一种利用生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法，其中，包括方法一，配置添加了生物质炭培养基的抑制法，方法二，将添加了生物质炭培养基的pH调节回培养基原始pH的抑制法，方法三，配置菌土抑制法。本发明专利技术方法简单，使用方便，对黑胫病菌抑制效果好，本发明专利技术在燕麦培养基中分别或共同加入不同比例的两种生物质炭，通过对相关指标进行测定，确定生物质炭对烟草黑胫病菌的影响，并从生物质炭自身性质出发，设计相关实验进行机理验证；选用棕壤土，在盆栽条件下加入不用比例稻壳炭，验证生物质炭对烟草黑胫病的防治效果，以期为生物质炭的合理化应用和烟草黑胫病的相关研究及综合治理提供理论依据。

Method for inhibiting tobacco black shank fungus by utilizing biomass carbon

The invention discloses a method for using biomass carbon, inhibiting Phytophthora nicotianae, including method, inhibition method, configuration to add the biomass carbon medium method two, inhibition method, adding the biomass carbon medium pH medium to adjust the return of the original pH three configuration method, soil bacteria inhibition method. The method is simple, easy to use, the black shank inhibiting effect, the invention in oat culture of two kinds of biomass char respectively or jointly adding different proportion of medium, through the determination of the relevant indicators, to determine the effects of biochar on Phytophthora nicotianae, starting from raw material carbon and its properties, design experiment verification mechanism; selection of brown soil, without adding the proportion of rice husk in pot experiment, verify the effect of biochar on the prevention and control of tobacco black shank, and provide a theoretical basis for the related research and comprehensive management in order to rationalize the application of biochar and tobacco black shank.

【技术实现步骤摘要】

：本专利技术涉及烟草致病菌的抑制方法
，具体的涉及一种利用生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法。
技术介绍
：烟草黑胫病是烟草生产上的一种毁灭性病害，严重制约我国各烟区烟叶的生产。据不完全统计，我国平均每年因烟草黑胫病造成的经济损失达1亿元以上。烟草黑胫病菌在无烟草存在的土壤中可存活5年或者更长，在风干土中可存活18个月，侵染烟草植株后，会严重影响烟叶产质量的提高。针对黑胫病菌的抑制或防治，通常采用化学药物，化学药物对环境污染大，时间长久不利于农业生产和环境发展，因此，需要选取一种新的方法来抑制黑胫病菌。生物质炭是生物质在高温下热解生成，是一种含碳丰富的固体物质（SOHISPet.al，2010；杨平平，2012），它具有较好的孔隙结构和比表面积，营养元素丰富，能改善农田环境，在农业方面应用广泛。我国是烟草种植大国，种植面积居世界首位，每年都会产生大量的烟草废弃物（主要为烟草秸秆），目前来说主要的处理方式是焚烧和直接还田，焚烧会造成元素损失和环境污染，而秸秆还田则容易导致严重的土传病害。因此，将烟草秸秆炭化后进行应用可以充分发挥其优点，减少秸秆焚烧造成的区域环境污染。现有技术中的记载，生物质炭的利用，多数集中在炭基肥的利用上，例如中国专利申请CN104292044A公开了一种酸性土壤改良并防治烟草根茎病害的生物质炭基肥。（其通过生物质炭基肥来改良土壤结构，增加水肥利用率，提高土壤肥力，提高烟株抗性，丰富土壤微生态，促进作物生长发育进而达到防治烟草根茎病，但是并无实验数据以证明其对根茎病的影响，效果未知）其他记载中：在多孔的无土介质中施加生物质炭能减少辣椒和番茄叶部真菌病害的侵入（EllenR.Graberet.al，2010）。施用椰子生物炭后，芦笋的镰刀菌感染率明显降低（LehmannJ，2011）。与对照相比，施用木炭的某些处理中，青枯菌对番茄的侵染明显降低（LehmannJ，2011）。到目前为止，已经在6个不同的致病体系中发现在土壤中施加生物质炭能影响土传病害的发生程度（GraberERet.al，2014）。通过现有文献记载，已经报道的关于生物质炭对植物病害的影响主要集中在辣椒、番茄、芦笋、大豆等作物上（EllenR.Graberet.al，2010；LehmannJ，2011；JaiswalAK，2013），而对烟草及烟草黑胫病的研究尚未见报道，而烟草又是我国重要的经济作物之一，烟草黑胫病是影响其产质量的主要病害，所以研究生物质炭对烟草黑胫病影响是十分必要的。鉴于上述现有技术，本专利技术旨在提供一种方法简单，使用方便，对黑胫病菌抑制效果好的一种利用生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法。
技术实现思路
：本专利技术的目的在于克服现有技术中存在的缺点，提供一种方法简单，使用方便，对黑胫病菌抑制效果好的一种利用生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种利用生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法，其中，包括方法一，配置添加了生物质炭培养基的抑制法，方法二，将添加了生物质炭培养基的pH调节回培养基原始pH的抑制法，方法三，配置菌土抑制法。方法一包括如下步骤：配置燕麦培养基：燕麦片33g，琼脂粉18g，去离子水1000ml，在燕麦培养基的配置过程中加入不同比例的稻壳炭和/或烟草秸秆炭并测定相应的pH值；接种黑胫病菌株并采用十字交叉法测定菌落直径，以培养2d的菌落直径变化计算黑胫病菌菌丝的生长速率及抑制率。方法二包括如下步骤：配置燕麦培养基：燕麦片33g，琼脂粉18g，去离子水1000ml，在燕麦培养基的配置过程中加入不同比例的稻壳炭和/或烟草秸秆炭并测定相应的pH值；接着用0.1mol的HCl或NaOH溶液将变化的pH值调回到初始值，初始值为不加生物质炭的培养基所对应的pH值，灭菌后进行接菌实验，培养结束后，挑取菌丝置于载玻片上，在显微镜下观察黑胫病菌菌丝形态的变化。方法三包括如下步骤：菌谷准备：将谷子加水煮开至半数谷粒呈开花状，装入500ml三角瓶中，121℃高压灭菌20min；在无菌条件下，取1cm×1cm的烟草黑胫病菌菌块转接到盛有菌谷的三角瓶中，28℃培养14d备用；菌土准备：将灭菌的土壤与生物质炭（稻壳炭和/或烟草秸秆炭）按不同比例（0，1%，2%，4%，10%，20%）混合，装入直径9cm、高7cm的花盆中，先装3/4的混合土，均匀加入菌谷0.5g/盆，将剩余1/4的混合土填满，浇透水，置于人工气候室内一个月，保持高温高湿；移栽：将苗龄60天左右的烟苗移栽到花盆中，每盆一株。每个处理10盆，重复3次，置于人工气候室培养，白天30℃/黑夜28℃，光照12h/黑暗12h，相对湿度95%，移栽后于第5、7、9天调查烟苗的发病级数，并进行记录，计算病情指数和防治效果。病情指数=∑（各级病株数×级数）/（最高病级数×调查总株数）×100，防治效果=（对照组病指-处理组病指）/对照组病指×100%。生物质炭为稻壳炭和/或烟草秸秆炭，稻壳炭：烟草秸秆炭为0-20g/L:20-0g/L。本专利技术的优点为：方法简单，使用方便，对黑胫病菌抑制效果好，具体为：本专利技术通过室内培养试观察生物质炭对烟草黑胫病菌的影响，从生物质炭自身性质分析可能的作用机理，并进行盆栽验证。在燕麦培养基中分别或共同加入不同比例的两种生物质炭，通过对相关指标进行测定，确定生物质炭对烟草黑胫病菌的影响，并从生物质炭自身性质出发，设计相关实验进行机理验证；选用棕壤土，在盆栽条件下加入不用比例稻壳炭，验证生物质炭对烟草黑胫病的防治效果，以期为生物质炭的合理化应用和烟草黑胫病的相关研究及综合治理提供理论依据。生物质炭随着比例的增加病菌生长抑制率逐渐升高，抑制效果显著。黑胫病菌菌落直径随着pH的升高呈逐渐减小的趋势，生物质炭的吸附性及毒性物质（A&T）显著减小了黑胫病菌菌落直径，且随着比例的增加呈显著降低。综上，本专利技术生物质炭对烟草黑胫病菌具有显著的抑制效果。附图说明：图1生物质炭对黑胫病菌菌丝生长速率的影响（A.烟草秸秆炭；B.稻壳炭）图2pH和炭的吸附性&毒性物质（A&T)对黑胫病菌菌丝生长速率的影响（A、B、C、D依次是烟草秸秆炭对应的pH、烟草秸秆炭的A&T、稻壳炭对应的pH、稻壳炭的A&T对菌丝生长速率的影响）图3黑胫病菌菌丝形态（10×40倍）（1.正常菌丝形态；2.菌丝变形；3.菌丝分支；4.原生质泄露）具体实施方式：本专利技术提供了一种利用生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法，其中，包括方法一，配置添加了生物质炭培养基的抑制法，方法二，将添加了生物质炭培养基的pH调节回培养基原始pH的抑制法，方法三，配置菌土抑制法。方法一包括如下步骤：配置燕麦培养基：燕麦片33g，琼脂粉18g，去离子水1000ml，在燕麦培养基的配置过程中加入不同比例的稻壳炭和/或烟草秸秆炭并测定相应的pH值；接种黑胫病菌株并采用十字交叉法测定菌落直径，以培养2d的菌落直径变化计算黑胫病菌菌丝的生长速率及抑制率。方法二包括如下步骤：配置燕麦培养基：燕麦片33g，琼脂粉18g，去离子水1000ml，在燕麦培养基的配置过程中加入不同比例的稻壳炭和/或烟草秸秆炭并测定相应的pH值；接着用0.1mol的H本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法，其特征在于，包括方法一，配置添加了生物质炭培养基的抑制法，方法二，将添加了生物质炭培养基的pH调节回培养基原始pH的抑制法，方法三，配置菌土抑制法。

【技术特征摘要】
1.一种利用生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法，其特征在于，包括方法一，配置添加了生物质炭培养基的抑制法，方法二，将添加了生物质炭培养基的pH调节回培养基原始pH的抑制法，方法三，配置菌土抑制法。2.根据权利要求1所述利用生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法，其特征在于，方法一包括如下步骤：配置燕麦培养基：燕麦片33g，琼脂粉18g，去离子水1000ml，在燕麦培养基的配置过程中加入不同比例的稻壳炭和/或烟草秸秆炭并测定相应的pH值；接种黑胫病菌株并采用十字交叉法测定菌落直径，以培养2d的菌落直径变化计算黑胫病菌菌丝的生长速率及抑制率。3.根据权利要求1所述生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法，其特征在于，方法二包括如下步骤：配置燕麦培养基：燕麦片33g，琼脂粉18g，去离子水1000ml，在燕麦培养基的配置过程中加入不同比例的稻壳炭和/或烟草秸秆炭并测定相应的pH值；接着用0.1mol的HCl或NaOH溶液将变化的pH值调回到初始值，初始值为不加生物质炭的培养基所对应的pH值，灭菌后进行接菌实验，培养结束后，挑取菌丝置于载玻片上，在显微镜下观察黑胫病菌菌丝形态的变化。4.根据权利要求1所述生物质炭抑制烟草黑胫病菌的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：董建新，管恩娜，宋文静，杨斌，王鹏，王耀斌，王世建，丁志勇，吕国新，梁洪波，刘光亮，
申请(专利权)人：中国农业科学院烟草研究所，山东青岛烟草有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37