类胰岛素生长因子受体基因的反义核酸的抑癌作用制造技术

本发明专利技术涉及用化学方法合成系列序列特异的反义核酸，其碱基排列顺序与人类Ⅰ型类胰岛素生长因子（ＩＧＦ－１）受体基因的一段序列互补，这些核酸可在细胞内特异地与人类Ⅰ型类胰岛素生长因子（ＩＧＦ－１）受体基因的信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）杂交，从而阻止人类Ⅰ型类胰岛素生长因子（ＩＧＦ－１）受体基因的表达，达到抑制肿瘤细胞增长的作用。这些反义核酸可用来发展成为抑制人体肿瘤生长的药物。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抑制人体肿瘤细胞生长的反义核酸，具体地讲涉及抑制人体肿瘤细胞生长的反义核酸及含有所述反义核酸的组合物，以及将所述反义核酸用于制备抗肿瘤药物的用途。很多实验证明，Ⅰ型类胰岛素生长因子(Insulin like Growth factor-I，以下简称(IGF-1)的受体在细胞生长调控和恶性转化方面具有十分重要的作用，并且它是细胞调亡的一个重要的抑制剂。(Baserga,R.et.al.Cancer Res,55:249-252,1995)；(Macaulay,V.M.et.al Br.J.Cancer,65:311-320,1992)。IGF-1受体是一个结合在细胞膜上的异型四聚体受体，带有内在的酪氨酸激酶活性。在很多种人类肿瘤中都有高水平的表达，在SV40T抗原、牛乳头瘤病毒激活ras、raf、和v-src基因的转化中都需要它的表达。(Baserga,R.Cell,79:927-930,1994)缺乏IGF-1受体的细胞延长其细胞周期动力学，IGF-1受体缺乏小鼠显示出严重的生长减缓。(Sell,C,et,al.Mol.cell.Biol.14:3604-3612,1994)，相反的。过量表达IGF-1受体的成纤维细胞在体外培养时对生长因子的需求降低，并且显示出对细胞调亡敏感性的降低(Sell.et.al.Mol,cell.Biol.14:3604-3612,1994)。当IGF-1受体被激活后，它传导的信号作用于最少以下四组效应物(I)RS1,IRS2,Grb10和Shc.(Waters,S.et.al.,Mol.Cel.Biol,15:2791-2799,1995)其它下游效应物有ras、raf-1和丝裂原激活蛋白激酶，另有证据显示，IGF-1受体是另外一条依赖于ras的信号通道的起始物(Baserga,R.P.N.A.S.USA,91:2191-2185,1994)，因此，抑制IGF-1受体活性，可以抑制肿瘤细胞的生长，引起肿瘤细胞的分化。具有特异性抑制IGF-1受体活性的物质，可以发展成为治疗肿瘤的药物。研究证明利用反义核酸抑制原癌基因的表达，可以达到抑制肿瘤细胞生长的目的。(Holt.et.al.Mol.cell.Biol,1988,8,963-973)反义核酸是一小段人工合成的DNA片段，它的碱基排列顺序与人们选择作为阻断目标的基因的某一段互补，依照碱基配对法则可以与存在于细胞质中的特定基因的信使核糖核酸(mRNA)结合，阻断特定基因的mRNA翻译其编码的蛋白质分子。在细胞内，一个拷贝的基因会产生200-300条mRNA，这200-300条mRNA会翻译出10万个有生物学功能的蛋白质分子。传统的药物一般是作用于具有生物学功能的蛋白质分子。而反义核酸是作用于编码产生的蛋白质分子的mRNA，所以与传统药物相比，反义核酸药物的作用具有高效性。传统药物对其所作用的蛋白质分子的识别，一般是识别其空间构型上的一两个位点，特异性不易达到很高。而反义核酸是通过碱基配对的原理来识别其所作用的靶基因，从理论上讲，一条长度为17个碱基的反义核酸分子，其碱基排列顺序在人体全部基因中即是唯一的，所以，长度超过十七个碱基的反义核酸分子，其在人体基因中的结合位点也是唯一的。这就使反义核酸具有高度的特异性。毒理学研究也证明，反义核酸在体内具有很低的毒性。因此，运用反义核酸，阻断某些肿瘤相关基因的表达，将会对肿瘤治疗具有相大的意义。本专利技术目的之一是提供一种反义寡聚脱氧核糖(DNA)或核糖(RNA)序列，其特征在于可特异性结合IGF-1受体基因mRNA的不同区域。本专利技术的另一个目的是提供含有本专利技术反义核酸的药物组合物。本专利技术的另一个目的是提供了本专利技术反义核酸用于制备抗肿瘤药物的用途。本专利技术以IGF-1受体基因mRNA为攻击目标，设计了一系列反义核酸。采用亚磷酰胺固相合成法合成了相应的反义核酸分子，其长度均为20个核苷酸的残基。采用人体肺瘤细胞株A549作为筛选体系，对合成的反义核酸进行初步筛选。筛选结果表明，其中9个寡聚反义核酸均具有不同程度的抑制人体肿瘤的生长特性，将它们分别定名为Pac80、Pac81、Pac83、Pac84、Pac85、Pac86、Pac87、Pac88、Pac89，其中Pac85具有最高的抑制人体肿瘤细胞生长的活性。具有抑制人体肿瘤细胞生长活性的PAC系列寡聚反义核酸碱基组成及顺序如下所示PAC80: 5’-TTA TTT GGG ATG AAA TTC CC-3’ 20merPAC81: 5’-GGA GCC AGA CTT CAT TCC TT-3’ 20merPAC83: 5’-TCC AGG ATC AGG GAC CAG TC-3’ 20merPAC84: 5’-TGA GCA AAT TGC CCT TGA AG-3’ 20merPAC85: 5’-CTC CAT GCG GTA AAT TTC GG-3’ 20merPAC86: 5’-CGC TGC GCG TGC GCA CAC GT-3’ 20merPAC87: 5’-CAG CAA GGG CAG AAC TGA AG-3’ 20merPAC88: 5’-GCT GGA CTT GTG GCA ATT AT-3’ 20merPAC89: 5’-TCA TGT CCC TAG AAA GGT GA-3’ 20mer设立阳性对照两个，是PAC14C和pac82，序列如下，PAC14c:5’-TCC CGC CTG TGA CAT GCA TT-3’ 20merPAC82:5’-TCC TCC GGA GCC AGA CTT-3’ 18mer设立阴性对照一个，Pac23b序列如下Pac23b:5’-CAC GGT GCG TCG ACG CAC TA-3’ 20mer以上反义核酸除Pac82为18个核苷酸残基长度外，其余均是长为20个核苷酸残基并经过硫代修饰的寡聚核苷酸，攻击目标为IGF-1受体基因的信使核糖核酸mRNA，它们可在细胞质中与IGF-1受体基因的信使核糖核酸特异性结合，阻止IGF-1受体的产生，从而抑制了IGF-1受体的功能，最终抑制了肿瘤细胞的生长。反义核酸是通过与目标基因的mRNA特异性杂交来发挥其生物学功能的，从核酸杂交的特性看，RNA与mRNA杂交的亲合力比DNA与mRNA杂交的亲和力要高，从而在药用方面具有更大的价值，但是由于目前合成RNA的成本远高于合成DNA的成本，考虑到临床应用的成本要求，目前作为临床应用实验的反义核酸药物均为寡聚脱氧核糖(DNA)，合成的RNA成本有可能降低，可能会在临床上采用反义寡聚核糖RNA或核糖RNA单体和脱氧核糖DNA单体嵌合相连而成的反义核酸作为药用。反义核酸的生物学活性是序列特异性的，互补于某一基因特定的位点的反义核酸其互补的长度不同，生物学活性高低也不同，一般讲来，反义核酸与目标基因互补长一些。生物学活性会高，但较长的反义核酸其合成成本会高很多，所以作为药用的目的反义核酸。研究者均会同时考虑成本和药用活性，选取一个合适的长度，本专利技术中筛选出的反义核酸长度均为20个碱基。当然延长或缩短一至数个碱基而互补于同一基因位点的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种寡聚反义脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）或核糖核酸（ＲＮＡ），其特征在于可特异性结合人类Ⅰ型类胰岛素生长因子（ＩＧＦ－１）受体基因的不同区域，所述反义核酸序列选自（１）．ＰＡＣ８０：５’－ＴＴＡ ＴＴＴ ＧＧＧ ＡＴＧ ＡＡＡ ＴＴＣ ＣＣ－ ３’（２）．ＰＡＣ８１：５’－ＧＧＡ ＧＣＣ ＡＧＡ ＣＴＴ ＣＡＴ ＴＣＣ ＴＴ－３’（３）．ＰＡＣ８３：５’－ＴＣＣ ＡＧＧ ＡＴＣ ＡＧＧ ＧＡＣ ＣＡＧ ＴＣ－３’（４）．ＰＡＣ８４：５’－ＴＧＡ ＧＣＡ ＡＡＴ ＴＧＣ ＣＣＴ ＴＧＡ ＡＧ－３’（５）．ＰＡＣ８５：５’－ＣＴＣ ＣＡＴ ＧＣＧ ＧＴＡ ＡＡＴ ＴＴＣ ＧＧ－３’（６）．ＰＡＣ８６：５’－ＣＧＣ ＴＧＣ ＧＣＧ ＴＧＣ ＧＣＡ ＣＡＣ ＧＴ－３’（７）．ＰＡＣ８７：５’－ＣＡＧ ＣＡＡ ＧＧＧ ＣＡＧ ＡＡＣ ＴＧＡ ＡＧ－３’（８）．ＰＡＣ８８：５’－ＧＣＴ ＧＧＡ ＣＴＴ ＧＴＧ ＧＣＡ ＡＴＴ ＡＴ－３’（９）．ＰＡＣ８９：５’－ＴＣＡ ＴＧＴ ＣＣＣ ＴＡＧ ＡＡＡ ＧＧＴ ＧＡ－３’及其同源 序列。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡前进，梁旻，
申请(专利权)人：北京金赛狮生物制药技术开发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]