基于汞离子电荷载体的气相多肽阳离子的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了基于汞离子电荷载体的气相多肽阳离子的制备方法及应用，能够快速稳定的制备气相多肽阳离子，研究结果表明，制备的多肽阳离子能够比传统的碰撞裂解和电子捕获裂解能产生更多的结构信息碎片离子。其技术方案为：将多肽与汞盐混合制备成混合溶液，将所述混合溶液进行电喷雾离子化获得气相多肽母离子，采用电子捕获裂解和/或碰撞裂对气相多肽母离子进行处理获得碎片离子，即为基于汞离子电荷载体的气相多肽阳离子。

Preparation method and application of vapor phase polypeptide cation based on mercury ion charge carrier

The invention discloses a mercury ion charge carrier gas based on cationic polypeptide preparation method and application of rapid and stable preparation of gas phase cationic peptides, the results show that the cationic peptide preparation can be compared to the traditional collision cracking and electron capture dissociation can produce more structural information of fragment ion. The technical proposal is as follows: the mixed polypeptide with a mercury salt mixture solution, the mixed solution of electrospray ionization gas obtained by electron capture peptide parent ion, cracking and / or collision crack for gas phase peptide parent ion to obtain fragment ions, namely mercury ion charge carrier based on the gas phase cationic peptide.

【技术实现步骤摘要】
基于汞离子电荷载体的气相多肽阳离子的制备方法及应用
本专利技术涉及基于汞离子电荷载体的气相多肽阳离子的制备方法及应用。
技术介绍
基于质谱的分子离子活化技术的发展有利推动了生物分子结构确认。生物分子串联质谱所获得的结构信息取决于母离子和裂解技术的选择。对于同一种未知结构，多类型的母离子的选择能够为结构确认过程提供丰富的化学集团信息，有效地保证结构确认结果的准确性。通常情况下，母离子采用单或者多质子化，或者去质子化的负分子离子。其二级质谱技术采用碰撞裂解技术。传统的碰撞裂解技术往往只能使分子沿着低能垒通道裂解，获得结构信息有限；此外，碰撞裂解反应中由于存在可移动的质子，分子不能发生自由基诱导裂解，使得难以获得分子的特异性指纹图谱。气相多肽自由基阳离子和贫氢阳离子，分子内部不存在可移动质子，可以避免有效地由于分子裂解通道的局限性。然而，由于该类离子具有很强的反应活性，往往很难捕获其信号。如果能够实现气相多肽自由基阳离子的稳定信号，就能够进一步的获得其碎片离子，可以为多肽和蛋白质分子的结构确定提供丰富的碎片离子信息，促进未知准确序列结构的测定。传统的贫氢多肽阳离子的获得依靠激光和生色团的反应或者自由基驱动的均裂反应。前者依赖激光，而且要求生物分子本身可以引入生色集团；后者由于反应过程复杂，往往难以活得稳定的贫氢多肽自由基阳离子。因此，建立一种快速稳定的气相多肽阳离子的产生方法非常有必要。
技术实现思路
为克服现有技术的缺陷，本专利技术提供了基于汞离子电荷载体的气相多肽阳离子的制备方法，能够快速稳定的制备气相多肽阳离子，研究结果表明，制备的多肽阳离子能够比传统的碰撞裂解和电子捕获裂解能产生更多的结构信息碎片离子。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：基于汞离子电荷载体的气相多肽阳离子的制备方法，将多肽与汞盐混合制备成混合溶液，将所述混合溶液进行电喷雾离子化获得气相多肽母离子，采用电子捕获裂解和/或碰撞裂对气相多肽母离子进行处理获得碎片离子，即为基于汞离子电荷载体的气相多肽阳离子。本专利技术在引入汞离子作为电荷载体，屏蔽了质子作为电荷载体产生的裂解通道，获得了稳定的气相多肽阳离子信号，该方法产生的多肽阳离子比依靠激光、生色团标记以及金属配合物-多肽三元复合物的方法产生的阳离子稳定，利用该方法可以实现多肽结构确认，同步获得多肽与汞离子的结合位点，降低了传统的气相多肽阳离子生成所需要成本，操作简便，信号稳定。本专利技术的目的是为了获取一价气相多肽阳离子、二价气相多肽阳离子，或者同时获取一价气相多肽阳离子和二价气相多肽阳离子。所以，本专利技术通过电子捕获裂解获得一价气相多肽阳离子，通过碰撞裂解获得二价气相多肽阳离子，而通过碰撞裂解获得的二价气相多肽阳离子再经过电子捕获裂解可以进一步获得一价气相多肽阳离子。多肽和汞盐在溶剂中的溶解度并不相同，为了使多肽与汞盐能够混合均匀，本专利技术提供了一种多肽与汞盐混合的方法，将多肽配置成多肽溶液，再将汞盐加入至甲醇与去离子水的混合溶剂中配置成金属离子溶液，将多肽溶液与金属离子溶液混合后获得混合溶液。能够使多肽与汞盐混合均匀。为了使获得更符合条件的气相多肽母离子，本专利技术提供一种电喷雾离子化方法，采用纳升电喷雾对所述混合溶液进行处理，然后采用四级杆进行母离子选择。本专利技术的目的之二为提供了基于汞离子电荷载体的气相多肽阳离子。该气相多肽阳离子具有更多的结构信息。为了能够确认多肽的结构，本专利技术提供了上述气相多肽阳离子在分析多肽结构的应用。由于制备的气相多肽阳离子更稳定、结构信息更全面，因而采用该气相多肽阳离子分析相应的多肽结构更准确。本专利技术的目的之三为提供上述气相多肽阳离子分析多肽的方法，采用傅立叶变换离子回旋共振质谱仪对上述气相多肽阳离子进行信息采集获得碰撞裂解谱图和/或电子捕获裂解谱图，根据碰撞裂解谱图和/或电子捕获裂解谱图分析气相多肽阳离子的类型和归属，从而确认多肽结构。还能够获得汞离子与多肽的结合位点，从而为汞离子对多肽的毒性分析提供依据。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术的制备方法引入汞离子作为电荷载体，屏蔽了质子作为电荷载体产生的裂解通道，获得了稳定的气相多肽阳离子信号，该方法产生的多肽阳离子比依靠激光、生色团标记以及金属配合物-多肽三元复合物的方法产生的阳离子稳定，利用该方法可以实现多肽结构确认，同步获得多肽与汞离子的结合位点，降低了传统的气相多肽阳离子生成所需要成本，操作简便，信号稳定。本专利技术采用的多肽与汞盐混合的方法，能够使多肽与汞盐混合均匀，使汞离子与多肽的结合位点增多，从而获得更多更稳定的气相多肽阳离子。本专利技术制备的气相多肽阳离子具有更多的结构信息，采用该气相多肽阳离子对多肽的结构分析更准确。本专利技术制备的气相多肽阳离子不仅能够分析获得多肽的结构，还能够获得汞离子与多肽的结合位点，从而为汞离子对多肽的毒性分析提供依据。附图说明构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。图1为模型肽段1(RGGGWGGGR)和汞离子复合物的电子捕获裂解质谱图；图2为模型肽段2(RPPGFSPFR)和汞离子复合物的碰撞裂解质谱图；图3为模型肽段2(RPPGFSPFR)二价阳离子的碰撞裂解质谱图；图4为模型肽段2(RPPGFSPFR)二价阳离子的电子转移裂解质谱图；图5为模型肽段3(RAAAWAAAR)一价自由基阳离子的碰撞裂解质谱图。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。本专利技术中所述的多肽是α-氨基酸以肽链连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。例如模型肽段1(RGGGWGGGR，如SEQIDNO:1)、模型肽段2(RPPGFSPFR，如SEQIDNO:2)、模型肽段3(RAAAWAAAR，如SEQIDNO:3)或其他蛋白质水解的中间产物。本专利技术中所述的汞盐为阳离子为汞离子的化合物。例如硝酸汞(Hg(NO3)2)、硫酸汞(HgSO4)、溴化汞(HgBr2)等。本专利技术中所述的气相多肽母离子为通过电喷雾处理多肽与汞盐混合制备成的混合溶液获得的母离子。本专利技术中所述的母离子，又称作前体离子(precursorion)，可进一步发生分解反应产生碎片离子的离子。本专利技术中所述的去离子水为自然界的水去掉了钠、钙、铁、铜等元素的阳离子以及氯、溴等元素的阴离子后的水。正如
技术介绍
所介绍的，现有技术制备的贫氢多肽自由基阳离子反应过程复杂、稳定性较差，为解决上述技术问题，本专利技术提供了基于汞离子电荷载体的气相多肽阳离子的制备方法。本专利技术的一种典型的实施方式中，将多肽与汞盐混合制备成混合溶液，将所述混合溶液进行电喷雾离子化获得气相多肽母离子，采用电子捕获裂解和/或碰撞裂对气相多肽母离子进行处理获得碎本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于汞离子电荷载体的气相多肽阳离子的制备方法，其特征是，将多肽与汞盐混合制备成混合溶液，将所述混合溶液进行电喷雾离子化获得气相多肽母离子，采用电子捕获裂解和/或碰撞裂对气相多肽母离子进行处理获得碎片离子，即为基于汞离子电荷载体的气相多肽阳离子。

【技术特征摘要】
1.基于汞离子电荷载体的气相多肽阳离子的制备方法，其特征是，将多肽与汞盐混合制备成混合溶液，将所述混合溶液进行电喷雾离子化获得气相多肽母离子，采用电子捕获裂解和/或碰撞裂对气相多肽母离子进行处理获得碎片离子，即为基于汞离子电荷载体的气相多肽阳离子。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征是，将多肽配置成多肽溶液，再将汞盐加入至甲醇与去离子水的混合溶剂中配置成金属离子溶液，将多肽溶液与金属离子溶液混合后获得混合溶液。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征是，采用的去离子水的电阻大于18.2兆欧。4.如权利要求2所述的制备方法，其特征是，甲醇与去离子水的体积比为1:1。5.如权利要求1所述的制备方法，其特征是，采用纳升电喷雾对所述混合溶液进行处理，然后采用四级杆进行母...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈相峰，
申请(专利权)人：山东省分析测试中心，
类型：发明
国别省市：山东,37