结合型马雌激素天然混合物的获取方法技术

本发明专利技术涉及用于获取含有结合型牝马雌激素的天然混合物的提取液的方法，其中通过固相提取法从妊娠牝马的尿液中获取结合型雌激素的混合物，该混合物中酚类尿容物和非结合型亲脂化合物被贫化，所述非结合型亲脂化合物包括非结合型类黄酮、非结合型异类黄酮、非结合型去甲类异戊二烯、非结合型甾族化合物，尤其是雄烷－和孕烷－甾族化合物，以及类似的非结合型化合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及结合型牝马雌激素的天然混合物的获取方法，该混合物中酚类尿容物和非结合型亲脂化合物被贫化，所述非结合型亲脂化合物包括非结合型类黄酮、非结合型异类黄酮、非结合型去甲类异戊二烯、非结合型甾族化合物，尤其是雄烷-和孕烷-甾族化合物，以及类似的非结合型化合物。雌激素在医学中用于激素替代疗法。尤其是将雌激素混合物用于治疗和预防妇女在自然绝经或人为绝经后出现的更年期症状。已经证明，结合型雌激素的天然混合物(例如存在于妊娠牝马尿液中的，以下被称为结合型牝马雌激素的天然混合物)对此特别有效且具有良好的耐受性。溶解在妊娠牝马尿液(＝pregnant mares urine，以下简称为“PMU”)中的固体的含量自然会在较大的范围内变动，一般为每升40-90克干物质。PMU的固体含量中，除尿素和其它常见的尿容物之外，酚类成份含量约为干物质的2-5重量％。这些酚类成份中有甲酚和以HPMF著称的二氢-3，4-双-2(3H)-呋喃酮。它们以游离或结合的形式存在。PMU中含有雌激素的天然混合物，其很大程度上以结合的形式例如以硫酸半酯-钠盐(以下简称为“硫酸盐”)存在。结合型雌激素的含量(以雌激素硫酸盐计算)为干物质的0.1-0.5重量％。此外在PMU的固体含量中还可以存在其它亲脂化合物，其含量可以在较大的范围内变化并且不可预见。这些亲脂化合物主要来源于作为饲料被妊娠牝马摄入的植物，主要包括各种类黄酮-、异类黄酮-、去甲类异戊二烯-衍生物和类似物质，例如7-羟基-4′-甲氧异黄酮、染料木黄酮、黄豆苷元、鸡豆黄素A、马尿酚(Equol)和香豆雌酚。这些原本植物来源的亲脂化合物可以在尿液中以结合或游离(非结合型)的形式存在。属于在PMU的固体含量中出现的亲脂成份，此外还有非结合型甾族化合物衍生物，在此尤其是雄烷-和孕烷甾族化合物，也称非结合型雌激素衍生物。含有结合型雌激素天然混合物的提取液，通常是采用固相提取法获得的，或者通过基于使用与水不相混合或仅仅少量混合的有机溶剂的各种液-液-萃取步骤的方法而获得。通常适宜的是，为使所获取的结合型雌激素天然混合物能够作为活性成份用于制药，必须使之满足特定的制药学规格，例如必须符合USP(美国药典)或欧洲药典制定的规格。如此，必须使结合型雌激素相对于干物质的含量保持在特定的临界值内。美国专利No.2,551,205和No.2,429,398描述了一种用于由PMU制备一种水溶性雌激素制剂的方法，其中首先经过在活性炭或其它适宜的吸附性材料上的吸附，用一种可与水相混合的有机溶剂例如吡啶进行洗脱，随即去除溶剂而获取一种水性浓缩物，其含有原始使用的PMU中的水溶性雌激素成份的绝大部分。在美国专利No.2,429,398中，将浓缩物用苯和/或乙醚萃取进一步提纯，而在美国专利No.2,551,205中描述的是，将浓缩物酸化至pH-值为2-6，优选为4-5，然后迅速用选自脂族、芳香族或脂环族的烃(例如己烷、苯、甲苯、环己烷)或氯代烃(例如氯仿、二氯乙烯、三氯乙烯、四氯化碳、氯苯)的与水几乎不相混合的有机溶剂进行萃取，以使不希望有的物质如脂肪、油、游离型酚类成份和非结合型甾族化合物通过转移至有机相而被去除。最后通过中和作用使水相稳定。美国专利No.2,551,205推荐，将获取的萃取液通过随后的萃取步骤和沉淀作用进一步提纯。总之，在实施美国专利No.2,551,205描述的方法后，所获取的产率仅仅约为所应用的浓缩物的雌激素成份的80％。美国专利No.2,565,115中描述了用丙酮由PMU提取结合型雌激素的方法。但是没有陈述所获取的雌激素级份的纯度。美国专利No.2,696,265所描述的方法是，首先将雌激素用脂族醇或酮，例如己醇、环己醇或环己酮进行萃取。雌激素进入有机相，随即被进一步提纯，此外还将含有雌激素的水相用盐酸调节至pH-值为4，并用二氯乙烯萃取。美国专利No.2,834,712公开了高纯度低毒性雌激素混合物的制备方法，其原理是采用多个独立的具有不同溶剂和不同pH-值设置的萃取步骤。其中需要应用大量溶剂如己烷和苯。例如在某一步骤中将已经提纯的浓缩物溶于水，用盐酸调节至pH-值约为5.0，用苯并随后用乙醚萃取，以去除酚类成份。国际专利申请书WO01/27134描述了一种由PMU萃取结合型雌激素的相对简单的方法在添加盐例如氯化钠后，将PMU用至少同等体积份的有机溶剂例如乙酸乙酯进行萃取，就此结合型雌激素进入有机相。将有机相分离并干燥，以获取提取液。WO01/27134没有陈述所获取的结合型雌激素提取液的纯度。然而以上所描述的和由现有技术已知的液-液-萃取方法过程中会出现许多问题，如产生大量泡沫、产生沉淀、形成乳浊液和差的相分离。一般需要诸多萃取步骤，而导致损耗并只能部分获取雌激素含量。而且这些萃取步骤还需要大量的部分有损健康的溶剂。此外在以上列举的专利文本中，既没有陈述在所获取的产物中非结合型亲脂成份(例如非结合型类黄酮-、异类黄酮-、去甲类异戊二烯-衍生物和类似的非结合型化合物或者非结合型甾族化合物尤其是雄烷-和孕烷-甾族化合物)的含量，也没有陈述这些成份的去除过程。所述由现有技术已知的方法，不是在产率方面或者在所获取的提取液的纯度方面(相对于干物质测量所获取的激素的总量)均不能提供满意的结果，就是需要诸多不同方法步骤和应用大量有机的和甚至部分根据毒理学观点是不适宜的溶剂。此外，由现有技术已知各种不同的固相提取方法，可用于获取酚类尿容物被高度贫化的结合型牝马雌激素的天然混合物。国际专利申请书WO98/08526如此描述了一种方法，其通过在一种半极性，尤其是在非离子型半极性的聚合物吸附树脂上进行的固相提取，可以获取酚类尿容物被贫化的、高度脱除甲酚和HPMF的、几乎完全含有PMU中的天然雌激素成份的混合物。国际专利申请书WO98/08526描述了一种类似的方法，在固相提取时采用硅胶作为吸附材料。还有中国专利申请书CN 1308083描述了一种应用含氰基的极性吸附性树脂的类似方法。另外US专利申请US 2002/0156303描述了一种方法，其中PMU在通过聚苯乙稀吸附树脂提纯之前，首先用一种碱性溶剂(Solvenz)处理并经过滤预先纯化。如此所获取的提取液适合于作为起始材料，用于制备所含活性成份来源于PMU的结合型雌激素天然混合物的药物。根据WO 98/08526或WO 98/08525的方法由PMU获取的结合型雌激素混合物通常可以达到所规定的制药学规格的要求，例如在相对于干物质的结合型雌激素含量方面所应遵守的临界值。特别是可以借助于其中所公开的方法获取酚类尿容物被贫化的、高度脱除甲酚和HPMF的产物。但是事实表明，在所获取的干物质中，除含有所需要的结合型雌激素成份外，还可能含有非结合型亲脂化合物。这些非结合型亲脂化合物例如包括各种非结合型类黄酮-、异类黄酮-、去甲类异戊二烯-衍生物及类似的非结合型化合物，例如7-羟基-4′-甲氧异黄酮、染料木黄酮、黄豆苷元、鸡豆黄素A、马尿酚和香豆雌酚，并且还包括非结合型甾族化合物，尤其是雄烷-和孕烷-甾族化合物，以及非结合型雌激素，在此所列举的并非囊括了全部可能性。由PMU所获取的结合型雌激素混合物中这些非结合型亲脂化合物的存在无法标准化，而游本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于从妊娠牝马的尿液中获取结合型雌激素的天然混合物的方法，该方法包括ａ）一种尿液，其为未脱除或脱除了粘液物质和固体物质的尿液、经浓缩的所述尿液的浓缩物或所述尿液经膜过滤而获得的经浓缩的尿滞留物，与一种用于吸附尿液中含有的结合型雌激素 的混合物的足够量的聚合物吸附树脂接触，并将被结合型雌激素的混合物加载的聚合物吸附树脂从剩余的尿液中分离，并且ｂ）被结合型雌激素的混合物加载的聚合物吸附树脂用一种ｐＨ－值调节到至少为１２．０的洗涤用水洗涤，并且ｃ）任选地进行中 间洗涤步骤，其中用水洗涤被结合型雌激素的混合物加载的聚合物吸附树脂，并且ｄ）将经洗涤的吸附树脂与一种用于解离所吸附的结合型雌激素的混合物的足够量的洗脱液接触，并且ｅ）从吸附树脂上分离含有结合型雌激素的天然混合物的洗出液并视需 要地浓缩，其特征在于，所获取的结合型牝马雌激素的天然混合物在酚类尿容物和非结合型亲脂化合物方面被贫化，所述非结合型亲脂化合物包括非结合型类黄酮、非结合型异类黄酮、非结合型去甲类异戊二烯、非结合型甾族化合物，尤其是雄烷－和孕烷 －甾族化合物，以及类似的非结合型化合物，且在方法步骤（ｄ）中作为洗脱液使用一种单相或两相－混合物，其含有（ｉ）水，任选地其ｐＨ－值被调节至碱性范围内，和（ｉｉ）至少一种适用于洗脱选自上述列举的非结合型亲脂化合物的、与 水不可混溶或几乎不可混溶的有机溶剂，和任选地（ｉｉｉ）至少一种与水可混溶的有机溶剂，其选自与水可混溶的醚类、低级链烷醇类和低级脂族酮类，以及前述溶剂的混合物，并且如果在方法步骤ｅ）中所获取的、任选地经浓缩的洗 出液为一种两相混合物，则在方法步骤ｆ）中将所获取的由两相构成的洗出液中的水相分离，并且获取含有结合型雌激素的天然混合物的水相并将其任选地浓缩。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：HH拉斯彻，K维尔布兰德，S班沙巴驰，
申请(专利权)人：索尔瓦药物有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]