像；以及图1B：单次表面局部施用3.0M苯酚溶液(10μl)后3周的右眼摄影图像，并且插图示意性显示了角膜中观察到的血管生长；图1C：单次表面局部施用3.0M苯酚溶液(10μl)后8周，用苏木精和曙红染色剂染色的角膜上皮膜的切片图；图2A、2B和2C显示了施用苯溶液15天后，单次施用不同浓度的苯溶液处理威斯塔大鼠右眼的摄影图像；图2A：用4.0M苯溶液(10μl)处理的眼；图2B：用6.0M苯溶液(10μl)处理的眼；和图2C：用7.0M苯溶液(10μl)处理的眼；和图3显示了施用7.0M苯的水溶液后15天的威斯塔大鼠的眼睛摄影图像。专利技术详述本文提及的所有专利和出版物都通过引用的方式并入本文。除非另有定义，否则本文所用的所有技术性和科学性术语是本专利技术相关领域技术人员普遍理解的相同含义。否则，本文所用的某些术语具有如说明书中所阐述的含义。需注意，如本文和附属的权利要求所用，单数形式的“一(a)”、“一个(an)”、以及“该”包括复数引用，除非上下文另有明确的说明。如本文所用，术语“非人动物”是指任何动物，最优选哺乳动物，其不是人。哺乳动物的实例包括牛、狗、猫、马、猪、猴、绵羊和啮齿动物。啮齿动物的实例包括大鼠、小鼠、兔和豚鼠。优选地，非人动物是选自大鼠、小鼠、兔和豚鼠的啮齿动物，更优选大鼠。如本文所用，术语“角膜”指覆盖虹膜、瞳孔和前房的眼睛前部的透明组织。所述角膜是无血管的，意味着它通常没有血管。所述角膜还通常为圆形。如本文所用，术语“血管生成”和“新血管形成”指由先前存在的血管形成新血管的生理过程。如本文所用，术语“角膜血管生成”和“角膜新血管形成”指角膜内一个或多个血管的生长。由于所述角膜无血管，即不含有任何血管，因而角膜内的任何新血管通常起因于来自眼睛的角膜缘血管丛区的血管生长至角膜中。如本文所用，术语“纤维化”指器官或组织中的纤维结缔组织的形成，通常为修复或再生过程的结果。所述纤维结缔组织可为疤痕组织。如本文所用，术语“角膜扩张”和“角膜扩张疾病”指角膜的非炎性疾病，其特征为，角膜的不规则性导本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备角膜血管生成非人动物模型的方法，所述方法包括向非人动物的至少一只眼睛的角膜施用有效量的式(I)芳香族化合物：

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.03 US 62/007,1401.一种制备角膜血管生成非人动物模型的方法，所述方法包括向非人动物的至少一只眼睛的角膜施用有效量的式(I)芳香族化合物：其中，R选自下组：羟基、卤素、烷基、烷氧基、和氨基，并且n为0、1、2、3、4、5、或6。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述施用的式(I)芳香族化合物的有效量为约1μmol－约70μmol。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述式(I)芳香族化合物为苯(n为0)或苯酚(R为羟基，且n为1)。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述非人动物为啮齿动物。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，以水性媒介物的形式施用所述式(I)芳香族化合物。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括向所述至少一只眼睛施用麻醉剂。7.一种用权利要求1所述的方法制备的角膜血管生成非人动物模型，其特征在于，所述非人动物模型在角膜中基本没有纤维化。8.一种制备角膜扩张疾病非人动物模型的方法，所述方法包括向非人动物的至少一只眼睛的角膜施用有效量的式(I)芳香族化合物：其中，R选自下组：羟基、卤素、烷基、烷氧基、和氨基，并且n为0、1、2、3、4、5、或6。9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述施用的式(I)芳香族化合物的有效量为约30μmol－约85μmol。10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述式(I)芳香族化合物为苯(n为0)或苯酚(R为羟基，且n为1)。11.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述非人动物为啮齿...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·索利斯赫雷拉，
申请(专利权)人：A·索利斯赫雷拉，
类型：发明
国别省市：墨西哥,MX