广谱抗流感病毒拮抗肽鼻腔喷雾制剂及应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术应用领域，公开了一种广谱抗流感病毒拮抗肽鼻腔喷雾制剂，可预防和治疗流感病毒，包括禽流感病毒感染。此药物的优越性在于其特殊的组方配制和使用方法。所述的鼻腔喷雾制剂主要组分有：流感病毒ＮＡ抑制短肽为药物的主要活性成分，抑制流感病毒繁殖；多种细胞因子与抗病毒肽有明显的协同作用，以加强抗流感病毒肽的活性。天然多糖是粘膜粘附剂和稳定剂，可以增加药物在鼻腔上皮的停留时间并增加干扰素抗病毒效果。本发明专利技术中使用特殊的、定量的、鼻腔喷雾药物递送装置，可由患者自己将药物直接递送到鼻腔，使用方便，无痛苦。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种广谱抗流感病毒拮抗肽鼻腔喷雾制剂的研制，应用于预防和治 疗人流感病毒感染，属于药物制剂领域。
技术介绍
流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，具有很强的 传染性。流感流行病学特点是突然爆发，迅速蔓延，波及面广。每年的季节性流 感流行和周期性的流感大流行，严重危害人类健康。我国流感每年的发病率为10%-30%，流感每年在全球引起约5亿人患病，25-50万人死亡，造成巨大的经济损 失和疾病负担。WHO认为，如果发生新的流感大流行，全球将有200-700万人死亡。根据病毒抗原特性及其基因特性的不同，流感病毒分为A、 B、 C三型。A型流感 病毒根据H和N抗原不同，又分为许多亚型，H可分为16个亚型(H1 H16)， N有9 个亚型(N1 N9)。其中H1N1、 H3N2主要感染人类，其它许多亚型的自然宿主是多 种禽类和动物。其中对禽类危害最大的为H5、 H7和H9亚型毒株。 一般情况下，禽 流感病毒不会感染鸟类和猪以外的动物。但1997年香港首次报道发生18例H5N1人 禽流感感染病例，其中6例死亡，引起全球广泛关注。1997年以后，世界上又先后 几次发生了禽流感病毒感染人的事件。具有高致病性的H5N1、 H7N7、 H9N2、等禽流 感病毒， 一旦发生变异或与人的流感病毒发生重组可能会具有人与人的传播能力， 会导致人间禽流感流行，预示着禽流感病毒对人类己具有很大的潜在威胁。目前控制流感季节性流行和全球大流行的策略主要是每年进行疫苗免疫和抗流 感病毒药物的防治。由于流感病毒的抗原变异，加之在老年人、儿童和免疫缺陷的 人群中，疫苗往往不能产生有效的免疫保护。另外，对于一些新出现的抗原型别来 说(H5N1， H9N2)，现用疫苗的保护效果很小。因此，在面对流感大流行时，安全有 效的抗病毒药物可能是最重要的短期应对方法。因此，抗流感病毒的药物研究是十 分迫切的。目前，正式上市的抗流感病毒药分为两类离子通道阻断剂，神经氨酸酶抑制 剂。由于离子通道阻断剂(如金刚烷胺、金刚乙胺)容易引起耐药毒株和交叉耐药， 并对乙型流感无效，上述的缺点限制了此类药物的应用。由于离子通道阻断剂的上述缺点，神经氨酸酶抑制剂型药物得到了广泛的应用。 甲乙型流感病毒神经氨酸酶(neuraminidase, NA)又称唾液酸酶，由流感病毒RNA6 节段编码的454个氨基酸组成，分子量为50kD。 NA可以切断末端神经氨酸残基与临 近寡乳糖之间的a (2-6)或a (2-3)糖苷键，即切断病毒HA与宿主细胞之间连接的 神经氨酸残基，于是新合成的病毒粒子便能够以出芽方式从宿主细胞表面释放，进 而在呼吸道内继续扩散感染其他的细胞。由于新合成的子代病毒HA能够识别临近病 毒的神经氨酸残基并与之结合，致使子代病毒自我聚集而无法扩散。NA能够切断病 毒表面的神经氨酸残基，抑制子代病毒聚集，利于其扩散。NA还能够破坏呼吸道粘 蛋白中的神经氨酸残基，降低粘滞度，利于病毒穿过呼吸道粘液层进入上皮细胞。 另外，NA还与转化生长因子P (TGF-e)、白细胞介素(IL)和肿瘤坏死因子(TNF) 激活有关。因此，流感病毒的NA与病毒侵袭、复制、成熟和释放有关，抑制流感病 毒NA活性可以有效控制流感所引发的疾病。每个甲或乙型流感病毒粒子表面有大约 100个蘑菇状的NA四聚体分子，在每个亚单位表面的口袋状结构中都有NA活性位点， 并且在所有的甲、乙型流感病毒中均高度保守，因此NA抑制剂为广谱抗流感病毒药 物，是应对流感大流行的有效方法现在临床上获准使用的神经氨酸酶抑制剂有两种，分别是Zanamivir(扎那米韦， 粉剂雾化吸入剂)和0seltamivir (奥司他韦，商品名达菲，口服胶囊或冲服粉剂)， 在临床应用中显示了很好的预防和治疗作用，是目前世界卫生组织向世界各国推荐 的预防流感大流行的储备药物。但是"达菲"的生产周期长，生产一批达菲需要12个 月和10个阶段，其中3个阶段必须要由专业公司来承担。另外，达菲的价格不菲， 一个疗程5天需要IO片达菲，在市场上的售价为86.5美元，若达到理想效果必须 要服用达菲长达6周的时间，因此需要花费数百美元，这对于许多发展中国家的普 通百姓来说显然是一笔不小的开支。"达菲"的主要成分是从八角茴香中提炼出的莽 草酸。八角茴香是我国南亚热带地区的珍贵经济林树种，主要生长于我国广西等4 个省份，每年的3月至5月间收获，供应量极其有限。因此即使大规模提高生产能 力，但是因为原料供应短缺，其生产也受到很大制约。而且在人群中广泛应用时，流感病毒均可对此药产生一定程度的耐药性，加上 价格较高，生产时间长，不能满足预防流感/禽流感大流行的需要，所以使用新技术 开发有NA抑制活性的抗流感病毒新药是急需的、必要的。
技术实现思路
本说明书中使用的氨基酸縮写的含义如下K :赖氨酸S :丝氨酸L :亮氨酸R :精氨酸H :组氨酸N :天冬酰胺Q :谷氨酰胺P :脯氨酸W :色氨酸V :撷氨酸D :天冬氨酸I :异亮氨酸G :甘氨酸Y :酪氨酸T :苏氨酸本专利技术的目的在于提供一种流感病毒神经氨酸酶抑制多肽。本专利技术的又一目的在于提供一种流感病毒神经氨酸酶抑制多肽的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供一种广谱抗流感病毒拮抗肽鼻腔喷雾制剂。本专利技术的还一目的在于提供一种根据上述鼻腔喷雾制剂在制备预防和治疗抗流感病毒药物上的应用。本专利技术提供的一种流感病毒神经氨酸酶抑制多肽，其制备方法包括以下步骤a、 以流感病毒为靶分子，从噬菌体随机9、 10、 11、 12或15肽库中筛选流感病毒 拮抗多肽；b、 鉴定筛选出的拮抗多肽的神经氨酸酶抑制活性；c、 将鉴定后的拮抗多肽测序，合成共有序列，得到流感病毒神经氨酸酶抑制多肽。 其中，上述流感病毒为A型流感病毒、B型流感病毒，优选A型流感病毒，再优选A 型流感病毒中的N1、 N2亚型。上述的流感病毒神经氨酸酶抑制多肽是选自下列几种氨基酸序列或其同源序列的多 肽之一，WPKLHVHPRSWIHHF訓H冊raSHIQPPLQASL朋ISHKHNGKAWPLSLNILSTLYKWRMLKNKQIMIMKR皿KSMQP藤LLPIQMHMTMKMPRYPPRMESIPP環朋LS本专利技术还提供了一种流感病毒神经氨酸酶抑制多肽，其特征在于，所述流感病毒神经氨酸酶抑制多肽是选自下列几种氨基酸序列或其同源序列的多肽之一，WPKLHVHPRSWIHHFRPH■PHSHIQPPLQASLHHISHKHNGKAWPLSLNILSTLYKWRMLKNKQIMIMKR頂IKSMQPRMKLLPIQMHMTMKMPRYPPRMESIPP鹿HHLS本专利技术还提供了上述流感病毒神经氨酸酶抑制多肽的制备方法，其特征在于， 包括以下步骤a、 以流感病毒为靶分子，从噬菌体随机9、 10、 11、 12或15肽库中筛选流感病 毒拮抗多肽；b、 鉴定筛选出的拮抗多肽的神经氨酸酶抑制活性；c、 将鉴定后的拮抗多肽测序，合成共有序列，得到流感病毒神经氨酸酶抑制多肽。 此外，本专利技术又提供了一种广谱抗流感病毒拮抗肽鼻腔喷雾制剂，包括上述流感病毒神经氨酸酶抑制多肽、天然多糖和细胞因子。所述天然多糖为纤维素、淀粉、几丁质、壳聚糖或其衍生物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种流感病毒神经氨酸酶抑制多肽，其特征在于，所述流感病毒神经氨酸酶抑制多肽的制备方法包括：　　　　ａ、以流感病毒为靶分子，从噬菌体随机９、１０、１１、１２或１５肽库中筛选流感病毒拮抗多肽；　　　　ｂ、鉴定筛选出的拮抗多肽的神经氨酸酶抑制活性；　　　　ｃ、将鉴定后的拮抗多肽测序，合成共有序列，得到流感病毒神经氨酸酶抑制多肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：侯云德，匡治州，郑丽舒，
申请(专利权)人：北京金迪克生物技术研究所，北京远策药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]