大型溞测定新烟碱类农药毒性的方法技术

本发明专利技术公开了一种大型溞测定新烟碱类农药毒性的方法，包括以下步骤：将新烟碱类农药溶解制成农药储备液；将农药储备液与Elendt M4培养液混合配制成梯度浓度的混合液，将混合液做为大型溞的生活用水，持续培养48h，培养过程中，每隔24h时记录大型溞的生物效应参数和混合液的理化参数；根据大型溞的生物效应参数和农药储备液的理化参数计算农药对半数抑制浓度EC50，判断新烟碱类农药的毒性。具有操作简便、实用性强、检测速度快，精确度高等优势。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及养殖
，尤其涉及一种大型溞测定新烟碱类农药毒性的方法。
技术介绍
大型溞是世界范围内广泛分布的甲壳纲枝角类无脊椎动物，它以浮游植物为食，同时又是鱼类和大型无脊椎动物的饵料，是水生态系统中物质循环和能量流动的重要环节。由于其分布广、繁殖快、生活周期短、易于培养和驯化，对环境中的毒物敏感且实验方法简便，因此受到众多国家毒理学工作者的重视。现已成为一种标准试验生物，被广泛用于水生生物毒理学的研究中。目前，已经广泛采用大型溞进行农药环境安全性评价的研究，但是采用大型溞作为新烟碱类农药毒性筛选模型的研究较少，缺乏相关的研究数据评估模型的实用性和可靠性。因此，提供一种易操作、实用性强的大型溞筛选新烟碱类农药毒性的方法尤其重要。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种大型溞测定新烟碱类农药毒性的方法，具有操作简便、实用性强、检测速度快，精确度高等优势。为解决上述技术问题，提供了一种大型溞测定新烟碱类农药毒性的方法，包括以下步骤：(1)将新烟碱类农药溶解制成农药储备液；(2)将所述农药储备液与ElendtM4培养液混合配制成梯度浓度的混合液，将所述混合液做为大型溞的生活用水，持续培养48h，培养过程中，每隔24h时记录大型溞的生物效应参数和所述混合液的理化参数；(3)根据大型溞的生物效应参数和农药储备液的理化参数计算农药对半数抑制浓度EC50，判断新烟碱类农药的毒性。上述的方法，优选的，所述步骤(2)中所述大型溞为来源于同一母系的孤雌繁殖3代以上，出生时间小于24h的非头胎健康幼溞。上述的方法，优选的，在所述步骤(2)进行的过程中，所述大型溞不喂食；所述大型溞不离开水，转移时用滴管转移。上述的方法，优选的，所述步骤(2)中所述ElendtM4培养液为空气曝气泵曝气处理24h以上的ElendtM4培养液。上述的方法，优选的，所述ElendtM4培养液的pH为6.0～9.0，硬度为140～250mg/L，溶解氧≥3mg/L。上述的方法，优选的，所述步骤(2)中，所述生物效应参数为大型溞的抑制率；所述理化参数为混合液的水温、pH值、溶解氧含量；判断所述大型溞抑制的标准为轻晃烧杯，溞在15s内不游动视为活动抑制，但允许附肢微弱摆动。上述的方法，优选的，所述步骤(2)中，所述培养过程控制水温为18℃～22℃、每日光照16h、溶解氧浓度不低于3.0mg/L。上述的方法，优选的，所述新烟碱类农药的毒性的判断标准为：EC50＞10.0mga.i./L表示低毒，1.00mga.i./L＜EC50≤10.0mga.i./L表示中毒，0.100mga.i./L＜EC50≤1.00mga.i./L表示高毒，EC50≤0.100mga.i./L表示剧毒。上述的方法，优选的，所述步骤(1)具体为：将新烟碱类农药溶解于ElendtM4培养液中，制成农药储备液；所述大型溞测定新烟碱类农药毒性的方法还设有空白对照组；所述空白对照组以ElendtM4培养液为大型溞的生活用水。上述的方法，优选的，所述空白对照组和所述溶剂对照组的受抑制率不能超过10％则证明实验结果可信。上述的方法，优选的，所述步骤(1)具体为：将新烟碱类农药溶解于ElendtM4培养液和有机溶剂的混合液中，制成农药储备液；所述大型溞测定新烟碱类农药毒性的方法还设有空白对照组和溶剂对照组；所述空白对照组以ElendtM4培养液为大型溞的生活用水，所述溶剂对照组为丙酮和吐温-80的混合溶液，所述溶剂对照组的混合溶液中丙酮和吐温-80的含量应为所述步骤(2)中丙酮和吐温-80使用量的最大值，吐温-80的质量浓度≤0.100g/L，所述丙酮的质量浓度≤0.100mL/L。上述的方法，优选的，所述空白对照组和所述溶剂对照组的受抑制率不能超过10％则证明实验结果可信。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：(1)本专利技术提供了一种操作简便、实用性强的模式生物大型溞筛选新烟碱类农药毒性的方法；该方法可初步判断出新烟碱类农药的毒性，速度快，精确度高。具体实施方式以下结合具体优选的实施例对本专利技术作进一步描述，但并不因此而限制本专利技术的保护范围。实施例以下实施例中所采用的材料和仪器均为市售。实施例1：(1)农药储备液的配制：称取5％啶虫脒乳油0.5000g，用ElendtM4培养液溶解并定容至100mL容量瓶中，配制成浓度为250mga.i./L的储备液。(2)试验液的配制：ElendtM4培养液的制备：将ElendtM4培养液进行空气曝气泵曝气处理24h以上，检测ElendtM4培养液的pH为7.11，硬度为192mg/L，溶解氧为7.56mg/L。实验组：依次移取储备液0.300mL、0.600mL、1.200mL、2.400mL、4.800mL、9.60mL步骤(1)中的农药储备液分别用ElendtM4培养液定容至250mL容量瓶中，得到浓度为0.300mga.i./L、0.600mga.i./L、1.20mga.i./L、2.40mga.i./L、4.80mga.i./L、9.60mga.i./L的试验液。分别用100mL的烧杯装50mL相应的试验液。空白对照组(CK1)：以ElendtM4培养液作为试验液。(3)染毒挑选来源于同一母系的孤雌繁殖5代，出生时间在6h～24h的非头胎健康幼溞，随机加入到上述步骤(2)的试验液中。每烧杯5只溞，进行培养，培养过程控制水温为20℃、每日光照下培养16h，黑暗培养8h、溶解氧浓度不低于3.0mg/L。大型溞在染毒过程中不喂食。在染毒开始后，于第24h、48h测定并记录烧杯中试验液的温度、pH值、溶氧量等。于染毒后24h、48h观察并记录大型溞的抑制数。判断所述大型溞抑制的标准为轻晃烧杯，溞在15s内不游动视为活动抑制，但允许附肢微弱摆动。表1为5％啶虫脒乳油对大型溞急性毒性活动抑制试验数据记录结果。表2为试验期间各浓度组的水温，pH值，溶解氧的检测结果。表1：5％啶虫脒乳油对大型溞急性毒性试验数据记录表在处理过程中，大型溞出现了游动不积极，原地打转，附肢和触角微弱摆动等生物抑制效应，浓度越高时间越久，症状也会更加的严重。表2：水缸中生活用水的水温、pH值、溶解氧的检测结果表实验组2至5的Ph、温度、溶解氧含量等均在实验组1和实验组6组成的范围内。(4)数据处理采用统计软件SPSS12.0，以处理浓度的对数本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大型溞测定新烟碱类农药毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将新烟碱类农药溶解制成农药储备液；(2)将所述农药储备液与Elendt M4培养液混合配制成梯度浓度的混合液，将所述混合液做为大型溞的生活用水，持续培养48h，培养过程中，每隔24h时记录大型溞的生物效应参数和所述混合液的理化参数；(3)根据大型溞的生物效应参数和农药储备液的理化参数计算农药对半数抑制浓度EC50，判断新烟碱类农药的毒性。

【技术特征摘要】
1.一种大型溞测定新烟碱类农药毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将新烟碱类农药溶解制成农药储备液；
(2)将所述农药储备液与ElendtM4培养液混合配制成梯度浓度的混合液，将所述混合
液做为大型溞的生活用水，持续培养48h，培养过程中，每隔24h时记录大型溞的生物效应
参数和所述混合液的理化参数；
(3)根据大型溞的生物效应参数和农药储备液的理化参数计算农药对半数抑制浓度
EC50，判断新烟碱类农药的毒性。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中所述大型溞为来源于同
一母系的孤雌繁殖3代以上，出生时间小于24h的非头胎健康幼溞。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤(2)进行的过程中，所述大
型溞不喂食；所述大型溞不离开水，转移时用滴管转移。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中所述ElendtM4培养液
为空气曝气泵曝气处理24h以上的ElendtM4培养液。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述ElendtM4培养液的pH为6.0～9.0，
硬度为140～250mg/L，溶解氧≥3mg/L。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述生
物效应参数为大型溞的抑制率；所述理化参数为混合液的水温、pH值、溶解氧含量；判断所...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈昂，刘勇，张德咏，罗香文，严清平，刘建宇，罗源华，
申请(专利权)人：湖南省植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：湖南;43