一种海洋真菌爪曲霉溴代缩酚环酸醚类化合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种海洋真菌爪曲霉溴代缩酚环酸醚类化合物及其制备方法和应用。所述海洋真菌爪曲霉溴代缩酚环酸醚类化合物的化学结构式如下式（Ⅰ）所示：

A marine fungus Aspergillus unguis brominated phenol reduction tranexamic acid ether compound and preparation method and application thereof

The invention discloses a marine fungus Aspergillus unguis brominated phenol reduction tranexamic acid ether compound and preparation method and application thereof. The marine fungus Aspergillus unguis brominated chemical structure of Depsides tranexamic acid ether compounds (I) is shown as follows:

【技术实现步骤摘要】
一种海洋真菌爪曲霉溴代缩酚环酸醚类化合物及其制备方法和应用
本专利技术属于微生物发酵物提取
，具体地，涉及一种海洋真菌爪曲霉溴代缩酚酸环醚类化合物及其制备方法和应用。
技术介绍
目前在临床治疗中发现病原微生物的耐药性越来越强，尤其是耐甲氧基青霉素金黄色葡萄球菌（MRSA）、铜绿假单胞菌（俗称绿脓杆菌）和白色假丝酵母（俗称白色念珠菌）造成的感染越来越严重，很多传统抗生素已基本丧失疗效，因此有必要寻找新型的抗生素来应对此挑战。此外，在农业生产因为过度使用各种化学合成农药，造成严重的食品、土壤及水污染，并经过食物链危及人体健康和生态平衡，农药残留也严重阻碍了我国的农产品出口；而生物农药具有不易产生抗药性、对非靶生物安全、环境友好且易于自然降解等优点，对于人类健康、环境保护及农业可持续发展具有重要的意义。海洋真菌来源的抗生素及杀虫剂具有易于大规模发酵生产、高效、易于克服抗药性等优点，易于实现药源稳定供给，具有较好的经济、社会与环境效益。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有抗生素及杀虫剂的缺陷和不足，提供一种提取自海洋真菌爪曲霉的溴代缩酚酸环醚类化合物，该化合物具有抗真菌、抗细菌活性和杀虫活性，在制备抗真菌剂、抗细菌剂及农用杀虫剂中具有广泛的应用前景。本专利技术的目的是提供一种海洋真菌爪曲霉溴代缩酚酸环醚类化合物。本专利技术的另一目的是提供上述化合物的制备方法。本专利技术的再一目的是提供上述化合物的应用。本专利技术的上述目的是用过以下技术方案给予实现的。本专利技术采用的海洋真菌爪曲霉（Aspergillusunguis）CGMCCNo.3372菌种，于2009年10月28日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏编号为CGMCCNo.3372，株号为DLEP2008001。一种海洋真菌爪曲霉（Aspergillusunguis）溴代缩酚酸环醚类化学物，其特征在于，所述化学物的化学结构式如（）所示：（）上述海洋真菌爪曲霉溴代缩酚酸环醚类化学物的制备方法包括如下步骤：S1.发酵：将爪曲霉DLEP2008001接种于真菌培养基中静置发酵后，分别收集菌丝体和发酵液；；S2.粗提：将步骤S1的发酵液经乙酸乙酯萃取后浓缩，菌丝体经有机溶剂提取后浓缩，合并后得粗提物；S3.分离纯化：将步骤S2的粗提物进行硅胶柱梯度层析，经硅胶薄层层析检测，将含有目标物质的洗脱组分继续进行硅胶柱、凝胶柱层析和正相制备液相色谱分离纯化得到目标化合物；其中，步骤S1所述真菌液体培养基的配方为：每升中含有如下组分：土豆汁400～600mL，NaBr15～25g，蔗糖15～25g，纯水或自来水400～600mL。优选地，所述真菌液体培养基的配方为：每升中含有如下组分：土豆汁500mL，NaBr20g，蔗糖20g，纯水或自来水500mL。具体地，上述海洋真菌爪曲霉溴代缩酚酸环醚类化学物的制备方法包括如下步骤：S1.发酵：将爪曲霉（Aspergillusunguis）CGMCCNo.3372接种于真菌液体培养基中静置发酵，发酵2～4天后，加入终浓度为0.5～2mM（优选1mM）的普鲁卡因溶液，继续发酵18～22天，过滤，分别收集菌丝体和发酵液；S2.粗提：将步骤S1获得的发酵液经乙酸乙酯萃取并浓缩，将步骤S1获得的菌丝体用有机溶剂提取并浓缩，将所得浓缩物合并，即为粗提物；其中，所述有机溶剂为氯仿、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中一种或几种；S3.分离纯化：a.将步骤S2获得的粗提物经硅胶柱层析，用石油醚-二氯甲烷或石油醚-氯仿进行预洗脱，继而用氯仿-甲醇或二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，收集以洗脱液体积比100:0～100:1梯度的洗脱的组分；组分特征为硅胶薄层层析板上展开剂为体积比15:1的氯仿-甲醇溶液展开下，比移值为0.29～0.74的混合物组分；b.将步骤a收集的洗脱组分再进行硅胶柱层析，洗脱液为体积比5:1的石油醚-丙酮；c.将步骤b收集的洗脱组分进行葡聚糖凝胶柱层析，洗脱液为甲醇，流速0.5～0.7mL/min；d.将步骤c收集的洗脱组分进行正向制备液相色谱纯化，洗脱液为体积比3～5:1（优选4:1）的氯仿-石油醚，在硅胶柱填充20～30g（优选25g）硅胶、流速2～4mL/min（优选3mL/min）情况下，收集保留时间为14～28min的组分；e.将步骤d收集的洗脱组分继续进行正向制备液相色谱纯化，洗脱液为纯氯仿，在硅胶柱填充10～15g（优选12g）硅胶、流速1～3mL/min（优选2mL/min）情况下，收集保留时间为14～35min的主峰，得到收集物。优选地，步骤a或b所述硅胶柱层析的硅胶为200～300目。另外，具体地，所述溴代缩酚酸环醚类化合物在薄层色谱上的比移值及化学显色特征如下：层析展开剂为纯氯仿时，所述化合物在GF254薄层硅胶板上的Rf值为0.26，254nm紫外线照射下呈单个、均匀的黑色～暗蓝色斑点，茴香醛硫酸显色为棕褐色。优选地，所述化合物在高效液相分析条件下保留时间为4.0～5.0min的单一色谱峰。更优选地，所述高效液相色谱分析条件为AcquityUPLC®BEHC18柱，填料粒径1.7微米，柱尺寸2.1mm×50mm，流动相为添加万分之一体积的改性剂甲酸的乙腈水溶液，0～2.5min乙腈比例为60%，2.5～2.6min乙腈比例线性升至100%，2.6～3.0min乙腈比例为100%，3.0～3.1min乙腈比例线性降至60%，3.1～5.0min乙腈比例为60%，流速0.3ml/min。优选地，所述溴代缩酚酸环醚类化合物在常温常压下为无色针晶。经抗菌实验得出，本专利技术所述化合物对白色假丝酵母的MIC值为6.4µmol/L，具有抑制白色假丝酵母的活性；对铜绿假单胞菌的MIC为1.6µmol/L，表明该化合物具有抑制铜绿假单胞菌生长的活性；对耐甲氧基青霉素的金黄色葡萄球菌的MIC值为25.6µmol/L，具有抑制MRSA的活性；对卤虫的半致死剂量LC50为12.0µmol/L，表明其具有杀虫活性。所以，上述溴代缩酚酸环醚类化学物在抗真菌、抗细菌或杀虫上的应用，以及在制备抗真菌剂、抗细菌剂或杀虫剂中的应用，都应在本专利技术的保护范围之内。优选地，所述真菌为白色假丝酵母。优选地，所述细菌为革兰氏阴性菌。更优选地，所述革兰氏阴性菌为铜绿假单胞杆菌。另外，更优选地，所述细菌为铜绿假单胞杆菌或耐甲氧基青霉素金黄色葡萄球菌。优选地，所述虫为农业害虫。更优选地，所述农业害虫为卤虫、线虫、甜菜夜蛾、蚜虫、库蚊幼虫或朱砂叶螨等害虫。本专利技术与现有技术相比，具有以下有益效果：本专利技术获得了一种新的海洋真菌爪曲霉溴代缩酚酸环醚类化合物，具有良好的抗真菌、抗细菌活性与杀虫活性，而且化合物制备方法简单，易于大规模生产，在制备抗真菌剂、抗细菌剂或农用杀虫剂中具有广泛的应用前景。附图说明图1为本专利技术所述溴代缩酚酸环醚类化合物的核磁共振氢谱。图2为本专利技术所述溴代缩酚酸环醚类化合物的核磁共振碳谱。图3为本专利技术所述溴代缩酚酸环醚类化合物的ESI-质谱。具体实施方式下面结合说明书附图和具体实施例对本专利技术作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海洋真菌爪曲霉溴代缩酚酸环醚类化合物，其特征在于，所述化合物的化学结构式如式（

【技术特征摘要】
1.一种海洋真菌爪曲霉溴代缩酚酸环醚类化合物，其特征在于，所述化合物的化学结构式如式（）所示：。2.权利要求1所述溴代缩酚酸环醚类化合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1.发酵：将爪曲霉DLEP2008001接种于真菌液体培养基中静置发酵后，分别收集菌丝体和发酵液；S2.粗提：将步骤S1的发酵液经乙酸乙酯萃取后浓缩，菌丝体经有机溶剂提取后浓缩，将所得浓缩物合并后得粗提物；S3.分离纯化：将步骤S2的粗提物进行硅胶柱梯度层析，经硅胶薄层层析检测，将含有目标物质的洗脱组分继续进行硅胶柱、凝胶柱层析和正相制备液相色谱分离纯化，得到目标化合物；其中，步骤S1所述真菌液体培养基的配方为：每升中含有如下组分：土豆汁400～600mL，NaBr15～25g，蔗糖15～25g，纯水或自来水400～600mL。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S1所述发酵是静置发酵2～4天后，加入终浓度为0.5～2mM的普鲁卡因溶液，继续发酵18～22天；步骤S2所述乙酸乙酯萃取次数为2～4次，所述有机溶剂萃取次数为2～4次；所述有机溶剂为氯仿、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中一种或几种。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S3所述分离纯化的具体方法如下：a.将步骤S2获得的粗提物经硅胶柱层析，用石油醚-二氯甲烷或石油醚-氯仿进行预洗脱，继而用氯仿-甲醇或二氯甲烷-...

【专利技术属性】
技术研发人员：张翼，鲍海燕，冯妍，聂影影，刘亚月，杨文聪，杨静明，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：广东,44