本发明专利技术涉及一种血红素的纯化方法。该方法步骤为：用质量浓度为０．０１％－５％的碱溶液溶解血红素粗品，去渣取上清液，上清液中加入可溶性钙盐或氢氧化钙使血红素结晶沉淀完全，离心取沉淀，先用酸溶液和ＥＤＴＡ溶液洗涤，再用水洗涤至中性，干燥，得纯化的血红素。本发明专利技术工艺简单，操作方便，回收率高达９５％以上，成本低廉，革除有机溶剂，获得的精品血红素纯度可达９８％以上。环境友好，便于大规模工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种血红素的纯化方法，属于生物化学领域。
技术介绍
血红素又称为铁卟啉，由一个原卟啉IX和一个铁组成平面结构的复合物， 铁原子有六个配位电子，其中四个与原卟啉中的四个吡咯环的N原子配位结合， 形成一个大的平面结构，另两个分别位于卟啉平面的两侧。在血红蛋白、肌红 蛋白中铁的两个配位键一个与蛋白质的组氨酸的吡咯环中的N配位结合，另一 个配位键则用于氧结合。市售的血红素一般以氯化高铁血红素的形式出售，它 是由氯原子取代组氨酸的吡咯氮所得。本专利技术所述的血红素就是指氯化高铁血 红素。血红素不溶于水，也不溶于乙醇等一般的有机溶剂，但是血红素含有两 个羧基，因此血红素可以在碱溶液中离子化，而溶于碱溶液中。血红素是人体内氧代谢的很多重要的蛋白质的辅基，如用于氧携带和保存 的血红蛋白、肌红蛋白，呼吸链中的细胞色素，还有过氧化氢酶、细胞色素P450 氧还酶等，血红素的缺失(一般由于缺铁造成)会导致人的病症，最常见的就 是贫血。血红素由于其人体吸收利用率高，对肠胃无刺激性，是一种优良的补铁剂， 临床上用于治疗缺铁性贫血等疾病。血红素还是重要的医药原料，特别是一系 列卟啉类抗肿瘤药物的前体。血红素还被用于涂料化工和食品着色剂中。因此 血红素应用广泛，市场需求巨大。由于医药等行业对血红素的纯度要求较高， 一般粗品不能满足其要求，因 此血红素的纯化即精制就必不可少。传统的血红素纯化方法是用吡啶、氯仿、 醋酸、浓盐酸和氯化钠体系先生成吡啶血色原的重结晶方法，该方法效果较好， 曾被广泛使用。但是该方法用到吡啶、氯仿等试剂毒性较大，随着人们对生命 和环境的日益重视，该方法使用受到限制。专利ZL87107834《氯化血红素的分离和纯化》提供了一种用碱或者有机溶 剂溶解，然后用表面活性剂作为催化剂重结晶的方法，该方法体系复杂，需要 使用特殊的设备，给操作带来不便，特别是该方法最后为了进一步提高纯度， 用浓硫酸洗涤氯化血红素氧化混杂的氨基酸，会生成对人体有害的物质，是该 方法致命的缺陷。专利ZL200310100894.3《血红素的纯化方法》提供了一种简单、方便的血红素纯化方法，该方法利用血红素在不同的pH值溶解性不同的性质，使用碱溶， 酸沉淀的方法重结晶血红素，取得了良好的效果。但是该方法在调酸结晶过程 中溶液pH值已经回到中性，本质上只是去掉了碱不溶的杂质和水溶性的杂质， 而不能去除溶于碱不溶于水的杂质，因此通用性不强。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了一种能有效去除血红素中碱溶性杂质的快速、简便、 清洁的纯化血红素的方法，以适应现代工业生产的要求。本专利技术的纯化血红素的方法，其步骤如下用质量浓度为0.01%-5%的碱溶液溶解血红素粗品，去渣取上清液，上清液中加入可溶性钙盐或氢氧化钙使血红素结晶沉淀完全，离心取沉淀，先用酸溶液和EDTA溶液洗涤，再用水洗涤至中性，干燥，得纯化的血红素。本专利技术中，所说的碱溶液可以是氨水溶液、氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液。 本专利技术中，所说的可溶性钙盐可以是氯化钙、硝酸钙或两者的混合物；判断沉淀完全的标准是上清液为无色或淡黄色。本专利技术中，所说的酸溶液为pH小于5.5的盐酸、硫酸、硝酸、磷酸或醋酸溶液。考虑到一般商品化的产品要求为氯化血红素，则优选盐酸溶液。上述的EDTA溶液是用于螯合血红素沉淀中多余的钙离子，可以采用乙二胺四乙酸溶液或乙二胺四乙酸的钠盐溶液。本专利技术工艺简单，操作方便，回收率高达95%以上，成本低廉，革除有机溶剂，获得的精品血红素纯度可达98%以上。环境友好，便于大规模工业化生产。具体实施方案实施例1:取70%纯度的血红素粗品lkg，加质量浓度为5%的氢氧化钠溶液20L使其 溶解，管式离心机离心去渣，上清液加入无水氯化钙固体100g，血红素迅速沉 淀，离心取沉淀。该沉淀物依次用pH3.0的盐酸溶液和质量浓度为0.01%的乙二 胺二乙酸溶液洗漆，然后用水洗涤至中性，干燥得精品血红素700g。原子吸收 光谱测铁含量达到8.4%,血红素纯度为98%，回收率达98%。实施例2:取80%纯度的血红素粗品500g，加质量浓度为0.1°/。的氨水100L使其溶解， 压滤，滤液加入二水合氯化钙30g，离心收集血红素沉淀，沉淀先用质量浓度 0.1%的乙二胺二乙酸二钠溶液洗涤，然后用pH2.0的硝酸溶液洗涤，再用水洗涤至中性，烘干得精品血红素384g，血红素纯度99%，回收率为95%。 实施例3:取80%纯度的血红素粗品500g，加质量浓度为0.01%的氢氧化钾溶液20L 使其溶解，压滤，滤液加入氢氧化钙30g，离心收集血红素沉淀，该沉淀物依次 用pH2.0的盐酸溶液和质量浓度为0.01%的乙二胺二乙酸四钠溶液洗涤，然后用 水洗涤至中性，烘干得精品血红素400g，纯度98%，回收率98%。实施例4:取75%纯度的血红素粗品500g，加质量浓度为2%的氢氧化钾溶液10L使 其溶解，压滤，滤液加入氯化钙15g，硝酸钙10g，离心收集血红素沉淀，沉淀 依次用pH5.0的醋酸溶液、质量浓度5%的乙二胺四乙酸二钠溶液洗涤，最后用 水洗涤至中性，烘干得精品血红素373g，纯度98.5%，回收率98%。权利要求1、，其步骤如下用质量浓度为0.01％-5％的碱溶液溶解血红素粗品，去渣取上清液，上清液中加入可溶性钙盐或氢氧化钙使血红素结晶沉淀完全，离心取沉淀，先用酸溶液和EDTA溶液洗涤，再用水洗涤至中性，干燥，得纯化的血红素。2、 根据权利要求1所述的纯化血红素的方法，其特征在于所说的碱溶液为 氨水溶液、氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液。3、 根据权利要求1所述的纯化血红素的方法，其特征在于所说的可溶性转 盐为氯化钙、硝酸钙或两者的混合物；4、 根据权利要求1所述的纯化血红素的方法，其特征在于所说的酸溶液为 pH小于5.5的盐酸、硫酸、硝酸、磷酸或醋酸溶液。全文摘要本专利技术涉及一种血红素的纯化方法。该方法步骤为用质量浓度为0.01％-5％的碱溶液溶解血红素粗品，去渣取上清液，上清液中加入可溶性钙盐或氢氧化钙使血红素结晶沉淀完全，离心取沉淀，先用酸溶液和EDTA溶液洗涤，再用水洗涤至中性，干燥，得纯化的血红素。本专利技术工艺简单，操作方便，回收率高达95％以上，成本低廉，革除有机溶剂，获得的精品血红素纯度可达98％以上。环境友好，便于大规模工业化生产。文档编号C07D487/22GK101353350SQ20081012096公开日2009年1月28日 申请日期2008年9月9日 优先权日2008年9月9日专利技术者曾冬云, 郦剑勇, 陈福鼎, 斌 韩, 龚兴国 申请人:浙江大学本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种纯化血红素的方法，其步骤如下： 用质量浓度为０．０１％－５％的碱溶液溶解血红素粗品，去渣取上清液，上清液中加入可溶性钙盐或氢氧化钙使血红素结晶沉淀完全，离心取沉淀，先用酸溶液和ＥＤＴＡ溶液洗涤，再用水洗涤至中性，干燥，得纯化的血红素。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：龚兴国，郦剑勇，陈福鼎，曾冬云，韩斌，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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