癌症免疫疗法组合物和方法技术

本发明专利技术涉及用于癌症免疫疗法的组合物和方法。具体而言，本发明专利技术涉及工程改造的效应B细胞和它们在癌症免疫疗法中的用途。

Compositions and methods for cancer immunotherapy

The present invention relates to compositions and methods for cancer immunotherapy. Specifically, the present invention relates to engineered modified B cells and their use in cancer immunotherapy.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】关于联邦资助研究或开发的声明本专利技术在国立卫生研究院授予的CA082529的政府支持下完成。政府对本专利技术具有一定的权利。专利
本专利技术涉及用于癌症免疫疗法的组合物和方法。具体而言，本专利技术涉及工程改造的效应B细胞和它们在癌症免疫疗法中的用途。专利技术背景使用继承性转移的T细胞或树突细胞(DC)治疗癌症患者的临床试验已经显示了对晚期疾病患者的治疗功效。然而，对这样的免疫治疗方法的临床响应被限制在有限比例的治疗患者。一般而言，具有异源癌细胞群的大块肿瘤已用作抗原的来源以产生效应T细胞或引发DC疫苗。人肿瘤由在增殖、分化和引发子系肿瘤的能力方面不同的异源肿瘤细胞克隆构成。对于许多晚期血液恶性肿瘤和实体肿瘤，免疫疗法已成为一种可行的治疗备选方案(Mellman,I.等,2011.Nature480:480-489)。历史上，继承性免疫疗法的研究集中在针对肿瘤的效应T细胞的产生。肿瘤-活性的T细胞的继承性转移已成为一种用于癌症免疫疗法的有前景的策略(Ward,B.A.等,1988.JImmunol141:1047-1053;Chang,A.E.等,1989.CellImmunol120:419-429;Geiger,J.D.等,1993.JImmunotherEmphasisTumorImmunol13:153-165;Li,Q.等,2005.JImmunol175:1424-1432;Iuchi,T.等,2008.CancerRes68:4431-4441)。相比之下，B细胞在肿瘤免疫学中经常被忽略，可能是因为体液反应和细胞溶解反应对立起作用的通常的观念。在之前的研究中，在宿主免疫反应中B细胞功能主要集中在抗原呈递和抗体产生。然而，B细胞生物学的最近进展利用以前的发现和证实了B细胞可作为效应细胞(Li,Q.等,2009.JImmunol183:3195-3203;Li,Q.等,2011.ClinCancerRes17:4987-4995)或调节细胞(Mizoguchi,A.和A.K.Bhan.2006.JImmunol176:705-710;Mauri,C.和M.R.Ehrenstein.2008.TrendsImmunol29:34-40)起作用。B细胞在肿瘤免疫学中的作用已经证实了显著多样性。B细胞在表型和功能上是异源的(Lapointe,R.等,2003.CancerRes63:2836-2843;Lundy,S.K.2009.InflammRes58:345-357)，和在肿瘤免疫中起多种作用。一个方面，体内引发和体外活化的B细胞已在癌症的继承性免疫疗法中显示功效(Li,Q.等,2009.JImmunol183:3195-3203;Li,Q.等,2011.ClinCanerRes17:4987-4995)，和效应B细胞在不存在抗体的情况下可直接杀死肿瘤细胞(Li,Q.等,2011.ClinCancerRes17:4987-4995)。另一方面，静息B细胞可促进癌症的发生或进展(Perricone,M.A.等,2004.JImmunother27:273-281;Qin,Z.等,1998.NatMed4:627-630;Shah,S.,A.等,2005.IntJCancer117:574-586;Evans,D.E.等,2000.JImmunol164:688-697)。需要癌症免疫疗法的其它方法。专利技术概述本专利技术涉及用于癌症免疫疗法的组合物和方法。具体而言，本专利技术涉及工程改造的效应B细胞和它们在癌症免疫疗法中的用途。本专利技术的实施方案提供了治疗癌症的用途和方法，包括：a)从诊断有癌症的受试者分离B细胞;b)离体工程改造所述B细胞以表达高水平的FasL(例如，GenBank检索号U11821)和/或CXCR4(例如，GenBank检索号AY242129)；c)任选地活化所述B细胞(例如，用脂多糖(LPS)和抗-CD40单克隆抗体)；和d)给予所述工程改造和活化的B细胞至受试者。在一些实施方案中，所述细胞过表达FasL和/或CXCR4。在一些实施方案中，FasL和/或CXCR4基因可操作连接至非天然或外源启动子。在一些实施方案中，所述治疗包括选自遗传修饰(例如，FasL和/或CXCR4基因的敲入)或核酸治疗(例如，siRNA、反义、miRNA或shRNA治疗以改变FasL和/或CXCR4抑制物或调节物的表达)的方法。在一些实施方案中，B细胞进一步经工程改造以减少或消除IL-10的表达。在一些实施方案中，B细胞从肿瘤引流淋巴结、血液或脾细胞分离。在一些实施方案中，B细胞是CD19+B细胞。在一些实施方案中，1百万至1亿(例如，1百万至5百万)个工程改造的B细胞被给予受试者。在一些实施方案中，给予步骤进一步包括给予抗-IL-10抗体至受试者。在一些实施方案中，所述方法进一步包括从受试者分离T-细胞，离体活化T细胞以产生效应T细胞和给予受试者活化的T细胞的步骤。在一些实施方案中，T细胞用抗-CD3和抗-CD28单克隆抗体活化和在IL-2中扩增。在一些实施方案中，所述方法进一步包括给予一种或多种另外的癌症疗法(例如，化学疗法、放射疗法、手术或免疫疗法)。在一些实施方案中，本专利技术提供包含经工程改造以表达外源FasL和/或CXCR4的B细胞的组合物(例如，药物组合物)。在一些实施方案中，药物组合物还包含活化的T细胞。在一些实施方案中，工程改造的B细胞缺少功能性IL-10基因。其它实施方案提供前述工程改造的B细胞在治疗癌症中或在制备用于治疗癌症的药物中的用途。其它实施方案在本文中描述。附图简述图1显示4T1TDLNB细胞和健康B细胞的表型。在自4T1TDLN纯化的(A,D)WT和(B,E)IL-10−/−CD19+B细胞中检测产生IL-10的细胞。(C,F)在自WT健康LN纯化的CD19+B细胞中检测产生IL-10的细胞。图2显示IL-10−/−4T1TDLNB细胞在体外和体内比WT4T1TDLNB细胞更有效。(A)WT对比IL-10−/−B细胞的继承性转移后的肺转移性小结数。(B)通过活化的WT对比IL-10−/−4T1TDLNB细胞导致的4T1肿瘤细胞的细胞毒性，如在LDH释放测定法中所测量的。图3显示IL-10中和对继承性转移的WT4T1TDLNB细胞的抗肿瘤反应性的效果。(A)在有或没有IL-10抗体给予的情况下B细胞被继承性转移至具有乳房内脂肪垫肿瘤的小鼠。(B)仅IL-10抗体的抗肿瘤反应性。图4显示IL-10中和对4T1肿瘤细胞的细胞毒性的效果。来自PBMC的(A)纯化和活化的T细胞，(B)B细胞；或来自脾的(C)T细胞，(D)B细胞。图5显示抗-FasL阻断对4T1TDLNB细胞针对4T1肿瘤细胞的细胞毒性的效果。(A)在加入或未加入10或30μg/mL的抗-FasLmAb10的情况下，B细胞与4T1肿瘤细胞共培养。(B)自A/E和与4T1肿瘤细胞共培养后的WT和IL-10−/−4T1TDLN纯化的B细胞中FasL的检测。(C)4T1肿瘤细胞上Fas的检测。图6显示活化的TDLNB细胞在带肿瘤小鼠和健康小鼠中的运输。(A)显示CMTMR-染色的B细胞的相差和荧光显微镜检查。本文档来自技高网...

【技术保护点】
治疗癌症的方法，包括：a) 从诊断有癌症的受试者分离B细胞；b) 离体工程改造所述B细胞以表达FasL和/或CXCR4；和c) 给予所述工程改造的B细胞至所述受试者。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.03.27 US 61/9713181.治疗癌症的方法，包括：a)从诊断有癌症的受试者分离B细胞；b)离体工程改造所述B细胞以表达FasL和/或CXCR4；和c)给予所述工程改造的B细胞至所述受试者。2.权利要求1的方法，其中所述工程改造包括遗传修饰。3.权利要求2的方法，其中所述遗传修饰包括将表达FasL和/或CXCR4的核酸引入所述细胞。4.权利要求3的方法，其中所述核酸在载体中或作为裸核酸给予。5.权利要求1的方法，进一步包括在所述给予之前活化所述工程改造的B细胞的步骤。6.权利要求1的方法，其中所述B细胞是CD19+B细胞。7.权利要求1的方法，其中所述B细胞缺少IL-10表达。8.权利要求7的方法，其中所述B细胞经工程改造以缺少IL-10表达。9.权利要求8的方法，其中所述工程改造包括敲除表达IL-10的基因的基因疗法，或用siRNA、反义RNA、miRNA或shRNA的核酸疗法。10.权利要求1的方法，其中所述B细胞自肿瘤引流淋巴结、血液或脾细胞分离。11.权利要求1的方法，其中将1百万至1亿个工程改造的B细胞给予所述受...

【专利技术属性】
技术研发人员：Q李，
申请(专利权)人：密执安大学评议会，
类型：发明
国别省市：美国;US