一种提高桑黄活性成分含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高桑黄活性成分含量的方法。方法包括：将桑黄种子液接种于液体培养基中进行发酵，所述的液体培养基中含有碳源和氮源，所述的碳源为麦芽糖，所述的氮源为酵母提取物。所述麦芽糖在液体培养基中的浓度为2‑6％，所述酵母提取物在液体培养基中的浓度为0.1‑0.4％。本发明专利技术提供了一种提高桑黄活性成分含量的方法，采用液体发酵的方式，通过对发酵条件进行优化，提高多糖和黄酮的含量。

A method for improving the content of active ingredients of Phellinus sp.

The invention discloses a method for improving the content of active ingredients of Phellinus sp.. The method includes: the seed was inoculated in the liquid culture of Phellinus linteus fermentation medium, the liquid medium containing carbon source and nitrogen source in the medium, the carbon source is maltose, the nitrogen source was yeast extract. The maltose in the liquid medium concentration was 2 6%, the yeast extract in liquid medium concentration was 0.1 0.4%. The present invention provides a method for improving the content of active ingredients of Phellinus linteus, using liquid fermentation, the fermentation conditions were optimized to improve the content of polysaccharide and flavone.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药材，尤其涉及一种提高桑黄活性成分含量的方法。
技术介绍
桑黄是我国珍稀的药用真菌。桑黄别名猢狲眼、桑耳、桑臣等，是一种珍贵的大型药用真菌，其子实体可入药。因寄生于桑树而得名，桑黄在我国分布较广，主要生长在我国华北、东北、西北及四川、云南等地，在韩国和日本等一些东亚国家也均有生长，被誉为“森林黄金”，具有野生子实体数量少，人工栽培难度高的特点。传统中医药学将桑黄运用在血崩、血淋、闭经等疾病。现代药理学研究表明，桑黄在抗癌方面效果显著，除此之外，还有抗肺炎、降血脂、抗氧化以及保护肝脏等作用。是当今医药和食品工业共同研究和关注点。随着桑黄药用价值的深入研究，市场对于桑黄的需求量逐年增加，造成了对桑黄子实体的破坏性开采，对于产地的保护意识淡薄，造成了子实体难以成型，资源日益枯竭，在我国的部分地区已难以寻找到桑黄的踪迹，大部分产区已岌岌可危。人工栽培难度较大，桑黄的开发和利用也因此受到限制。液体发酵技术、固体培养技术和人工栽培技术是目前获得桑黄菌丝体和子实体主要的途径。目前，由于子实体规模化人工栽培技术尚不十分成熟，市场上大多采用液体发酵技术来获取桑黄子实体或非子实体产物，对活性成分的研究甚少。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种提高桑黄活性成分含量的方法，采用液体发酵的方式，通过对发酵条件进行优化，提高多糖和黄酮的含量。技术方案：本专利技术所述的提高桑黄活性成分含量的方法，包括：将桑黄种子液接种于液体培养基中进行发酵，所述的液体培养基中含有碳源和氮源，所述的碳源为麦芽糖，所述的氮源为酵母提取物。所述麦芽糖在液体培养基中的浓度为2-6％，优选为2-4％，更优选为2％。所述酵母提取物在液体培养基中的浓度为0.1-0.4％，优选为0.2-0.4％，更优选为0.4％。发酵时液体培养基中还含有MgSO4·7H2O0.4-0.6‰，KH2PO44.5-5‰。优选的，发酵时液体培养基中还含有MgSO4·7H2O0.5‰，KH2PO44.6‰。上述浓度是指质量分数。所述桑黄种子液的制备方法为：将桑黄菌种活化后接种于PDA液体培养基，27-29℃摇床中以150-170r/min培养6-7d。发酵时，接种量为9-10％。所述发酵的温度为27-29℃，摇床转速为150-170r/min，时间为6-9d。优选的，所述发酵的温度为28℃，摇床转速为160r/min，时间为7d。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术采用液体发酵的方式，通过对发酵条件进行优化，提高多糖和黄酮的含量。桑黄的生长条件在0.2％麦芽糖为碳源，0.4％酵母提取物为氮源时，多糖和黄酮含量可以获得较高值。附图说明图1为实施例2不同碳源百分含量下桑黄多糖、黄酮含量；图2为实施例2不同碳源百分含量下桑黄多糖、黄酮的总产量；图3为实施例3不同氮源百分含量下桑黄多糖、黄酮含量；图4为实施例3不同氮源百分含量下桑黄多糖、黄酮总产量。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐明本专利技术，应理解这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围，在阅读了本专利技术之后，本领域技术人员对本专利技术的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。实施例1桑黄的液体发酵方法，包括：(1)菌种活化将桑黄菌种接种在PDA固体培养基上，放置在28℃恒温培养箱中培养14d，用于液体培养的接种。(2)桑黄一级种制备将配置好的PDA液体培养基分装到三角瓶中，每瓶装100mL，高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌30min后使用。在无菌条件下，用直径为6mm的无菌打孔器在已活化的固体培养基上打孔，挑选8片菌种片放入PDA液体培养基中，接种后将三角瓶放入28℃摇床中以160r/min培养7d，获得桑黄一级种。(3)发酵在超净工作台中无菌条件下，使用种子打碎机将发酵生长成的一级菌种打碎，按10％(v/v)的接种量接入用于发酵的液体培养基的三角瓶中，pH自然，放置在摇床中以28℃，转速160r/min的发酵条件培养7d。多糖含量的测定方法如下：多糖的制备：桑黄菌种接种至液体培养基，发酵培养至菌丝球充满培养基后过滤，用60目筛子滤去培养基，用蒸馏水洗涤，放置在无纺布上60℃干燥，得干菌丝体，研磨成粉，称重。精确称取0.05g的菌丝体，浸泡于5mL1mol/L的NaOH溶液中，于100℃水浴提取1小时，所得的提取液即为多糖粗品。标准曲线的制作：称取干燥(恒温干燥箱60摄氏度，6小时)至恒重的葡萄糖10mg，放置于100ml的容量瓶，加去离子水定容，即为0.1mg/ml的葡萄糖标准液。精密吸取葡萄糖标准液0mL，0.2mL，0.4mL，0.6mL，0.8mL，1mL，1.2mL，1.4mL，1.6mL分别加入到各具塞试管中，用去离子水补足每管2ml，各管加入1ml的6％苯酚，迅速摇匀。再加入5ml的浓硫酸，放入时不要沿管壁加入，直接添加有利于浓硫酸快速与样品混合，静置10分钟，100℃水浴15分钟。取出后放置到室温，在490nm波长处测量各管吸光度。以试管溶液中的糖浓度为横坐标，各试管分别测得的吸光度为纵坐标，作标准曲线。试剂空白为参比。桑黄多糖的含量测定：采用苯酚硫酸法测定桑黄多糖的含量。精密称取桑黄多糖0.02mL，用去离子水补足至2mL即为供试品溶液，加入试剂量和操作方法和标准曲线的制作相同，在分光光度计上测量其吸光度，根据标准曲线，计算多糖含量。黄酮含量的检测方法如下：黄酮的萃取：称取研磨成粉的桑黄菌丝0.05g，加入5mL70％乙醇，放置在超声波清洗仪中提取1h，获得萃取液。桑黄黄酮的含量测定：定量移取样品液1mL于25mL容量瓶中，加入30％乙醇补充至10mL，加入5％NaN020.2mL摇匀，静置5分钟，加入0.2mL10％A1(N03)3静置6分钟后，加2mL4％NaOH，加入70％乙醇补充至50mL，510nm波长处进行比色测定，试剂空白为参比。芦丁/乙醇标准曲线的测定：精密称取30mg芦丁，用70％乙醇配制50ml芦丁标准液。精密吸取芦丁标准液0ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml分别加入到各具塞试管中，各加5％NaNO2溶液0.2mL，摇匀，放置6min；而后各加10％Al(NO3)3溶液0.2mL，摇匀放置6min；然后加4％NaOH溶液2mL，加70％乙醇定容至5mL，于510nm处测吸光度，做标准曲线。计算各样品的黄酮含量。实施例2不同百分比的碳源试验试验方法：实施例1的步骤(3)中，液体培养基含不同百分比的碳源(培养基配方为：麦芽糖，酵母提取物2g，蛋白胨2g，MgSO4·7H2O0.5g，KH2PO44.6g，去离子水1L)，不同百分比的碳源液体培养基中，麦芽糖的含量分别为0.5％、1％、2％、4％、6％。将配置好的不同百分比的碳源液体培养基分装到三角瓶中，每瓶100ml，用封口膜封口，再用橡皮筋扎紧。每个百分比做3个重复，高压蒸汽灭菌锅121℃下灭菌30min。其他步骤同实施例1，考察碳源对桑黄生物活性(多糖和黄酮)的影响。试验结果：碳源是真菌最重要的营养成分。它是碳水化合物和蛋白质的基本组成元素，又是重要的能量来源，在相同碳源的不同百分比的液体培养基中，麦芽糖的百分含量分别本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高桑黄活性成分含量的方法，其特征在于，包括：将桑黄种子液接种于液体培养基中进行发酵，所述的液体培养基中含有碳源和氮源，所述的碳源为麦芽糖，所述的氮源为酵母提取物。

【技术特征摘要】
1.一种提高桑黄活性成分含量的方法，其特征在于，包括：将桑黄种子液接种于液体培养基中进行发酵，所述的液体培养基中含有碳源和氮源，所述的碳源为麦芽糖，所述的氮源为酵母提取物。2.根据权利要求1所述的提高桑黄活性成分含量的方法，其特征在于，所述麦芽糖在液体培养基中的浓度为2-6％。3.根据权利要求1所述的提高桑黄活性成分含量的方法，其特征在于，所述酵母提取物在液体培养基中的浓度为0.1-0.4％。4.根据权利要求1所述的提高桑黄活性成分含量的方法，其特征在于，发酵时液体培养基中还含有MgS...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢春芹，凡军民，许俊齐，吴琴燕，
申请(专利权)人：江苏农林职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32