一种坛紫菜多糖的降解方法及其抗衰老活性应用技术

本发明专利技术属于海洋医用保健品领域，涉及到一种坛紫菜多糖的降解以及在抗衰老中的应用。具体表现在直接在坛紫菜多糖提取液中加入降解剂，经过降解获得均一的低分子量坛紫菜多糖。此多糖具有明显的延缓细胞衰老的作用，表现为提高细胞衰老模型—人胚肺二倍体成纤维细胞WI‑38的细胞活力，有效降低衰老相关的SA‑β‑gal的染色率，明显下调衰老相关蛋白p53和p21表达水平。本发明专利技术具有操作简便，制备工艺稳定，制造成本低廉等优点。本发明专利技术适用于含片等多种保健品剂型。

Method for degrading polysaccharide from Porphyra haitanensis and application thereof

The invention belongs to the field of marine medical health care products, relates to the degradation of Porphyra haitanensis polysaccharide and its application in anti-aging. The specific performance is directly added to the polysaccharide extract of Porphyra haitanensis, and the low molecular weight Porphyra haitanensis polysaccharide is obtained through the degradation. This polysaccharide has obvious delay cell senescence, in order to improve the performance of cell senescence model of human embryo lung diploid fibroblast WI 38 cells, effectively reduce the stain aging related SA beta rate of gal, the down-regulation of senescence associated protein p53 and p21 expression. The invention has the advantages of simple operation, stable preparation process and low manufacturing cost. The invention is suitable for various health care products such as buccal tablets.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于海洋医用保健品领域，具体是一种坛紫菜多糖的降解方法以及在抗衰老中的应用。
技术介绍
进入21世纪后，人类面临人口老龄化的严峻挑战。世界上65岁以上老年人占总人口比例已经达到7%。衰老为老年病“百病之源”。据统计，仅2015年1月至9月，全球就新增990万名老年痴呆患者。在美国65岁以上的老年人口中，每9人里就有1名阿尔茨海默病患者，每3位去世的老年人中，就有1人曾被诊断为阿尔茨海默病或其他类型的痴呆。因此，寻找干预衰老措施、探索衰老机制，提高老年人生命和生活质量的有效途径成为生命科学中的重大课题。坛紫菜（Porphyrahaitanensis），俗名乌菜，是中国特有的可人工栽培的海藻。早在宋朝太平兴国三年就被列为贡品，是品位极高的营养保健食品，素有“长寿莱”、“神仙菜”的美称。坛紫菜半乳聚糖硫酸酯（SulfatedgalactanofPorphyra，GSP），主要由半乳糖、3，6-内醚半乳糖和硫酸基等组成，占紫菜干重的20-40%，是坛紫菜的主要成分之一。它除了传统工业价值外，还具有抗凝血、降血糖、调血脂、增强细胞免疫和体液免疫功能等多种生物活性。然而，坛紫菜多糖的分子量很大，几十万甚至上百万，在一定程度上影响了其生物学活性。为了获得合适分子量的坛紫菜多糖，需采用一定的方法对其进行降解。目前国内公布的申请专利中，如CN101152207报道的低分子量紫菜多糖是首先从坛紫菜中提取获得高分子量多糖样品，再进行降解，工艺复杂，不适合生产应用。本专利技术以坛紫菜提取液直接加入降解剂，再经纯化分离获得低分子量多糖，并应用在抗衰老保健用品中。专利技术内容本专利技术目的是针对现有技术的不足，提供一种原液降解以获取低分子坛紫菜多糖的制备方法。本专利技术的另一目的是提供一种抗衰老药物或保健品。为实现上述目的，所述技术方案如下：（1）将干燥坛紫菜粉碎后加水浸泡后，在微波提取罐中进行微波辐照浸提，离心分离得粗提液；（2）在粗提液中加入降解试剂，常温下搅拌2小时后过滤，滤液装入透析袋透析，浓缩后乙醇沉淀并干燥得低分子量坛紫菜多糖；本专利技术所述的坛紫菜加水浸泡时间为1h。所述的微波辐照浸提条件为1g坛紫菜多糖加入30mL水，微波功率为250-350W，提取时间10-12min。所述的多糖降解试剂为双氧水，并且在溶液中的最终浓度为20mM。本专利技术还提供了一种低分子量坛紫菜多糖抗衰老方面的应用，所述应用为低分子量坛紫菜多糖对WI38细胞衰老进程和相关蛋白的影响。为实现上述第二个目的，本专利技术提供了一种抗衰老保健品，它是由低分子量坛紫菜多糖和药学可以接受的载体组成；所述的抗衰老保健品是多糖含片。本专利技术具有如下优点：本专利技术中的低分子量坛紫菜多糖制备工艺简单稳定高效，适合大规模生产。本产品作为来源于食用海藻紫菜的天然多糖产物，安全性高，用于抗衰老实验中效果明显。附图说明图1多糖LSP在高效凝胶色谱图中的分子量分布图；图2多糖LSP对H2O2诱导的WI-38细胞活力和形态的影响；图3多糖LSP对衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)的影响；图4多糖LSP对衰老细胞染色质结构的影响；图5多糖LSP对衰老细胞相关蛋白p53和p21的影响。具体实施方式实施例1：低分子量坛紫菜多糖LSP的制备称取干燥坛紫菜粉碎后装入微波提取罐中，加入30倍蒸馏水浸泡1h。开启微波辐射，功率250-350W，辐照时间10-12min。提取液先用纱布过滤除去藻渣，然后用硅藻土助滤，得到澄清提取液。提取液浓缩后加入抗坏血酸，使最终浓度达到20mM，常温下搅拌1小时后将提取液装于截留分子量3500Da的透析袋中，流动自来水透析两天，蒸馏水透析一天之后减压浓缩，浓缩液加入无水乙醇使乙醇最终浓度达到75％，得到絮状白色沉淀。将沉淀用无水乙醇洗涤后烘干得到低分子量坛紫菜多糖LSP。实施例2：LSP对H2O2诱导的WI-38细胞活力的影响取对数生长期的年轻WI-38细胞(28PD)以每孔3×l03个细胞(100μL)接种于96孔培养板中，培养24h后加入新鲜配制的200μMH2O2，作用2h后弃去，换新鲜培液，加入梯度浓度的LSP，每一浓度设6个平行孔，并设有不加药物的空白对照组。只加H2O2的损伤组和无细胞的溶解对照组。培养3d后，每孔加入20μLMTT(5mg/mL)，37°C、5%CO2条件下培养4h，小心洗净孔内液体，每孔加150μLDMSO，在摇床上轻轻振荡10min，使结晶物充分溶解，而后于570nm处测定光吸收度，计算相对细胞活力，以不加药物的空白组细胞活力为100%。结果表明，LSP能剂量依赖地上调细胞活力，于10μg/mL效果最佳，上调约28%，形态上也向“年轻化”转变。实施例3：LSP对衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)的影响取对数生长期的年轻WI-38细胞以每孔5×104接种于24孔细胞培养板，培养24h后加入200μMH2O2作用2h，换新鲜培液，加入不同浓度的LSP，并设有不加药物的空白对照组和只加H2O2的损伤组。培养5d(期间隔3d换新鲜培养液)后进行衰老相关的SA-β-gal染色。结果表明，年轻WI-38细胞的SA-β-gal染色阳性率不超过5%，H2O2处理的年轻WI-38细胞于3d后开始着色，5d后SA-β-gal染色阳性率为55%左右，LSP干预后能有效降低染色率，10μg/mL处为24%左右,效果明显。同时发现，LSP干预H2O2处理的WI-38细胞后，染色质结构发生特征变化，趋于均一分布，说明LSP有干预衰老过程活性。实施例4：LSP对衰老相关蛋白p53和p21的影响提取WI-38细胞总蛋白，经免疫印迹后按照ECLPLUS免疫印迹试剂盒说明书进行显色，通过Chemilmager5500凝胶成像系统捕获图像。结果表明，H2O2处理后细胞内p53和p21蛋白质水平升高，LSP能明显下调两者蛋白质表达水平，且在10μg/mL处下调最显著。实施例5：多糖LSP含片的制备将多糖LSP和辅料(包含木糖醇、阿斯巴甜、薄荷脑)分别经粉碎机粉碎，充分混合，然后加入蒸馏水作为润湿剂，搅拌制粒，干燥，整粒均匀后加入硅胶和硬脂酸镁混合，用压片机进行压片，净化条件下包装即得LSP多糖含片。以上所述仅为本专利技术的较佳实施例，并不用以限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种坛紫菜多糖的降解方法，其特征在于包括以下降解步骤：（1）将干燥坛紫菜粉碎后加水浸泡后，在微波提取罐中进行微波辐照浸提，离心分离得粗提液；（2）在粗提液中加入降解试剂，常温下搅拌后过滤，滤液装入透析袋透析，浓缩后乙醇沉淀并干燥得低分子量坛紫菜多糖。

【技术特征摘要】
1.一种坛紫菜多糖的降解方法，其特征在于包括以下降解步骤：（1）将干燥坛紫菜粉碎后加水浸泡后，在微波提取罐中进行微波辐照浸提，离心分离得粗提液；（2）在粗提液中加入降解试剂，常温下搅拌后过滤，滤液装入透析袋透析，浓缩后乙醇沉淀并干燥得低分子量坛紫菜多糖。2.根据权利要求1所述的一种坛紫菜多糖的降解方法，其特征在于：所述的坛紫菜加水浸泡时间为1h。3.根据权利要求1所述的一种坛紫菜多糖的降解方法，其特征在于：所述的微波辐照浸提条件为1g坛紫菜多糖加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：张忠山，毛根祥，王晓梅，刘春冬，刘重斌，李永进，
申请(专利权)人：湖州师范学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33