一种鸡干扰素IFN‑λ与IFN‑α的融合蛋白制造技术

本发明专利技术属于一种生物工程技术领域干扰素融合制剂鸡λ、α干扰素基因融合表达及其生产方法和临床应用。该生物工程干扰素融合制剂通过提取CEF细胞总RNA，设计特异性引物，克隆鸡λ、α干扰素基因，通过互补疏水性柔性氨基酸接头将其融合，获得完整的鸡λ、α干扰素融合基因，将其克隆至19‑T载体使其大量克隆表达成功后，再使其连接pET‑32a载体大量表达；对产物鉴定，确定其在包涵体表达后，进行变性，纯化及复性；对其抗病毒活性检测以及临床应用效果评价。本发明专利技术成功构建了重组融合鸡λ、α干扰素原核表达质粒pET32a‑chIFN‑λ+α，实现了鸡λ、α干扰素在大肠杆菌原核表达系统上1:1融合表达。

Chicken interferon lambda IFN and IFN alpha fusion protein

The invention belongs to the technical field of biological engineering, and relates to the fusion expression of interferon fusion preparation, chicken lambda and interferon alpha, and the production method and the clinical application thereof. The preparation of biological engineering interferon fusion by extracting CEF cell total RNA, specific primers were designed, and a cloned chicken interferon gene by complementary hydrophobic amino acids of the flexible joint fusion, obtain complete chicken alpha interferon lambda, fusion gene, cloned into 19 T carrier to make a lot of their successful cloning and expression then, connecting the pET 32A vector expression; on the product identification, determine the degeneration in inclusion body after the expression, purification and renaturation; detection of its antiviral activity and clinical effect evaluation. The present invention successfully constructed recombinant chicken interferon alpha lambda, prokaryotic expression plasmid pET32a chIFN lambda + alpha, lambda, the chicken interferon alpha on expression of 1:1 fusion prokaryotic expression in Escherichia coli.

【技术实现步骤摘要】
一种鸡干扰素IFN-λ与IFN-α的融合蛋白
本专利技术属于生物工程
的基因融合表达，具体涉及一种融合鸡λ、α干扰素基因及其制备方法和应用。
技术介绍
干扰素(interferon,IFN)是一种在特定的诱导剂作用下，宿主细胞产生的一类具有广谱抗病毒、抗肿瘤和增强免疫功能的细胞因子，其本质为分泌性多功能糖蛋白。1957年被英国科学家lsaacs研究病毒间相互作用时首次发现，其本质为蛋白质，由病毒诱导产生，干扰病毒复制，限制病毒感染。根据干扰素来源，氨基酸序列及生物活性不同，干扰素被分为三大类，分别为Ⅰ型干扰素，包括IFN-α、IFN-β、IFN-δ、IFN-κ、IFN-ω和IFN-τ，其中IFN-α与IFN-β的研究比较成熟；Ⅱ型干扰素为IFN-γ，但其功能主要为调节免疫功能，抗病毒效应不强；Ⅲ型干扰素包括IFN-λ1(IL-29),IFN-λ2(IL-28A)，IFN-λ3(IL-28B)与2013年新发现的IFN-λ4。IFN-α属于Ⅰ型干扰素,由582个核酸构成，除去93个信号肽后，共编码162个氨基酸。不同种鸡IFN-α间相对保守，核苷酸同源性在99.3％以上。能够在大本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸡干扰素λ与α融合蛋白，其特征在于:鸡干扰素λ与α基因以同一载体在大肠杆菌中通过互补疏水性柔性氨基酸接头融合表达而成，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.一种鸡干扰素λ与α融合蛋白，其特征在于:鸡干扰素λ与α基因以同一载体在大肠杆菌中通过互补疏水性柔性氨基酸接头融合表达而成，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。2.如权利要求1所述的鸡干扰素λ与α的融合蛋白，其特征在于：通过以下步骤所制而成：A、引物设计根据Genbank提供的鸡IFN-λ的基因序列(其核苷酸序列如SEQIDNO:2所示)与IFN-α的基因序列(其核苷酸序列如SEQIDNO:3所示)，通过SignalP预测并除去信号肽，设计两对引物，分别在上下游插入EcoR1与Hind3两个酶切位点，为IFN-λ-F,IFN-λ-R1，IFN-α-F1，IFN-α-R。然后分别在IFN-λ的下游以及IFN-α上游设计2个含有互补疏水性柔性氨基酸接头的引物IFN-λ-R2与IFN-α-F2。序列如下：IFN-λ-F的序列如SEQIDNO:4所示；CCGGAATTCCAGGTCACCCCGAAGAAIFN-λ-R1的序列如SEQIDNO:5所示；CCCAAGCTTCTAAGTGCAATCCTCGCGCTGGGCIFN-λ-R2的序列如SEQIDNO:6所示；CTCCGCTACCGCCTCCACCAGAGCCTCCTCCACCAGTGCAATCCTCGCGCTGGGCIFN-α-F1的序列如SEQIDNO:7所示；CCGGAATTCTGCAACCACCTTCIFN-α-F2的序列如SEQIDNO:8所示；TCTGGTGGAGGCGGTAGCGGAGGCGGAGGGTCGTGCAACCACCTTCIFN-α-R的序列如SEQIDNO:9所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：任涛，丁诗月，谢鹏，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44