本发明专利技术涉及ＧＤＦ－９和ＧＤＦ－９Ｂ分子中具有功能显著性的新的结合结构域，并涉及与其相互作用以调节这些分子的生物活性来改变哺乳动物卵巢功能和排卵率的激动剂和拮抗剂。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】调节排卵专利
本专利技术涉及鉴定GDF-9和GDF-9B分子上具有功能显著性的新结构域， 和排卵率的激动剂和拮抗剂。 专利技术背景GDF-9和GDF-9B (也称为BMP15)在发育卵泡的卵母细胞中表达并对 哺乳动物繁殖力起着作用(Fitzpatrick等，1998)。 GDF9是转化生长因子|3 (TGFI3)超家族的成员(McPherron和Lee， 1993),其在来自卵泡发育初级阶 段的卵母细胞中表达，直到排卵(McGrath等，1995; Laitinen等，1998)。 GDF9B与GDF9密切相关(Dube等，1998; Laitinen等，1998)，并在小鼠 卵母细胞中与GDF9同时期表达，但在人初级卵泡中稍晚于GDF9表达。在 卵巢中，GDF9和GDF9B现在已经显示出能在人(Aaltonen等，1999)、啮齿 动物(Laitinen等，1998; Dube等，1998; Jaatinen等，1999)、反刍动物 (Bodensteiner等，1999; Bodensteiner等，2000; Galloway等，2000)和有袋 类动物(Eckery等，2002)的发育卵母细胞中表达。在绵羊中，在原始卵泡中 可见到GDF9的表达，而GDF9B在初级卵泡中表达(Bodensteiner等，1999; Galloway等，2000)。GDF9和GDF9B,像TGF(3家族的大多数其它成员 一样，由包含信号 肽、原区域和作为生物活性肽的C-末端成熟区域的前原肽编码。通过细胞 内弗林蛋白酶样蛋白酶将成熟区域从原区域上裂解下来，裂解发生在保守 的弗林蛋白酶裂解位点上。TGF(3超家族的大多数成员在二聚体时有生物活 性，虽然GDF9和GDF9B不包含该家族几乎所有成员中都能见到的进行共 价链内二硫键连接的半胱氨酸分子，但是这些分子被认为在二聚体时有生 物活性(Galloway等，2000; Yan等，2001)。可是不清楚有生理活性的二聚 体是同二聚体(GDF9-GDF9和 GDF9B-GDF9B)还是异二聚体 (GDF9-GDF9B),或者所有三种二聚体形式都起作用。基于以上模型已假定 GDF9同二聚体在小鼠中起更重要的作用，而在绵羊中GDF9B同二聚体最 有生物活性(Yan等，2001)。不清楚是否这些差异与绵羊是单排卵动物(每 个周期通常仅成熟一个卵)、而鼠是多排卵的事实有关。清楚的是，GDF9 和GDF9B都在控制和保持哺乳动物的繁殖力中起着关键的作用，而且理解 它们的作用性质对开发疗法来说是必需的。Jeffery等(2003 )使用了生物信息学工具(GoCore)在许多不同TGF-卩 家族成员中分析保守的区域，并在不同物种中针对GDF-9和GDF-9B分析， 尝试着鉴定具有功能显著性的区域。可是，该研究没有将鉴定为可能功能 显著性位点的区域与体内调节排卯的效果关联起来。本专利技术的目的是鉴定GDF-9和/或GDF-9B分子上具有功能显著性的结 构域，并鉴定与这些结构域相互作用或模拟这些结构域以调节它们的生物 活性从而体内调节哺乳动物的卵巢功能和排卵率的激动剂和拮抗剂；和/或 向公众提供有用的选择。用于本说明书和权利要求书的术语"包含"指"至少部分由...组成"，就是 说当解释包括该术语的独立权利要求时，每个权利要求中在该术语之后的 特征都需要出现，但其他特征也可以出现。专利技术简述本专利技术基于鉴定GDF-9和GDF-9B分子上具有功能显著性的新结构 域，并涉及与其相互作用的激动剂和拮抗剂。更具体地，本专利技术基于对GDF-9和/或GDF-9B的推定的I型和II型受 体结合结构域和GDF-9和/或GDF-9B的推定的二聚结合结构域的鉴定和表 征，并涉及与其相互作用的激动剂和拮抗剂。本专利技术针对GDF-9的推定的I型受体结合结构域，其包含氨基酸序列(X)32ECE(X)10LKW(X)2WI(X)16RAVGHRY(X)6M(X)2NI(X)2EK(X)33Y (SEQ ID NO: 1);其中当GDF-9分子处于三维三级结构时，氨基酸(除了 X 以外)形成结合结构域。本专利技术进一步提供了 GDF-9的推定的II型受体结合结构域，其包含氨 基酸序列(X)51IVAPH(X)Y(X)47SPLSVL(X)8AY(X)6I (SEQ ID NO: 2);其中当GDF-9分子处于三维三级结构时，氨基酸(除了 X以外)形成结合结构域。本专利技术进一步提供了 GDF-9的推定的二聚结合结构域，其包含氨基酸 序列(X)26F(X) F(X)L(X)4L(X)W(X)9Y(X)PRYC(X)14PVHT(X)VQ(X)2I(X)7VP( X)PSCVP(X)2Y (X)20DM(X)A(X)5R (SEQ ID NO: 3);其中当GDF-9分子处于三维三级结构时，氨基酸(除了 X以外)形成二 聚结合结构域。SEQIDNO: 1、 2和3中的X表示图1中所示的GDF-9序列中出现的 氨基酸残基。X氨基酸不形成本专利技术推定的结合结构域的部分。除了 X以 外的氨基酸符号与下表1给出的单字码一致。.本专利技术进一步提供了激动剂或拮抗剂，其能与选自包含SEQIDNO: 1、 SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3的组的推定的GDF-9结合结构域中 一个或 多个相互作用。激动剂或拮抗剂优选是包含SEQIDNO: 1、 SEQIDNO: 2或SEQ ID NO: 3的至少5个连续氨基酸的肽，或其功能衍生物、同源物、类似物或 模拟物，或与其结合的抗体或抗体片段。优选所述肽是SEQIDNO: 1、 SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3的至少8个、至少10个、至少12个、至少14 个、至少16个、至少18个或至少20个连续氨基酸，或其功能衍生物、同 源物、类似物或模拟物，或与其结合的抗体或抗体片段。本专利技术的肽优选 相邻于或包含推定的结合结构域的至少一个氨基酸。最优选激动剂或拮抗剂包含选自下组的一种或多种肽C(GG)PRAVGHRYGSPVHTM (SEQ ID NO: 4)FSQLKWDNWIVA(C) (SEQ ID NO: 5)C(GG)PRAVGHRYGS (SEQ ID NO: 6)SVPRPSCVPAKYS (SEQ ID NO: 7)GSIAYKEYE(C) (SEQ ID NO: 8);和AKYSPLSVLA(C) (SEQ ID NO:9);或其功能衍生物、同源物、类似物或模拟物，或与其结合的抗体或抗 体片段。括号中的氨基酸指可为结合目的而任选添加的并且不与GDF-9序列本 身一致的氨基酸。本专利技术也涉及GDF-9B的推定的I型受体结合结构域，其包含氨基酸序列(X)22QCS(X)10LGW(X)2WI(X)16RVLHYGL(X)6I(X)3L(X)2EL(X)33Y (SEQ ID NO: 10)其中当GDF-9B分子处于三维三级结构时，氨基酸(除了 X以外)形成结 合结构域。本专利技术还提供了 GDF-9B的推定的II型受体结合结构域，其包含氨基 酸序列(X)41IIAPH(X)Y(X)47VPISIL(X)8LY(X)6I (SEQ ID NO: 11)， 其中当GDF-9B分子处于本文档来自技高网...
【技术保护点】
ＧＤＦ－９的推定的Ⅰ型受体结合结构域，其包含氨基酸序列：（Ｘ）↓［３２］ＥＣＥ（Ｘ）↓［１０］ＬＫＷ（Ｘ）↓［２］ＷＩ（Ｘ）↓［１６］ＲＡＶＧＨＲＹ（Ｘ）↓［６］Ｍ（Ｘ）↓［２］ＮＩ（Ｘ）↓［２］ＥＫ（Ｘ）↓［３３］Ｙ（ＳＥＱＩ ＤＮＯ：１），其中当ＧＤＦ－９分子处于三维三级结构时，氨基酸（除了Ｘ以外）形成结合结构域。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：珍妮弗L朱恩格尔，肯尼思P麦克纳蒂，劳埃德G穆尔，罗伯特S鲍尔，
申请(专利权)人：农业研究有限公司，
类型：发明
国别省市：NZ[新西兰]
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