本发明专利技术提供一种载体，优选单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）载体，其包括编码谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）蛋白的多聚核苷酸序列。本发明专利技术还提供这样的载体的储液以及包括这样的载体的药物组合物。本发明专利技术还提供治疗哺乳动物中的疼痛诸如脊髓损伤疼痛的方法，所述方法包括给哺乳动物施用有效治疗脊髓损伤疼痛的量的包括编码谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）蛋白的核苷酸序列的载体。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于治疗疼痛的方法和组合物。
技术介绍
脊髓损伤后的疼痛是不利地影响生活质量并且阻碍有效的康复的重 要问题。几乎患有脊髓损伤(SCI)的每一名患者都患有SCI疼痛。SCI疼痛 可以在损伤平面(level)或在损伤平面以下。对于每个人，疼痛在强度、频 率、发作持续时间和经历的疼痛类型上不同。经历的疼痛类型已经被患者 描述为麻刺感、麻木、疼痛、悸痛、灼痛或压痛。它通常描述在具体的机 体区域并且发生在机体的一侧或两侧。它可以是持续的或断续的，并且与 机体姿势或活动无关。慢性SCI疼痛可以在脊髓损伤时发生，或者在SCI后缓慢地发展几个 月或几年的时间。慢性SCI疼痛持续长期的时间，并且通常对常规疼痛治 疗反应不好。根据一些报道，多达90%的患有SCI的人还经历了慢性SCI 疼痛。对于患者，SCI疼痛的水平可以从只是小烦恼到难以忍受的范围。 己经描述了 SCI后的两类慢性疼痛。平面(at-levd)神经性SCI疼痛是指在 脊髓损伤位点附近的皮区。平面以下(below-level)神经性SCI疼痛是指在 脊髓损伤位点平面以下的皮区。前者通常在脊髓损伤的早期阶段存在，并 且随着时间过去而减轻，而后者逐渐发展，并且通常是药物治疗难以控制的。脊髓损伤后的慢性SCI疼痛是不利地影响生活质量并且阻碍有效的康 复的重要问题。SCI疼痛可以分类为肌肉骨骼或神经性疼痛。肌肉骨骼SCI疼痛由于 机体组织诸如骨骼、关节和肌肉的过度使用引起。它通常随着运动而加重， 并且随着休息而减轻。神经性SCI疼痛可能是由于神经系统对于疼痛的正常感觉的异常处理引起。例如，脊髓和大脑可以另外将正常感觉认为是疼痛。损伤平面的神经性SCI疼痛可能是由于对真实神经根的损伤或者对脊髓本身的损伤 引起。医生和其它保健专家可以将这叫作"部分传入神经阻滞(segmental deafferentiation)"或"带区疼痛(girdle zone pain)"。这种类型的神经性 SCI疼痛通常是两侧的，并且按照圆周模式，例如，从你的胃部环绕到你 的背部。如其它类型的慢性疼痛，这可以在初始脊髓损伤后的刚开始的几 周内发展，或者可以随着时间更加缓慢地发展。损伤平面以下的发散性神 经性SCI疼痛可能是由于己经发生在中枢神经系统的实际损伤引起。这种 SCI神经性疼痛通常与异常性疼痛(来自通常不是疼痛的事物的疼痛，例 如，光接触)或痛觉过敏(由通常引起轻微疼痛的事物引起的极度疼痛， 例如，大头针刺痛)有关。再现这种临床病症的主要特征的动物模型的建立已经允许鉴定损伤 的脊髓中的神经化学变化。在一种模型SCI模型中，实验室大鼠经受在 T13的脊髓的侧半切断。实验室大鼠在T13脊髓的侧半切断在双后肢半切 面以下产生两侧疼痛-相关的行为。SCI模型提供了检测SCI疼痛新型治 疗的独特的动物模型。在SCI后报道了脊髓中，氨基丁酸(GABA)-ergic抑制机制的机能减退 和降钙素基因相关肽(CGRP)的增加。在突触前和突触后都作用的GABA-介导的抑制作用，发挥对初级传入神经和次级脊髓丘脑束状神经元 (second-order spinothalamic tract neurons)之间疼痛神经传递的增强调控 作用。脊髓GABA-ergic神经传递的药理拮抗作用导致与在神经性SCI疼 痛中发现的相似的机械性超敏反应。GABA激动药物(例如，巴氯芬)核 准用于选择性神经性疼痛综合征的治疗，但是中枢神经系统中GABA受 体的普遍分布导致副作用，其加强了对施用巴氯芬的严重限制，即使当鞘内施用时，也是如此。先前已经证明，通过皮下接种递送的基于重组单纯疱疹病毒(HSV)的 载体可以用来表达所选的背根神经节(DRG)的神经元中的神经递质。构建表达脑啡肽原的HSV载体在炎症疼痛、神经性疼痛和由骨骼癌症引起的 疼痛的啮齿动物模型中产生局部疼痛-减轻作用。通常观察到SCI疼痛抗 阿片样物质治疗，但是它可以应答鞘内巴氯芬。其它的研究巳经证明，加工包含编码GAD基因的腺伴随病毒或疱疹 扩增子载体可以用来在转导细胞中表达GABA。然而，这些研究中的载体 是直接注射到大脑神经核中，但是不是用于疼痛模型或实验。目前，对于SCI疼痛没有始终成功的药物或手术治疗。目前的SCI 疼痛治疗包括阿片样物质和神经药物治疗。对于这些治疗的反应率通常受 到副作用的限制。不幸地，神经性SCI疼痛通常不对阿片样物质(例如， 吗啡)反应。在一些情形中，SCI疼痛也不与神经性药物治疗(例如，某 些抗惊厥药物或抗抑郁药物)反应。 一些医生推荐可以使得疼痛区域麻木 的神经根阻断剂。这种麻木作用只持续短时间。有时推荐另一种方法，进 行手术途径，诸如DREZ (背根进入区(dorsal root entry zone))、脊神经根 切断术或脊髓前侧柱切断术。这些方法最终使得SCI疼痛水平升高，并且 长期可能加重神经性SCI疼痛。外周神经性疼痛是另一种常见的并且难以治疗的多神经病或结构神 经损伤的并发症。阿片样物质相对无效，并且它们的应用受到副作用的限 制。已经证明，抗抑郁药物和抗惊厥药物在随机控制的试验中有效，但是 在不到一半的治疗患者中只提供50%的减轻作用。在神经性疼痛中潜在 的复杂机制中，局部神经损伤导致脊髓中GABAergic抑制性突触电流的 选择性丢失，这引起异常疼痛敏感性和神经性疼痛综合征的表型特征。由 于这些试剂的治疗机会不多，并且剂量受到副作用的限制，所以 GABAergic试剂还没有广泛用于治疗神经性疼痛。因此，存在对于治疗SCI和神经性疼痛的治疗方法的需求。专利技术简述本专利技术提供一种载体，优选地单纯疱疹病毒(HSV)载体，其包括编码谷氨酸脱羧酶(GAD)蛋白的多聚核苷酸序列。本专利技术还提供这样的载体的 储液和包括这样的载体的药物组合物。本专利技术还提供治疗哺乳动物中的疼 痛诸如脊髓损伤疼痛或外周神经性疼痛的方法，所述方法包括给哺乳动物施用有效治疗脊髓损伤疼痛的量的包括编码谷氨酸脱羧酶(GAD)蛋白的核酸序列的载体。这些优点，以及其它的创造性特征将从本专利技术的下述描 述和附图中显而易见。附图简述附图说明图1是可以用于本专利技术的示例性载体构建体的图示。图2是QHGAD67转导的图示，其通过爪垫接种增加腰部背根神经节 (DRG)中的GAD67 mRNA。在皮下接种30 jil 1 X 109 pfii/ml QHGAD67或 Q0ZHG到一个后爪后一周，从收集的L4-L6 DRG中提取总RNA (500 ng)， 通过实时PCR扩增，并且使用GAPDH作为标准物进行定量。描述了相 对于QOZHG-转导的神经节的量。平均值士标准误差平均值(SEM)， N = 6。图3表示来自腰部脊髓的背象限区的蛋白，其通过使用(3-肌动蛋白作 为内部标准物的蛋白质印迹而确定，并且通过相对光学密度进行定量。平 均值土SEM， N = 6， *P<0.05。在转导QHGAD67后增加了 GAD67-样免 疫反应性。图4A图示与对照或QOZHG-感染的细胞相比较，在QHGAD67-感染 的细胞中基本上增加的Y氨基丁酸(GABA)的量，Y氨基丁酸释放于以感染 复数(m.o丄)1体外转导的初级DRG神经元。如在材料和方法中所述那 样，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种包括非扩增子重组单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）的载体，所述单纯疱疹病毒包括编码谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）蛋白的多聚核苷酸序列，所述载体包括ＩＣＰ４、ＩＣＰ２７的延长的缺失以及ＵＬ５５的缺失。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：约瑟夫C格格廖索，戴维J芬克，达瑞恩沃尔夫，戴维克里斯基，
申请(专利权)人：匹兹堡大学高等教育联邦体系，美国退伍军人事务部，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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