拉帕酚F在制备抑制肿瘤细胞生长的药物中的用途制造技术

提供了一种用于抑制肿瘤细胞生长的方法，所述方法包括向需要治疗的个体给药包括治疗有效量的拉帕酚F的组合物。还提供了包括拉帕酚F和药学上可接受的载体的组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求于2013.05.07提交的美国临时申请NO.61/820,542的优先权，其公开通过引用引入本文。
技术介绍
癌症在美国和世界范围内仍然是主要的健康问题。在美国，2012年诊断出估计新增超过150万预计新的癌症病例且癌症患者中有577190名死于癌症。癌症造成的死亡占美国全部死亡的近4/1。虽然增强的早期肿瘤诊断和管理显著提高患者的存活率，但仍然需要发展和发现新的抗癌疗法，因为有些患者对目前的抗癌药物表现出不敏感或治疗一段时间后出现抗药。
技术实现思路
本专利技术提供一种用于抑制肿瘤细胞生长的方法和组合物。如在本文中所用，术语肿瘤细胞和癌细胞可互换使用。在一个实施方式中，所述肿瘤细胞为实体肿瘤细胞。在另一个实施方式中，所述肿瘤细胞为血癌细胞(血液肿瘤细胞)。一方面，所述组合物包括药学上可接受的载体中的拉帕酚F。一方面，所述方法包括向个体给药包括治疗有效量的拉帕酚F的组合物。附图说明图1：A.拉帕酚F的化学结构。B和C.通过细胞菌落形成实验(B)证明的或相差显微镜检查(C)显示的拉帕酚F抑制各种组织类型中肿瘤细胞生长。所示细胞用拉帕酚F(50μM)处理72小时或未用拉帕酚F(50μM)处理。D和E.3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四氮唑溴化物(MTT)实验的结果显示拉帕酚F以时间依赖性方式和剂量依赖性方式抑制不同癌细胞株中的肿瘤细胞的生长。F和G.用拉帕酚F(50μM)对MCF10A非致癌性乳腺上皮细胞处理3天(F)或6天(G)。处理后，收集细胞进行MTT实验(G)或在相差显微镜(F)下拍摄照片。H.菌落形成实验的结果显示拉帕酚F通过A549(肺)、HCT116(结肠)和DU145(前列腺)肿瘤细胞抑制菌落形成。I-N.MTT实验的结果显示拉帕酚F抑制白血病细胞株、黑色素瘤细胞株和肉瘤细胞株中的细胞生长。图2：拉帕酚F诱导G1和G2细胞周期阻滞。(A)对用溶剂(DMSO)或拉帕酚F(50μM)处理72小时的细胞进行流式细胞仪细胞周期分析。(B)对用拉帕酚F(50μM)处理72小时的RKO细胞进行DAPI染色。还显示出有丝分裂细胞相对于总细胞的数量(有丝分裂指数，MI)。图3:拉帕酚F对关键细胞周期调节蛋白的调控。A-D.用溶剂(DMSO)或拉帕酚F(50μM)对指定细胞处理指定的时间且通过蛋白免疫印迹法分析不同的细胞周期调节蛋白的蛋白表达。“C”：溶剂处理的对照组。图4：拉帕酚F对半胱天冬酶激活的影响。用溶剂(DMSO)或拉帕酚F(50μM)对指定细胞处理指定的时间。使用指定的抗体通过蛋白免疫印迹法分析半胱天冬酶8、9和3(由半胱天冬酶原水平的降低来表示)的激活。“C”：溶剂处理的对照组。图5：p21在拉帕酚F-介导的细胞周期蛋白B/CDK1下调和G2阻滞中的作用。(A和B)对拉帕酚F未处理(DMSO)或处理(拉帕酚F)的p21-精通(p21-proficient)(亲代的)和p21-缺陷(p21基因敲除)的HCT116细胞进行细胞周期蛋白B和CDK1的蛋白表达分析(A)；或在表达靶向p21转录的两个不同区域的任意序列shRNA或P21-特异性shRNA的细胞中分析细胞周期蛋白B和CDK1的蛋白表达(B)。C和D.表达任意序列shRNAi或两个不同的p21shRNA的RKO细胞和MDA-MB-231细胞的细胞周期分析。细胞未经处理(DMSO)或用拉帕酚F(25μM)处理72小时，并通过流式细胞仪确定细胞周期谱图。图6：拉帕酚F诱导野生型p53细胞和缺陷-p53的细胞中p21-启动子的激活。A和BMCF-7、MDA-MB-231和RKO细胞未经处理或用拉帕酚F(50μM)处理48小时；然后将细胞分成两部分；一部分用于通过Northern杂交分析p21mRNA表达(A)且另一部分用于通过蛋白免疫印迹法进行p21蛋白分析(B)。使用全长p21cDNA作为Northern杂交分析的探针。C和D.不同p53状态的拉帕酚F处理和未处理的细胞中p21启动子荧光素酶活性。RKO细胞和MCF-7细胞表达野生型-p53蛋白而MDA-MB-231表达突变型-p53。HeLa细胞具有人乳头状瘤病毒；且p53蛋白在这些细胞中是非功能性的。转染了p21启动子荧光素酶构建体的细胞未经处理(DMSO)或用拉帕酚F(50μM)处理24小时，然后分析荧光素酶活性。图7：拉帕酚F通过减少其半衰期抑制突变型-p53的表达。A-C.拉帕酚F对表达野生型p53的细胞(MCF-7和RKO)中的野生型p53蛋白表达具有最小的影响；然而拉帕酚F大大减少了突变型-p53蛋白在MDA-MB-231、MDA-MB-468和T47D细胞中的表达(B和C)。D和E.拉帕酚F的处理降低了MDA-MB-231细胞中突变型-p53蛋白的半衰期。首先用拉帕酚F(50μM)或未用拉帕酚F对细胞处理24小时，然后向细胞培养基中加入放线菌酮(50μg/ml)培养0-8小时并在加入放线菌酮后0、2、4、6和8小时收集细胞。对样品进行蛋白质印记分析并确定用拉帕酚F处理或未用拉帕酚F处理的细胞的突变型-p53的半衰期。F和G.拉帕酚F降低了T47D细胞中突变型-p53蛋白的半衰期。按所述确定突变型-p53的半衰期。图8：拉帕酚F下调通常在人类癌症中过度表达并与致癌性转化有关联的多种致癌蛋白的表达。A-C.拉帕酚F抑制c-Myc(A)、MDM2(B)和HuR(C)的表达。未对细胞进行处理(“C”)或用拉帕酚F(50μM)处理指定时间并使用指定的抗体进行蛋白质印迹分析。图9：拉帕酚F对作为异种移植物的Hela肿瘤细胞的生长抑制作用。用溶剂或拉帕酚F(5毫克/千克/天或10毫克/千克/天)(静脉注射)对荷瘤小鼠处理15天。如在方法和材料中所述的对肿瘤尺寸、肿瘤体积和动物体重进行监测。结果表示为平均值±SEM。相比于拉帕酚F组，*P<0.05。B中所列照片显示取自未经处理(溶剂，N＝7)或用拉帕酚F(5mg/kg，N＝7；和10mg/kg，N＝6)处理的小鼠的实际肿瘤。具体实施方式我们已经确定了拉帕酚F的抗肿瘤(抗癌)细胞增殖作用并证明了其在肿瘤细胞株中的细胞生长抑制活性和在动物模型中的肿瘤抑制活性。我们的结果表明拉帕酚F对代表包括结肠、乳腺、肺、宫颈、前列腺、白血病、黑色素瘤和肉瘤细胞的不同组织的多种肿瘤细胞株发挥强烈的生长抑制作用。在一个实施方式中，本专利技术提供了用于抑制癌细胞生长的组合物和方法。所述组合物包括本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种减少癌细胞生长的方法，包括向需要治疗的个体给药有效量的药学上可接受的载体中的拉帕酚F。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.05.07 US 61/820,5421.一种减少癌细胞生长的方法，包括向需要治疗的个体给药有效量的药学上可接受的
载体中的拉帕酚F。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述拉帕酚F通过避免首过代谢的途径给药。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述途径包括静脉内、肠胃外、肿瘤内、肺内、
鼻内、颅内和皮下。
...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄英，胡英杰，孙清，刘抗伦，沈小玲，赛义德·M·舍克，
申请(专利权)人：纽约州立大学研究基金会，广州中医药大学，
类型：发明
国别省市：美国;US