同时检测烟草及烟草制品中烟草特有亚硝胺和挥发性N-亚硝胺的GC-MS/MS方法技术

一种同时检测烟草及烟草制品中烟草特有亚硝胺和挥发性N‑亚硝胺的GC‑MS/MS方法，具体包括四种烟草特有亚硝胺：NNN、NAT、NAB、NNK，和八种挥发性N‑亚硝胺：NDMA、NPYR、NPIP、NMOR、NEMA、NDEA、NDPA、NDBA；其特征在于：在烟草样品中加入氢氧化钠溶液，手持振荡混合均匀后加入二氯甲烷，振荡器振荡，加入无水硫酸镁，手持振荡后置于振荡器中振荡，然后离心、浓缩，最后用GC‑MS/MS分析。本发明专利技术的优点在于：样品前处理简便、烟草特有亚硝胺和挥发性N‑亚硝胺能够同时被分析，可批量处理，且该方法测定速度快、加标回收率好、精密度高，可为准确评估烟草及烟草制品中烟草特有亚硝胺和挥发性N‑亚硝胺的安全风险提供技术支撑。

GC-MS/MS method for simultaneous determination of tobacco specific nitrosamines and volatile N- nitrosamines in tobacco and tobacco products

A MS/MS method for the simultaneous detection of GC TSNA and N volatile nitrosamines in tobacco and tobacco products, including four kinds of tobacco specific nitrosamines: NNN, NAT, NAB, NNK, N and eight kinds of volatile nitrosamines: NDMA, NPYR, NPIP, NMOR, NEMA NDEA, NDPA, NDBA; is characterized by adding sodium hydroxide solution in tobacco samples, with oscillation evenly mixed addition of dichloromethane, oscillator, anhydrous Magnesium Sulfate, a hand-held oscillator oscillation oscillation, and then centrifuged and concentrated, finally using GC MS/MS analysis. The invention has the advantages of simple sample pretreatment and tobacco specific nitrosamines and N volatile nitrosamines can be analyzed at the same time, batch processing, velocity measurement and the method, fast recovery, high precision, can provide technical support for the safety risk of tobacco specific nitrosamines and volatile N accurate assessment of nitrosamines in tobacco and tobacco products.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于烟草及烟草制品中烟草特有亚硝胺和挥发性N-亚硝胺检测
，具体是使用气相色谱-串联质谱法（GC-MS/MS）同时分析烟草及烟草制品中烟草4种特有亚硝胺和8种挥发性N-亚硝胺，利用该方法可快速定量分析烟草及烟草制品中12种亚硝胺的含量。
技术介绍
烟草特有亚硝胺（TSNAs）是烟草及烟草制品中最主要的一类致癌物质，而TSNAs中最关注的4种分别为N-亚硝基降烟碱（NNN）、N-亚硝基新烟草碱（NAT）、N-亚硝基假木贼碱（NAB）、4-甲基亚硝基吡啶基丁酮（NNK）；挥发性N-亚硝胺（VNAs）是一类受到广泛关注的致癌类物质，早在1970年以前研究者就已经发现烟草中含有挥发性N-亚硝胺，主要包括N-亚硝基二甲基胺（NDMA）、N-亚硝基吡咯烷（NPYR）、N-亚硝基哌啶（NPIP）、N-亚硝基吗啉（NMOR）、N-亚硝基甲基乙基胺（NEMA）、N-亚硝基二乙胺（NDEA）、N-亚硝基二丙胺（NDPA）和N-亚硝基二丁胺（NDBA)等8种挥发性N-亚硝胺，其中NDMA为2A级致癌物，NPYP、NMOR、NPIP为2B级致癌物。烟草和烟草制品的基质比较复杂，在亚硝胺的检测中需要采用相应的前处理方法净化基质。固相萃取、液液萃取、固相微萃取等前处理技术可以降低基质效应，但相应地也增加了样品分析时间并限制了样品通量，截至目前，关于同时测定烟草和烟草制品中烟草特有亚硝胺和挥发性N-亚硝胺的报道很少，有必要进行进一步研究。
技术实现思路
本专利技术的目的正是基于上述现有技术状况而专门提供的一种同时检测烟草及烟草制品中烟草特有亚硝胺和挥发性N-亚硝胺的GC-MS/MS方法，实现了对烟草特有亚硝胺和挥发性N-亚硝胺的同时分析，简化了前处理操作，可以对烟草及烟草制品进行批量快速检测。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：一种同时检测烟草及烟草制品中烟草特有亚硝胺和挥发性N-亚硝胺的GC-MS/MS方法，具体包括四种烟草特有亚硝胺：NNN、NAT、NAB、NNK，和八种挥发性N-亚硝胺：NDMA、NPYR、NPIP、NMOR、NEMA、NDEA、NDPA、NDBA，是在烟草样品中加入氢氧化钠溶液，手持振荡混合均匀后加入二氯甲烷，振荡器振荡，加入无水硫酸镁，手持振荡后置于振荡器中振荡，然后离心、浓缩，最后用GC-MS/MS分析，具体步骤如下：a、内标溶液的配制：配制内标浓度为1µg/ml的NDMA-D6、NMEA-D3、NDEA-D10、NDPA-D14、NMOR-D8、NPYR-D8、NPIP-D8、NDBA-D8的混合内标二氯甲烷工作溶液和NNK-D4、NAT-D4、NAB-D4和NNK-D4的混合内标二氯甲烷溶液；b、混合标准溶液的配制：以二氯甲烷为溶剂，配制烟草特有亚硝胺系列标准溶液，具体浓度为：5ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml、5000ng/ml；分别加入烟草特有亚硝胺内标溶液，使各内标物的浓度均为400ng/ml；以二氯甲烷为溶剂，配制挥发性N-亚硝胺系列标准溶液，具体浓度为：0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/ml和100ng/ml，分别加入挥发性N-亚硝胺内标溶液，使各内标物的浓度均为20ng/ml。c、烟草样品准备：烟草及烟草制品磨碎后冷藏保存以备用；d、萃取：将准确称取的4g样品放于50mL离心管中加入4ml浓度为10%的氢氧化钠溶液以提高目标物的提取效果，手持振荡15s混合均匀，然后加入30ml二氯甲烷和相应的内标溶液（烟草特有亚硝胺内标溶液的加入量为200µl，挥发性N-亚硝胺内标溶液的加入量20µl），将离心管置于振荡器振荡20min，振荡后加入4.5g无水硫酸镁，手持振荡15s后置于振荡器中振荡2min；e、离心：样品在高速离心机上以11000r/min离心5min；f、浓缩：离心后取上清液在43℃±2℃下氮吹浓缩至2ml左右，将其转移至2mL色谱小瓶中，以备检测；g、GC-MS/MS测定，GC-MS/MS仪器工作参数如表1：表1GC-MS/MS仪器工作参数目标物与内标的保留时间和质谱参数如表2：表2目标物与内标的保留时间和质谱参数保留时间(min)定量离子对定性离子对NDMA8.75892→7592→58NDMA-D68.71598→8198→46NMEA10.528106→89106→61NMEA-D310.504109→92109→64NDEA11.908120→103120→75NDEA-D411.822130→113.1130→81NMBA14.150134→117134→61NDPA15.013148→131.1148→89NDPA-D1014.891162→145162→50NMOR15.173134→117134→87NMOR-D815.125142→125142→95NPYR15.390118→101118→55NPYR-D1015.322126→109126→62NPIP15.960132→115132→69NPIP-D1015.893142→125142→78NDBA18.014176→159176→103NDBA-D1817.858194→177194→113NNN26.645178→148178→120.5NNN-D426.599182→109182→152NAT27.266190→160.1190→106NAT-D427.211194→164194→110NAB27.978192→162192→133.1NAB-D427.923196→166196→136NNK32.110208→122.1208→148NNK-D432.026212→126212→152h、结果计算。本专利技术的优点在于：样品前处理简便、烟草特有亚硝胺和挥发性N-亚硝胺能够同时被分析，可批量处理，且该方法测定速度快、加标回收率好、精密度高，可为准确评估烟草及烟草制品中烟草特有亚硝胺和挥发性N-亚硝胺的安全风险提供技术支撑。具体实施方式本专利技术结合实例作进一步描述，但并不限制本专利技术。实例1按照上述
技术实现思路
中步骤（b）配制系列标准溶液，然后再用GC-MS/MS进行测定，得到线性方程和相关系数。以信噪比为3和10计算检出限和定量限。结果表明方法线性好、检出限低（结果见表3）表3烟草特有亚硝胺和挥发性N-亚硝胺的标准曲线、检出限和定量限实例2按照上述
技术实现思路
中步骤d、e和f，在样品处理前加入定量的标准品溶液，结果如表4所示，所有目标物的日内回收率在88.5%-117%之间，日间回收率在89.2%-107%之间。日内精密度和日间精密度分别为4.3%-13.5%和6.2%-15.1%，精密度良好。实例3按照上述
技术实现思路
中步骤测定7种样品中的烟草特有亚硝胺和挥发性N-亚硝胺含量，结果见表5。。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时检测烟草及烟草制品中烟草特有亚硝胺和挥发性N‑亚硝胺的GC‑MS/MS方法，具体包括四种烟草特有亚硝胺：NNN、NAT、NAB、NNK，和八种挥发性N‑亚硝胺：NDMA、NPYR、NPIP、NMOR、NEMA、NDEA、NDPA、NDBA； 其特征在于：在烟草样品中加入氢氧化钠溶液，手持振荡混合均匀后加入二氯甲烷，振荡器振荡，加入无水硫酸镁，手持振荡后置于振荡器中振荡，然后离心、浓缩，最后用GC‑MS/MS分析。

【技术特征摘要】
1.一种同时检测烟草及烟草制品中烟草特有亚硝胺和挥发性N-亚硝胺的GC-MS/MS方法，具体包括四种烟草特有亚硝胺：NNN、NAT、NAB、NNK，和八种挥发性N-亚硝胺：NDMA、NPYR、NPIP、NMOR、NEMA、NDEA、NDPA、NDBA；其特征在于：在烟草样品中加入氢氧化钠溶液，手持振荡混合均匀后加入二氯甲烷，振荡器振荡，加入无水硫酸镁，手持振荡后置于振荡器中振荡，然后离心、浓缩，最后用GC-MS/MS分析。2.根据权利要求1所述的GC-MS/MS方法，其特征在于：该方法的具体步骤如下：a、内标溶液的配制：配制内标浓度为1µg/ml的NDMA-D6、NMEA-D3、NDEA-D10、NDPA-D14、NMOR-D8、NPYR-D8、NPIP-D8、NDBA-D8的混合内标二氯甲烷溶液和NNK-D4、NAT-D4、NAB-D4和NNK-D4的混合内标二氯甲烷溶液；b、混合标准溶液的配制：以二氯甲烷为溶剂，配制烟草特有亚硝胺系列标准溶液，并分别加入烟草特有亚硝胺内标溶液，使各内标物的浓度均为400ng/ml；以二氯甲烷为溶剂，配制挥发性N-亚硝胺系列标准溶液，并分别加入挥发性N-亚硝胺内标溶液，使各内标物的浓...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭军伟，谢复炜，刘显军，刘雷雨，王洪波，赵乐，樊美娟，潘立宁，陈黎，
申请(专利权)人：中国烟草总公司郑州烟草研究院，
类型：发明
国别省市：河南;41