一种扇贝足丝蛋白体外表达方法及应用技术

本发明专利技术涉及生物材料领域，公开了一种扇贝足丝弹性蛋白的发现、体外表达和性质研究，包括了关键组分蛋白的发现和体外重组表达等；通过对提取的扇贝足丝纤维蛋白组分进行分析，发现了一种扇贝足丝蛋白中的关键组分；利用基因克隆技术从扇贝基因组中获得了该基因重复序列部分的序列，建立了该基因重要重复序列片段的体外重组表达，获得了高效的体外重组表达。并对重组表达的组分进行了性质研究，结果提示该重复蛋白组分在溶液中具有形成β-折叠结构的特点，是一种良好的弹性蛋白材料，在医用材料等多个领域具有广阔的应用前景。

In vitro expression method and application of scallop foot silk protein

The present invention relates to the field of biological materials, and discloses a Scallop in Shell byssus elastin, found in vitro expression and characterization of the key components, including protein discovery and recombinant expression in vitro; the Scallop in Shell foot silk fiber protein for extraction were analyzed and found that a key protein in group Scallop in Shell bussus the partial sequence repeats; the gene obtained from Scallop in Shell genome using gene cloning techniques, established the expression of important repeat fragment of the gene recombination in vitro, obtained high expression recombinant. And the recombinant expression of components of the nature of research, the results suggest that the repeat protein components in solution with the formation of characteristics of beta folding structure, is a kind of elastic protein good materials, has a wide application prospect in many fields such as medical materials.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物材料领域，特别是一种扇贝足丝蛋白体外表达方法及应用。
技术介绍
浩瀚的海洋是一座巨型生物宝库，包含着成千上万的已知或未知的陆生生物所不具有的独特的生物资源。许多海洋生物在漫长的进化过程中形成了各种各样的黏附作用以适应和对抗动态的海洋环境，这在潮间带的生物类群中表现尤为突出。海洋无脊椎动物可暂时或永久性的吸附于各种生物或物体表面，它们进化出了独特的黏附机制以促进吸附作用。海洋多毛类Phragmatopomacalifornica能够用分泌出的蛋白黏附剂混合海底的贝壳及沙粒制造保护性的管子。这种黏附剂可以广泛黏附海洋中的多种材料。刺参Holothuriaforskali在受到惊吓时可以防御性地排出许多管状物(Cuvieriantubules)，生化鉴定表明这些管状物所含蛋白质与糖类的比例为3比2，并且所含的不溶性蛋白比例很大。可溶性的蛋白包括十种富含酸性氨基酸的蛋白，分子量从17到220kD。藤壶直接永久性地黏附于海洋水下基质表面(船体，采油平台及管本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种扇贝足丝蛋白体外表达方法，其特征在于，包括了蛋白的质谱鉴定，具体操作步骤如下：扇贝足丝蛋白的采集：将市售的栉孔扇贝培养在19℃恒温循环海水的条件下，每隔一天用干净手术刀片对黏附在培养笼中的足丝纤维蛋白进行刮取，进行足丝全蛋白的收集，收集到的足丝纤维置于‑20℃冰箱内保存；扇贝足丝蛋白的粗提取：将收集到的扇贝足丝蛋白干粉在液氮中研磨成粉末，分装到1.5mL EP管中，加入30μL 5％醋酸‑盐酸胍裂解液，37℃金属浴抽提足丝蛋白30分钟，然后于20,000g 4℃高速离心30分钟，取上清，作为扇贝足丝黏附蛋白粗提液；蛋白质质谱鉴定：将提取的蛋白质透析浓缩后按照每100μg蛋白质底物加入3.3...

【技术特征摘要】
1.一种扇贝足丝蛋白体外表达方法，其特征在于，包括了蛋白的质谱鉴定，
具体操作步骤如下：
扇贝足丝蛋白的采集：将市售的栉孔扇贝培养在19℃恒温循环海水的条件
下，每隔一天用干净手术刀片对黏附在培养笼中的足丝纤维蛋白进行刮取，进
行足丝全蛋白的收集，收集到的足丝纤维置于-20℃冰箱内保存；
扇贝足丝蛋白的粗提取：将收集到的扇贝足丝蛋白干粉在液氮中研磨成粉
末，分装到1.5mLEP管中，加入30μL5％醋酸-盐酸胍裂解液，37℃金属浴抽提
足丝蛋白30分钟，然后于20,000g4℃高速离心30分钟，取上清，作为扇贝足
丝黏附蛋白粗提液；
蛋白质质谱鉴定：将提取的蛋白质透析浓缩后按照每100μg蛋白质底物加入
3.3μg酶的比例加入1μg/uL的Trypsin，37℃水浴24小时，利用Q-Exactive质
谱仪检测消化后得到的肽段溶液中的肽段信号，以实验室自己建立的栉孔扇贝
足转录组数据库为模板，对质谱检测到的肽段序列进行搜索；
体外表达：基于足转录组数据库对应的ORF，进行引物设...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘伟治，徐平平，苗艳，包振民，王师，张玲玲，甘旭华，
申请(专利权)人：中国海洋大学，青岛卫辽医用生物材料有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37