一种非诊断目的的人体病原微生物耐药性基因的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种非诊断目的的人体病原微生物耐药性基因的检测方法。所述方法包括：确定耐药性基因、内源标准基因和外源标准基因；制备多重扩增引物；向待测样品中加入外源核酸，得到混合样品并提取基因组；向基因组中加入外源标准基因，获得混合核酸；扩增混合核酸，利用扩增产物构建高通量测序文库并进行高通量测序，得到测序片段组；分析所述测序片段组，并根据获得的外源标准基因和内源标准基因的测序片段的数量，判断实验是否成功；若实验成功，则计算耐药性基因的含量；根据耐药性基因的含量判定待测样品是否含有耐药性基因。所述方法可以一次性定量检测任意微生物中的任意多种希望检测的耐药性基因，且检测不需要培养与纯化微生物，速度快，结果准确。

Method for detecting antibiotic gene of human pathogenic microorganism

The invention discloses a method for detecting human pathogenic microorganism resistance gene. The method includes: determining the resistance gene, endogenous and exogenous gene standard preparation standard gene; multiplex amplification primers; to the exogenous nucleic acid samples, obtained mixed samples and extract the genome; exogenous gene to standard genome, hybrid nucleic acid amplification; nucleic acid hybrid, constructed using high-throughput sequencing and PCR product library high throughput sequencing, sequencing of the fragments obtained group; analysis of the sequenced fragment group, and according to the number of exogenous and endogenous gene standard standard gene fragment, determine whether the experiment is successful; if the experiment is successful, then calculate the content of drug resistance gene; drug resistance gene according to the content determination of sample containing resistance genes. The method can be used for quantitative detection of a variety of antibiotic resistant genes in any microorganism in a single time, and the detection and the purification of microorganisms are not required.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，特别涉及一种人体病原微生物耐药性基因的检测方法。
技术介绍
抗生素类药物广泛应用于防治人体疾病，滥用抗生素类药物会导致微生物进化出耐药性基因，并产生耐药性，这使得抗生素类药物在防治疾病时失效。病原微生物耐药性基因是治疗各种疾病时用药的重要依据。现有的检测耐药性基因的方法包括：预估待测样品上携带的需要检测的耐药性基因的病原菌，分离并纯化该病原菌，通过PCR(PolymeaseChainReaction，聚合酶链式反应)引物扩增该耐药性基因，利用电泳或实时定量PCR方法逐一判断待测样品中是否存在需要检测的耐药性基因。在实现本专利技术的过程中，专利技术人发现现有技术至少存在以下问题中的一种：需要培养、分离和纯化病原菌，使得检测的时间较长，延误治疗时机；无法检测不可培养的耐药菌中的耐药性基因；一次只能针对一种或少数几种病原菌进行检测；一次只能检测一种或少数几种耐药性基因，不能检测到待测样品中所有的耐药性基因，不能给予用药所需的全面信息；不能实现本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人体病原微生物耐药性基因的检测方法，其特征在于，所述方法包括：确定待测样品中需要检测的微生物的耐药性基因、所述待测样品中的内源标准基因和所述待测样品的外源标准基因，所述待测样品为人体器官与组组织、人体器官与组织的一部分、人体体液、人体分泌物或人体排泄物；制备用于扩增所述耐药性基因、所述内源标准基因和所述外源标准基因的测试区域的多重扩增引物；提取所述待测样品的基因组；向所述待测样品的基因组中加入所述外源标准基因，获得混合核酸；利用所述多重扩增引物对所述混合核酸进行扩增，得到扩增产物，利用所述扩增产物构建高通量测序文库；对所述高通量测序文库进行高通量测序，得到测序片段组；分析所述测序片段组，获...

【技术特征摘要】
1.一种人体病原微生物耐药性基因的检测方法，其特征在于，所述方法包括：
确定待测样品中需要检测的微生物的耐药性基因、所述待测样品中的内源标准基因和
所述待测样品的外源标准基因，所述待测样品为人体器官与组组织、人体器官与组织的一
部分、人体体液、人体分泌物或人体排泄物；
制备用于扩增所述耐药性基因、所述内源标准基因和所述外源标准基因的测试区域的
多重扩增引物；
提取所述待测样品的基因组；
向所述待测样品的基因组中加入所述外源标准基因，获得混合核酸；
利用所述多重扩增引物对所述混合核酸进行扩增，得到扩增产物，利用所述扩增产物
构建高通量测序文库；
对所述高通量测序文库进行高通量测序，得到测序片段组；
分析所述测序片段组，获得所述待测样品中所述耐药性基因的测序片段的数量、所述
内源标准基因的测序片段的数量和所述外源标准基因的测序片段的数量；
根据所述外源标准基因的测序片段的数量和所述内源标准基因的测序片段的数量，判
断实验是否成功；
若所述实验成功，则计算所述待测样品中所述耐药性基因的含量；
根据所述耐药性基因的含量判定所述待测样品是否含有耐药性基因。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述耐药性基因至少为1个，所述内源
标准基因至少为1个，所述外源标准基因至少为1个。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述内源标准基因为所述待测样品的
微生物中的基因。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述外源标准基因不存在于已知基因
组的生物中。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，用于扩增所述耐药性基因的引物的设
计区域或扩增区域与所述待测样品中的生物的基因组的其它区域的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张静，张英，彭海，卢龙，
申请(专利权)人：江汉大学，辛辛那提儿童医院，
类型：发明
国别省市：湖北;42