本发明专利技术公开了一种树脂吸附法制备表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，此法以茶提取物为原料，用３５～４０％乙醇水溶液将其溶解后，先上超高交联吸附树脂柱，层析分离除去其它儿茶素组分，收集液再上极性大孔吸附树脂树脂柱脱色，纳滤浓缩后，再经Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０柱层析进一步纯化，冷冻干燥，得ＥＧＣＧ单体，产品的纯度大于９０％，得率３０％以上。本方法工艺简单，常温浓缩，避免儿茶素的高温氧化，溶剂无毒，产品质量高，满足了食品和医药行业的需求。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种天然产物的生产方法，特别是涉及一种采用树脂 吸附法制备表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，它属于天然有机化学 和农产品的深度加工领域。
技术介绍
儿茶素作为茶叶中重要的一类天然活性物质，近年来随着对其组 分化学结构、理化性质及生物活性研究的深入，需要提供大量高纯度 儿茶素作为制药原料、标准品或生物合成品的前体物质，新的领域对产品总儿茶素含量，特别是表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的 含量提出了更高的要求，传统提制技术和产品已经不能满足发展的需 要。研究各种儿茶素的药理活性和协同作用以及在体内的代谢，开发 儿茶素类新药，也均需大量高純度的多种儿茶素单体，尤其是EGCG 单体，现已被列为一种潜在的抗癌药物在中美等国被研究。近年来，国内外有许多关于提纯制备EGCG的研究，利用了许多 新型分离、制备方法，但主要还是以色谱分离为主。原理是利用儿茶 素各单体之间的性质差异，选择不同的吸脱附剂，使之得到分离，具 体而言，主要有以下几种方法1) 柱色谱以绿茶萃取物为原料，直接上填料柱，选用合适的 洗脱剂进行等度或梯度洗脱，并定性收集无交叉的流份，从而得到 EGCG纯品。2) 柱色谱预分离-制备型HPLC提纯以绿茶提取物为原料，经 柱色谱除去杂质，并将儿茶素中几种单体预分离为几个组分后，再用制备型HPLC分离其中含EGCG的组分，可得到EGCG纯品。3) 有机溶剂富集-柱色i普纯化以绿茶提取物或茶多酚为原料， 经有机溶剂多次萃取，除去杂质，提高儿茶素总纯度后，再用Sephadex LH-20柱色谱法分离可得EGCG单体。4) 高效液相色谱法以儿茶素粗品为原料，选择、优化出合适 的柱操作条件，直接用HPLC分离出儿茶素单体。5) 沉淀-吸附法利用儿茶素能与某些金属形成金属盐沉淀，再 用酸将其沉淀溶解，最后用柱色i普法除杂质，可得到EGCG单体。溶剂萃取法中大量使用有毒有机溶剂(氯仿)，溶剂残留难为食品和医药等行业所接受；沉淀法需调节酸碱度，使部分多酴类物质因 氧化而破坏，影响产品质量；HPLC法处理量小，成本高；此外，现 代新型分离技术，如制备型高效逆流色谱法和超临界流体萃取技术， 虽也已应用于EGCG的提取研究，但尚处于起始阶段。柱色谱法既 可克服溶剂萃取法中大量使用有毒有机溶剂的缺点又可避免沉淀法 中大量使用重金属沉淀剂的缺点，处理量大，适于EGCG的工业化 分离制备，但产品纯度偏低。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种工艺简单、不使用有毒有机溶剂，产 物纯度高、符合食品安全要求的树脂吸附法制备表没食子儿茶素没食 子酸酯的方法。其工艺设计原理是利用吸附分离高分子材料对各儿茶 素单体及色素吸附选择性的不同，进行柱色谱分离，并结合膜分离技 术、凝胶色傳分离技术制备高纯度EGCG单体。为实现上述目的，本技术的技术解决方案是 本专利技术是一种树脂吸附法制备表没食子儿茶素没食子酸酯的方 法，包括如下步骤1)配液用30~40°/。乙醇水溶液溶解茶多酚提取物，得深茶红色茶多酚溶液，茶多酚浓度为1.5 2.5g/L; 2)吸附层析 常温常压下，茶多酚溶液经超高交联吸附树脂吸附层析脱其它儿茶素 得到表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)收集液；3)吸附脱色常 温常压下，1000-1200毫升的EGCG收集液经60~80毫升的极性大孔 吸附树脂脱色，除去色素杂质，溶液由深茶红色变为淡黄色；4)纳 滤浓缩EGCG脱色后，收集液纳滤浓缩；5) EGCG单体制备将 EGCG的纳滤浓缩液经葡聚糖凝胶Sephadex LH-20层^f纯化，收集 EGCG单体流份，冷冻干燥得固体产品。步骤1 )中用1000毫升的30 40%乙醇水溶液溶解茶多酚提取物 1.5~2.5克。步骤2)中用1000毫升的茶多酚溶液经60~80毫升的超高交联 吸附树脂吸附层析脱其它儿茶素得到表没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCG)收集液。步骤2 )吸附脱除其它儿茶素组分是采用对其它儿茶素组分吸附 选择性较高的超高交联吸附树脂作为柱填料，茶提取物中其它儿茶素 被树脂吸附，EGCG随上柱液流出，流速lBV/h;选用的树脂为高比 表面积超高交联苯乙烯-二乙烯苯聚合物，平均孔径85~95nm，比表 面积1000 1100m2/g,平均粒径0.177~0.42mm。步骤3)所述的吸附脱色是采用极性大孔吸附树脂进4亍脱色，除 去色素杂质，EGCG流出液由深茶红色变为淡黄色，流速lBV/h;选 用的树脂为极性大孔苯乙烯-二乙烯苯聚合物，平均孔径28(K300nm, 比表面积100~120m2/g，平均粒径0.177~0.42mm。步骤4)所述的纳滤浓缩是将经步骤3)吸附脱色后的EGCG流 出液经纳滤浓缩，使其含固量提高至20%左右。步骤4)所述的纳滤浓缩所用的纳滤膜为聚偏氟乙烯、聚砜、聚醚砜、醋酸纤维素和复合膜，截留分子量150-200。步骤4 )中的葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱高为70~90cm。釆用上述方案后，本方法与现有柱色谱分离方法比较，具有如下 显著的优点1、 采用两级柱色谦法层析分离第一级是采用超高交联吸附树 脂，此树脂对其它儿茶素单体吸附选择性较强，上柱过程中被吸附截 留，EGCG吸附容量较小，随上柱液流出；第二级是采用极性大孔吸 附树脂选择性吸附脱色。两级吸附中其它儿茶素单体和色素杂质分别 被吸附，EGCG流出，这与一般柱色谱法纯化EGCG的工艺中EGCG 同时被吸附的分级洗脱方法不同。大部分柱色i普法纯化EGCG的方 法，多采用对EGCG具有较高吸附容量的吸附剂将溶液中的EGCG 吸附，其它儿茶素单体也会被吸附，色素流出，然后选用合适的洗脱 剂进行等度或梯度洗脱，定性收集EGCG流份，从而得到EGCG純 品。本方法缩短了 EGCG的吸附和洗脱工艺，缩短了工艺周期，可 大幅度减少洗脱液的用量，降低了生产成本。2、 树脂吸附分离后，再由葡聚糖凝胶S印hadexHL-20柱层析得 到EGGC单体，产品纯度达90%以上，最高可达95%左右。本专利技术方法具有工艺简单、不使用有毒有机溶剂，产物純度高、 符合食品安全要求等特点。具体实施例实施例1:1) 配液选EGCG含量67.8。/。的茶多酚为原料，称耳又1.5g,用 1000mL35。/。的乙醇水溶液溶解，得深茶红色溶液。2) 超高交联吸附树脂柱层析在常温常压下，将所配1000mL茶 多酚溶液泵入超高交联树脂吸附柱中，树脂柱体积60mL (即lBV=60mL)，吸附流速lBV/h,选用的超高交联吸附树脂为苯乙烯-二乙烯苯共聚体， 平均孔径85nm,比表面积1000m2/g,平均粒径 0.177mm，颜色泄漏即开始收集流出液，吸附完毕，加60mL (1BV) 35%乙醇水溶液顶洗，共收集吸附流出液及顶洗液约lOOOmL,即为 EGCG收集液。3) 大孔树脂吸附脱色在常温常压下，将1000毫升的EGCG收 集液泵入大孔树脂吸附柱中，树脂柱体积60mL (即lBV=60mL)， 吸附流速lBV/h,所选用的大孔树脂为极性大孔苯乙烯-二乙烯苯聚 合物，平均孔径280nm，比表面积100m2/g，平均粒径0.177mm。上 柱过程中大量色素被树脂吸附，EGCG流出，溶液由深茶红色变为淡 黄色。吸附完毕，力口本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种树脂吸附法制备表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，包括如下步骤：１）配液：用３０～４０％乙醇水溶液溶解茶多酚提取物，得深茶红色茶多酚溶液，茶多酚浓度为１．５～２．５ｇ／Ｌ；２）吸附层析：常温常压下，茶多酚溶液经超高交联吸附树脂吸附层析脱其它儿茶素得到表没食子儿茶素没食子酸酯（ＥＧＣＧ）收集液；３）吸附脱色：常温常压下，１０００～１２００毫升的ＥＧＣＧ收集液经６０～８０毫升的极性大孔吸附树脂脱色，除去色素杂质，溶液由深茶红色变为淡黄色；４）纳滤浓缩：ＥＧＣＧ脱色后，收集液纳滤浓缩；５）ＥＧＣＧ单体制备：将ＥＧＣＧ的纳滤浓缩液经葡聚糖凝胶Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０层析纯化，收集ＥＧＣＧ单体流份，冷冻干燥得固体产品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王瑞芳，陈发河，田标，翁凌，吴光斌，张凌晶，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：92[中国|厦门]
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