一种反义核酸，其特征在于，该反义核酸特异性地与ＳＡＲＳ病毒的ＲＮＡ的一部分相结合，所述反义核酸为ＲＮＡ或ＤＮＡ分子，且能有效地抑制ＳＡＲＳ病毒基因的表达。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及反义
，具体的本专利技术涉及具有抑制SARS病毒及SARS病毒基因表达的反义核酸及其应用。
技术介绍
反义寡脱氧核苷酸(AS ODN)是上世纪七十年代发展起来的技术，自1989年以来，已有数百个反义ODN抑制各种基因表达和应用的专利。1998年在美国有第一个反义ODN药物获FDA批准进入临床实际使用。其作用原理主要有二个1.反义ODN进入细胞后，与其靶蛋白质mRNA的靶位点序列反向互补结合。这种结合抑制了核糖体在mRNA上的移动，从而抑制了靶蛋白质的生物合成。2.反义ODN是脱氧核糖核酸，mRNA为核糖核酸，故它们形成的双链为DNA与RNA的杂交双链。细胞内源的核糖核酸酶H专一性剪切这种杂交双涟中的RNA链。mRNA核糖核酸链被切断后，翻译无法进行，靶蛋白质生物合成被抑制。另外，小分子干扰核糖核酸(SiRNA)可与病毒的mRNA结合，从而阻断病毒的翻译，抑制靶蛋白的表达。它是一个成熟的技术。传染性非典型肺炎即严重急性呼吸综合征(Severe AcuteResplratolySyndrome)是由SARS病毒感染所引起的，它正在严重危害我国和世界多国人民的身体健康，也正在严重干扰我国经济的正常开展。它已成为当前我国一个严重的社会、政治、经济问题。对于SARS病毒，目前还没有有效的治疗和/或预防SARS病毒所引起的非典型肺炎及相关疾病的药物。因此，本领域迫切需要开发治疗和/或预防SARS病毒所引起的非典型肺炎及相关疾病的药物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供在翻译水平抑制SARS病毒重要蛋白质表达的反义核酸，包括反义ODN和SiRNA，它可用于制备治疗和/或预防由SARS病毒引起的非典型肺炎及相关疾病的药物。本专利技术的第一方面，提供一种反义核酸，所述反义核酸特异性地与SARS病毒的RNA的一部分相结合，所述反义核酸为RNA或DNA分子，且能有效地抑制SARS病毒基因的表达。在一优选例中，所述反义核酸包括选自SEQ NO1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26(本专利技术文件中用SEQ NO1到SEQ NO26表示)所示的任意一条核苦酸序列。在另一优选例中，所述反义核酸为选自SEQ NO1到SEQ NO26所示的任意一条核昔酸序列。优选的，所述反义核酸为硫代反义寡脱氧核苷酸或小分子干扰核糖核酸。在另一优选例中，所述反义核酸包括选自SEQ NO1到SEQ NO26所示的任意两条以上的核苷酸序列。优选的，所述反义核酸为选自SEQ NO1到SEQ NO26所示的任意两条或三条核苷酸序列。本专利技术的第二方面，提供了本专利技术所述的反义核酸的应用，其特征在于该反义核酸在制备治疗和/或预防SARS病毒所引起的非典型肺炎及其它相关疾病的药物中的应用。本专利技术的第三方面，提供了一种组合物，其特征在于，它包括安全有效量的本专利技术所述的反义核酸分子以及药学上可接受的载体。该反义核酸分子包含SARS病毒特异性反义区域，能够特异性的结合到SARS病毒所表达的部分RNA上，其中所述的反义分子能够有效降低的SARS病毒表达，从而在体内或体外使SARS病毒RNA序列失活。在一优选例中，所述的反义核酸为选自SEQ NO1到SEQ NO26所示的任意一条核苷酸序列。在另一优选例中，所述的反义核酸为选自SEQ NO1到SEQ NO26所示的任意两条或三条核苷酸序列。在另一优选例中，所述的反义核酸为硫代反义寡脱氧核苦酸或小分子干扰核糖核酸。附图说明图1.针对E基因的AS ODN的二级结构图2.针对M基因的AS ODN的二级结构图3.针对N基因的AS ODN的二级结构图4.RT-PCR循环圈数的确定。A.电泳图谱B.RT PCR循环数与DNA产量的关系曲线。图5.针对SARS病毒N、M、E基因的AS ODN的筛选A.针对N基因的10、17、62、63号AS ODN的筛选。B.针对N基因的64、65号AS ODN的筛选。C.针对M基因的8、15、55、56、57号AS ODN的筛选D.针对E基因的19、51号AS ODN的筛选图6.针对protein N基因的62号AS ODN的量效关系A.针对protein N基因的62号AS ODN的量效关系。62号AS ODN的浓度依次为2uM、10uM、30uM、50uM。N基因表达载体用量为0.8ug/孔(24孔细胞培养板)。B.针对protein N基因的62号AS ODN的量效关系曲线。抑制效果达到50％时AS ODN浓度为5.0uM。图7.针对protein N基因的63号AS ODN的量效关系A.针对protein N基因的63号AS ODN的量效关系。63号AS ODN的浓度依次为2uM、10uM、30uM、50uM。N基因表达载体用量为0.8ug/孔(24孔细胞培养板)。B.针对protein N基因的63号AS ODN的量效关系曲线。抑制效果达到50％时AS ODN浓度为15.6uM。图8针对protein E基因的19号AS ODN的量效关系A.针对protein E基因的19号AS ODN的量效关系。B.针对protein E基因的19号AS ODN的量效关系曲线。抑制效果达到50％时AS ODN浓度为5.6uM。图9针对protein E基因的51号AS ODN的量效关系 A.针对protein E基因的51号AS ODN的量效关系。B.针对protein E基因的51号AS ODN的量效关系曲线。抑制效果达到50％时AS ODN浓度为4.4uM。图10针对protein M基因的8号AS ODN的量效关系A.针对protein M基因的8号AS ODN的量效关系。B.针对proteinM基因的8号AS ODN的量效关系曲线。抑制效果达到50％时AS ODN浓度为4.5uM。图11针对protein M基因的56号AS ODN的量效关系A.针对protein M基因的56号AS ODN的量效关系。B.针对protein M基因的56号AS ODN的量效关系曲线。抑制效果达到50％时AS ODN浓度为10.7uM。图12 siRNA(No.8及No.19)抑制M及E基因的表达。A.8号siRNA抑制M基因表达；B.19号siRNA抑制E基因表达。具体实施例方式SARS病毒RNA编码多个蛋白质基因。其中，M蛋白、E蛋白、N蛋白均为SARS病毒所特有，人细胞中无替代其功能的其他蛋白质存在。如能抑制这些蛋白质中的任何一个，SARS病毒的生长周期即不能完成，病毒生长就会受到抑制。通过对SARS病毒RNA进行二级结构计算机模拟，专利技术人在M、N、E蛋白编码区内(二级结构模拟图见附图)和在负链RNA中选取下列位点(见表1)，合成这些片断，测定这些反义ODN在vero-E6细胞中抑制SARS病毒M、N、E蛋白的表达，并进行量效关系实验及SiRNA抑制SARS病毒的表达，在此基础上，完成了本专利技术。 (表1)如本专利技术所用，术语“‘反义”是指反义核酸(DNA或RNA)和其类似物，也指一系列化学物种，这些化学物种具有一系列核苷酸碱基序列，能通过与SARS病毒的核苷酸碱基氢键相互作用识别SARS病本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：金由辛，史毅，李林，陆长德，丁昱，陈婷，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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