一种三肽囊素衍生物的生产方法技术

本发明专利技术公开了一种三肽囊素衍生物的生产方法，其三肽囊素衍生物为2HCL-Lys-His-Gly-NH2，包括五个步骤：步骤一，制备NH2-Gly-Resin；步骤二，制备NH2-His(Trt)-Gly-Resin；步骤三：制备Boc-Lys(Boc)-His(Trt)-Gly-Resin；步骤四：用TFA处理Boc-Lys(Boc)-His(Trt)-Gly-Resin，去除保护基，从而得到NH2-Lys-His-Gly-NH2，步骤五：得到目标产品。本发明专利技术是用固液结合方法合成三肽囊素衍生物，先用液相方法合成所需要的原料，然后用固相方法将三肽囊素结构合成出来。采用固液分离方法可以有效回收溶剂，确保成本的节约和降低废水的产出量。

Method for producing three peptide derivative

The invention discloses a method for producing three peptide derivatives of Bursin, third peptide bursin derivatives as 2HCL-Lys-His-Gly-NH2, consists of five steps: step one, the preparation of NH2-Gly-Resin; step two, the preparation of NH2-His (Trt) -Gly-Resin; step three: preparation of Boc-Lys (Boc) -His (Trt) -Gly-Resin; step four: Boc-Lys TFA (Boc) -His (Trt) -Gly-Resin, the removal of the protecting group, so as to get the NH2-Lys-His-Gly-NH2, step five: get the target product. The invention relates to a method for synthesizing a three peptide derivative by a solid liquid binding method. The raw materials are synthesized by a liquid phase method, and then the structure of the three peptide is synthesized by the solid state method. Solid liquid separation method can be used to recover the solvent effectively, which can save the cost and reduce the output of wastewater.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及兽药学合成领域，尤其涉及一种三肽囊素衍生物的生产方法。
技术介绍
法氏囊是家禽体内的中枢免疫器官，在免疫反应中发挥着重要的作用，三肽囊素是法氏囊具有免疫功能的主要活性因子，Glick等报道用三肽囊素去注射去除法氏囊的仔鸡，可使其回复产生抗体的能力。注射三肽囊素均可显著提高家禽的成活率。目前国内关于三肽囊素的研究已经进入到规模化阶段。但是仍存在成本过高，产品重复性较差等问题，远远无法满足市场上对三肽囊素的需要，所以，怎么样更高效更节约的生产是一个需要攻克的课题。目前市场上关于提高动物免疫力的产品种类非常多，但是很少有产品能够起到从源头上提高动物免疫力，囊素肽是目前已经被证实的免疫增强剂，得到公认的一种免疫增强剂。随着人们生活水平的提升，对生活质量的要求也越来越高,而且近几年禽流感一直是一个比较突出的问题，那么研发出一种价格低廉，适合产业化，适用大部分养殖户的免疫增强剂且效果显著就是一个非常市场非常迫切的需求。2HCL-Lys-His-Gly-NH2是一种常见的三肽囊素衍生物，但是目前其合称方法存在废水排放大，对环境污染大，成本大，且操作不便等缺点。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术提供一种三肽囊素衍生物的生产方法，其采用的技术方案如下：一种三肽囊素衍生物的生产方法，其三肽囊素衍生物为2HCL-Lys-His-Gly-NH2，包括如下步骤：步骤一：将树脂载体用二氯甲烷溶胀，然后将Fmoc-Gly-OH溶解于DMF中，与树脂溶液混匀，加入催化剂，反应2h，形成Fmoc-Gly-resin，然后加入强碱去除Fmoc保护基团，得到NH2-Gly-Resin；Fmoc-Gly-Resin+Piperidine→NH2-Gly-Resin；步骤二：将Fmoc-His(Trt)-OH溶解于N,N二甲基甲酰胺中，加入DIC,HOBT将HIS羧基活化为活泼酯，在惰性溶剂下与NH2-Gly-Resin反应，得到Fmoc-His(Trt)-Gly-Resin，然后在强碱性条件下去除Fmoc保护基，得到NH2-His(Trt)-Gly-Resin；步骤三：在惰性溶剂下Boc-Lys(Boc)-OH，DIC，HOBT将其羧基活化为活泼酯，与NH2-His(Trt)-Gly-Resin反应1h得到Boc-Lys(Boc)-His(Trt)-Gly-Resin；步骤四：用TFA处理Boc-Lys(Boc)-His(Trt)-Gly-Resin，去除保护基，从而得到NH2-Lys-His-Gly-NH2；步骤五：采用高效液相色谱法将流动相调成含有4％的HCL，流动相浓度在适当比例下，将式六在此流动相下通过柱子即可得到2HCL-Lys-His-Gly-NH2。步骤一中所述的Fmoc-Gly-OH的制备方法为在二氧六环中将Fmoc-Osu与H-Gly-OH在适当PH值下混合反应2h。步骤二中所述的Fmoc-His(Trt)-OH的制备方法为惰性溶剂中将Fmoc-Osu与H-His(Trt)-OH在适当PH值下混合反应2h。步骤三中所述的BOC-Lys(Boc)-OH是通过NH2-Lys-OH在惰性溶剂中加入醋酸酐并调节PH为碱性，室温反应制得。本专利技术是用固液结合方法合成三肽囊素，先用液相方法合成所需要的原料，然后用固相方法将三肽囊素结构合成出来。采用固液分离方法可以有效回收溶剂，确保成本的节约和降低废水的产出量。所用的试剂时间以及操作步骤都大幅度缩短，而且大部分试剂以及原料可以回收再利用，成本这方面得到很大的节省。附图说明图1一种三肽囊素衍生物的生产方法流程图图2AgilentMS分子量鉴定结果图3AgilentHPLC含量鉴定结果具体实施方式为了准确、清楚地理解本专利技术，对于说明书中出现的如下术语具有本领域常用的含义，更进一步表述如下：术语“Fmoc”指芴甲氧羰基术语“Boc”指叔丁氧羰基术语“HCL”指盐酸术语“Gly”指甘氨酸术语“OH”指羟基术语“DMF”指N,N-二甲基甲酰胺术语“resin”指树脂术语“Piperidine”，中文翻译为，指六氢吡啶术语“His”指组氨酸术语“Trt”指三苯甲基术语“DIC”指二异丙基碳二亚胺术语“HOBT”指1-羟基苯并三唑术语“Fmoc-His(Trt)-Gly-Resin”指术语“TFA”指三氟乙酸术语“Lys”指赖氨酸术语“Osu”指琥珀酰亚胺下面结合说明书附图一步阐述本专利技术的实施方式图1为本专利技术的流程图，如图1所示：一种三肽囊素衍生物的生产方法，其三肽囊素衍生物为2HCL-Lys-His-Gly-NH2，包括如下步骤：步骤一：将树脂载体用二氯甲烷溶胀，然后将Fmoc-Gly-OH溶解于DMF中，与树脂溶液混匀，加入催化剂，反应2h，形成Fmoc-Gly-resin，然后加入强碱去除Fmoc保护基团，得到NH2-Gly-Resin；Fmoc-Gly-Resin+Piperidine→NH2-Gly-Resin；步骤二：将Fmoc-His(Trt)-OH溶解于N,N二甲基甲酰胺中，加入DIC,HOBT将HIS羧基活化为活泼酯，在惰性溶剂下与NH2-Gly-Resin反应，得到Fmoc-His(Trt)-Gly-Resin，然后在强碱性条件下去除Fmoc保护基，得到NH2-His(Trt)-Gly-Resin；步骤三：在惰性溶剂下Boc-Lys(Boc)-OH，DIC，HOBT将其羧基活化为活泼酯，与NH2-His(Trt)-Gly-Resin反应1h得到Boc-Lys(Boc)-His(Trt)-Gly-Resin；步骤四：用TFA处理Boc-Lys(Boc)-His(Trt)-Gly-Resin，去除保护基，从而得到NH2-Lys-His-Gly-NH2；步骤五：采用高效液相色谱法将流动相调成含有4％的HCL，流动相浓度在适当比例下，将式六在此流动相下通过柱子即可得到2HCL-Lys-His-Gly-NH2。在具体实施中，下列物质的制备如下：Fmoc-Gly-OH的制备：称取100g的H-Gly-OH溶解于DCM(二氯甲烷)中，加热回流，然后滴加1.1eq当量的Fmoc-OSU滴毕搅拌反应2h，TLC原料完全，减压抽去溶液，加入20倍体积水，析出固体，然后抽滤，水洗3-4次，得Fmoc-Gly-OH，收率92％。Fmoc-His(T本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种三肽囊素衍生物的生产方法，其三肽囊素衍生物为2HCL‑Lys‑His‑Gly‑NH2，包括如下步骤：步骤一：将树脂载体用二氯甲烷溶胀，然后将Fmoc‑Gly‑OH溶解于DMF中，与树脂溶液混匀，加入催化剂，反应2h，形成Fmoc‑Gly‑resin，然后加入强碱去除Fmoc保护基团，得到NH2‑Gly‑Resin；Fmoc‑Gly‑Resin+Piperidine→NH2‑Gly‑Resin；步骤二：将Fmoc‑His(Trt)‑OH溶解于N,N二甲基甲酰胺中，加入DIC,HOBT将HIS羧基活化为活泼酯，在惰性溶剂下与NH2‑Gly‑Resin反应，得到Fmoc‑His(Trt)‑Gly‑Resin，然后在强碱性条件下去除Fmoc保护基，得到NH2‑His(Trt)‑Gly‑Resin；步骤三：在惰性溶剂下Boc‑Lys(Boc)‑OH，DIC，HOBT将其羧基活化为活泼酯，与NH2‑His(Trt)‑Gly‑Resin反应1h得到Boc‑Lys(Boc)‑His(Trt)‑Gly‑Resin；步骤四：用TFA处理Boc‑Lys(Boc)‑His(Trt)‑Gly‑Resin，去除保护基，从而得到NH2‑Lys‑His‑Gly‑NH2；步骤五：采用高效液相色谱法将流动相调成含有4％的HCL，流动相浓度在适当比例下，将式六在此流动相下通过柱子即可得到2HCL‑Lys‑His‑Gly‑NH2。...

【技术特征摘要】
1.一种三肽囊素衍生物的生产方法，其三肽囊素衍生物为2HCL-Lys-His-Gly-NH2，包括如下
步骤：
步骤一：将树脂载体用二氯甲烷溶胀，然后将Fmoc-Gly-OH溶解于DMF中，与树脂溶液
混匀，加入催化剂，反应2h，形成Fmoc-Gly-resin，然后加入强碱去除Fmoc保护基团，得
到NH2-Gly-Resin；
Fmoc-Gly-Resin+Piperidine→NH2-Gly-Resin；
步骤二：将Fmoc-His(Trt)-OH溶解于N,N二甲基甲酰胺中，加入DIC,HOBT将HIS羧
基活化为活泼酯，在惰性溶剂下与NH2-Gly-Resin反应，得到Fmoc-His(Trt)-Gly-Resin，
然后在强碱性条件下去除Fmoc保护基，得到NH2-His(Trt)-Gly-Resin；
步骤三：在惰性溶剂下Boc-Lys(Boc)-OH，DIC，HOBT将其羧基活化为活泼酯，与
NH2-His(Trt)-Gly-Resin反应1h得到
Boc-Lys(Boc)-His(Tr...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴疆，王宇，
申请(专利权)人：吴疆，王宇，
类型：发明
国别省市：江苏;32