乙基羟基二降厚二烯炔酮在药物制备中的应用制造技术

本发明专利技术介绍乙基羟基二降孕二烯炔酮（１７α－乙炔基－１７β－羟基－１８－甲基－４，１５－雌二烯－３－酮）或具有１５，１６－双键的任何其他甾族化合物在制备药物中的应用，所述药物用于通过肿瘤生长因子β（ＴＧＦβ）蛋白的生长治疗可抑制的癌症，尤其是乳房癌。此外，还介绍了含有乙基羟基二降孕二烯炔酮或具有１５，１６－双键的任何其他甾族化合物和至少一种抗雌激素的药物用于通过肿瘤生长因子β蛋白的生长治疗可抑制的肿瘤。（*该技术在2010年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及乙基羟基二降孕二烯炔酮(17α-乙炔基-17β-羟基-18甲基-4，15-雌二烯-3-酮)或具有15，16-双键的任何其他甾族化合物的新的药物应用，更确切地说，涉及用于通过肿瘤生长因子β(TGFβ)蛋白(Spornetal.，1986，Science233，PP.532-534)的生长治疗可抑制的癌症的药物的制备，特别是用于治疗乳房癌的药物的制备。业已知道，三苯基-乙烯衍生物，如它莫西芬(Tamoxifen)类物质与雌激素具有很高的亲合力，并且可用作竞争性雌激素拮抗剂。因此，它们可用于防治雌激素受体阳性乳房癌(文献Pattersonetal.，1981，JapaneseJouralofCancerClinics，Supp.(November)，PP.157-183)。此外，还发现上述一类化合物可促使乳房癌细胞中TGFβ蛋白的合成(文献Knabbeetal.，1987，Cell，48，PP.417-428)。该类蛋白对细胞生长的影响取决于具体细胞的类型，例如TGFβ可刺激成纤维细胞的生长。但是必须指出，TGFβ对抑制乳房癌细胞的生长具有重要的作用，并且包括没有甾类激素受体的这类细胞。乳房癌通常呈多克隆状态，即由混合细胞群组成，具体地说是由含和不含甾类激素受体的细胞组成(文献Kingetal.，1985，CancerRes.45，PP.294-304;Horwitzetal.，1985，RecentProgressinHor-moneResearch41，PP.249-316)。可以认为，临床症明它莫西芬对乳房癌细胞的有利影响与因TGFβ的大量合成所引起的附加作用相联系的由雌激素受体所造成的直接拮抗作用相矛盾。至今除了它莫西芬及其化学上相近的化合物，还没有其他任何方法能够对TGFβ的合成施加(即增加)有利的影响。本专利技术的任务在于提供一种以上所述加速癌细胞中TGFβ合成的化合物的应用，并且还提供一种如它莫西芬那样能通过TGFβ的生长治疗可抑制的依赖于雌激素的肿瘤。业已发现，乙基羟基二降孕二烯炔酮(17α-乙炔基-17β-羟基-18-甲基-4，15-雌二烯-3-酮)或具有15，16-双键的任何其他甾族化合物出乎意料地比它莫西芬更能正影响TGFβ的合成，并且还发现，具有15，16-双键的任何其他甾族化合物也具有抑制作用。乙基羟基二降孕二烯炔酮或具有15，16-双键的任何其他甾族化合物作为一种独突的促孕素能够在体外明显抑制雌激素受体阳性癌细胞的生长，其抑制癌的生长的能力伴随着TGFβ的大量合成而同时出现。这种出乎意料的作用仅限于乙基羟基二降孕二烯炔酮或具有15，16-双键的任何其他甾族化合物。甚至与其非常相似的一种乙基羟基二降孕甾烯炔酮(D-(-)-17α-乙炔基-17β-羟基-18-甲基-4-雌烯-3-酮)也无类似的作用。按放射性受体测量方法测定体外TGFβ的结果列于表1，测量是用乙醇(0.1%)或分别用10nM地塞米松(9α-氟-16α-甲基-11β，17，21-三羟基-1，4-孕二烯-3，20-二酮)或雌二醇(作为对照)和各自用500nM促孕素3-酮-脱氧炔诺酮(17α-乙炔基-17β-羟基-18-甲基-11-亚甲基-4-雌烯-3-酮)，乙基羟基二降孕甾烯炔酮，乙酸羟甲孕酮(17β-乙酸基-6α-甲基-4-孕烯-3，20-二酮)，R5020(17α，21-二甲基-19-去甲-4，9-孕二烯-3，20-二酮)和乙基羟基二降孕二烯炔酮或具有15，16-双键的任何其他甾族化合物以及作为对比的它莫西芬或托兰米芬(Toremifen)处理T47D-乳房癌细胞。用所述试验物质的处理和对TGFβ的测定方法详述如下1.细胞的处理用于下述试验的细胞以两种不同的方法处理。方法1是筛选T47D和MCF细胞的方法，方法2是以T47D细胞系筛选乙基羟基二降孕二烯炔酮类似物(含15，16-双键的其他甾族化合物)。方法1将细胞置于含5%DCC-FCS的5ml无酚红培养基的烧瓶中(105/25cm2)，培养4天至30-40%汇合培养。单层培养的细胞用PBS洗涤2次，细胞用每瓶5ml SF培养基培养，该培养基含有2mM谷氨酰胺，0.2U/ml胰岛素，10ng/ml EGF，5μg/ml转铁蛋白，2μg/ml纤维结合素，1nM硒酸和0.5nM CuSO4。24小时后，用5ml含有试验药物的新鲜SF-培养基更换4次，补加1000X乙醇溶液(乙醇的最终浓度为0.1%)。36小时后，细胞已被标记，可用于测定DNA的合成。方法2按上述方法，将细胞置于5ml含5%DCC-FCS的无酚红培养基中，培养过夜。除去培养基，用5ml含有药物的SF培养基(同上)更换4次，细胞在药物存在下再继续培养6天，并在48小时和96小时时更换培养基/药物。6天后，细胞已被标记，可用于测定DNA的合成。上述两种方法均用下列技术标记细胞和沉淀DNA。即在最后2小时培养时，H-胸苷被酸化至1μCi/ml，细胞在37℃下培养。单层培养的细胞用冰冷的PBS洗涤2次，收集后压成碎片。再将细胞碎片悬浮在1ml水中，用超声(50W，6×10burst，在冰上)处理至用相差显微镜观察不到无损的细胞。取出600μl该均浆，加到600μl冰冷却的10%TCA，沉淀物在4℃下培养60分钟。在GF/C过滤器抽吸过滤下收集沉淀物，相继用20ml冰冷却的5%TCA和5ml冰冷却的甲醇洗涤，滤液在100℃下干燥10分钟后进行闪烁计数。以上方法摘自SteroidHormones.ApracticalApproach.EditedbyB.GreenandR.Leake.IRLPressOxford，1987，PP.216-217。＊SF＝无血清DCC-FCS＝葡聚糖炭处理的胎牛血清GF/C＝玻璃纤维滤器/C方法1T47D细胞乙醇对照100%10nME2127±18%10nMDex89±14%10nMDHT97±11%1uM3-酮-脱氧炔诺酮104±12%1uMMPA87±14%1uMR502079±9%1uM Tam＊58±11%1uM Ges＊＊36±7%(p＜0.001，与对照相比)MCF-7细胞乙醇对照100%10nME2158±27%10nMDex120±16%10nMDHT105±19%1uM3-酮-脱氧炔诺酮91±11%1uMMPA80±16%1uMR502084±9%1uM Tam＊47±6%1uM Ges＊＊44±8%(p＜0.001，与对照相比)方法2T47D细胞(n-16)的全部试验乙醇对照100%1uMZK3130513±5%1uMZK4839124±10%1uMZK376559±5%1uMZK3939315±4%1uM Ges＊＊18±5%ZK3130517α-氯乙炔基-17β-羟基-4，15-雌二烯-3-酮ZK4839117-羟基-4，15-甾二烯-3-酮ZK3765517α-氯乙炔基-17β-羟基-18-甲基-11-亚甲基-亚甲基-4，15-雌二烯-3-酮ZK3939317α-乙炔基-11β-氯-17β-羟基-18-甲基-4，15-雌二烯-3-酮＊Tam＝它莫西芬＊＊Ges＝乙基羟基二降孕二烯炔酮将T47D-细胞(Keydaretal.，1979，本文档来自技高网...

【技术保护点】
乙基羟基二降孕二烯炔酮（１７α－乙炔基－１７β－羟基－１８－甲基－４，１５－雌二烯－３－酮）或具有１５，１６－双键的任何其他甾族化合物在制备药物中的应用，该药物用于通过肿瘤生长因子β（ＴＧＦβ）蛋白的生长治疗可抑制的癌症。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：戴维亨德森，迈克尔包姆，安东尼阿德里安科列塔，
申请(专利权)人：先灵公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]