本发明专利技术公开了一种从啤酒花中提取黄腐酚的方法，首先将啤酒花粉碎，加入石油醚充分脱脂后用乙醇进行提取，过滤，所得滤液经减压浓缩为稠膏，将此稠膏用乙酸乙酯／水进行分配，取酯相进行减压浓缩，真空干燥，获得啤酒花黄腐酚粗提物，将啤酒花黄腐酚粗提物用两步高速逆流色谱法进一步分离纯化，最终得到高纯度的黄腐酚。本发明专利技术克服了传统分离方法对样品的不可逆吸附作用，使得样品回收率高，从啤酒花制备黄腐酚得率高达到０．１７％以上，制备的黄腐酚纯度高达９８％以上。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及黄腐酚(xanthohumol)的提取，具体是。
技术介绍
啤酒花(/^m"mw Zt^"/w ￡)是桑科萚草属多年生草质蔓生藤本，雌雄异株，花单性，雌 性球穗花序简称酒花。酒花主要用作啤酒酿造原料，赋予啤酒苦味和香味及防腐作用，其有 效成分为酒花树脂、酒花油和多酚。黄腐酚(xanthohumol XN)是啤酒花中的一种黄酮类物 质，为酒花异戊二烯基査耳酮，其化学结构如下近年来对黄腐酚的研究备受关注，发现黄腐酚有着多种有益作用，如抗艾滋病毒、抗癌、 抗氧化、抗炎、雌激素作用等，由于其重要的生物活性，急需要大量的纯品进行深入的研究， 而目前国内还没有黄腐酚标准品，国外也极少且价格相当昂贵，如何高效、简便、快速地从 啤酒花中提取分离到高纯度的黄腐酚是人们关注的课题。CN 1459281公开了一种用70%乙醇浸提啤酒花并经硅胶柱层析提纯酒花查尔酮(黄腐酚) 的方法。该方法所使用的硅胶固定相对样品有不可逆吸附作用，导致黄腐酚损失较多，从啤 酒花中提取分离黄腐酚的得率较低。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，该方法黄腐酚得率高、纯度高。 本专利技术提供的，包括如下步骤(1) 将啤酒花粉碎；(2) 将100g粉碎的啤酒花用800-2000mL石油醚(沸程为60 90°C)回流提取，提取 温度60-65°C，提取时间0.5-1小时，过滤除去石油醚溶液(随之除去啤酒花中的脂溶性成分)， 重复提取2-3次，得到脱脂啤酒花；(3) 将上述脱脂啤酒花用800-2000mL体积浓度90 100%的乙醇进行超声提取，超声 功率200W，提取温度55-65。C，提取时间30-50分钟，提取液过滤，重复提取2-3次，合并 滤液、减压浓縮至稠膏；(4) 在上述稠膏中加入250-350 mL乙酸乙酯，搅拌，溶解后加入150-250 mL水进行分 配，静置分层，分离两相，弃去水相(除去极性杂质)，乙酸乙酯相重复加水分配2-3次，而 后乙酸乙酯相减压浓缩，真空干燥，得黄腐酚粗提物；(5) 将上述黄腐酚粗提物进行第一步高速逆流色谱分离，分离溶剂体系为石油醚一乙酸 乙酯一甲醇一水，其体积比为5: 4: 4.8: 4，上相为固定相，下相为流动相，按紫外检测图 谱收集目标流分；(6) 将目标流分真空浓縮回收溶剂后，进行第二步高速逆流色谱分离，分离溶剂体系为正己垸一正丁醇一甲醇一水，其体积比为3.6: 1: 1.8: 3，上相为固定相，下相为流动相，按紫外检测图谱收集黄腐酚流分，真空浓縮、冷冻干燥得到粉末状黄腐酚。用高效液相色谱法(HPLC)分析其纯度，达98%以上，得率达0.17% (g黄腐酚/100g酒花)以上。所述的步骤(2)中提取温度优选为63°C，提取时间优选为45分钟。所述的步骤(3) 中提取温度优选为60°C，提取时间优选为40分钟。以黄腐酚标准品(购自ALEXIS公司，瑞士，纯度98%以上)作参比，对本专利技术得到的样 品进行紫外光谱、HPLC和红外光谱的定性鉴定，证明其为黄腐酚(见图4、图5、图6)。与现有技术相比本专利技术的优点和效果本专利技术先将啤酒花脱脂、再除去极性杂质，然后 采用高速逆流色谱(HSCCC)液一液分配技术提取得到黄腐酚，提取过程中不使用固体支撑 体或载体，克服了传统分离方法对样品的不可逆吸附作用，使得样品回收率高，从啤酒花制 备黄腐酚得率高，达到0.17%以上，制备的黄腐酚纯度高，达98%以上。附图说明下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细说明。图1为实施例1步骤(5)中经第一步分离的HSCCC分离图谱图2实施例1步骤(6)中经第二步分离的HSCCC分离图谱图3为图2 ^ XN (黄腐酚)峰的HPLC分析图谱图4为本专利技术黄腐酚样品和标准品的紫外-可见扫描图谱图5为本专利技术黄腐酚样品与标准品的红外图谱图6为本专利技术黄腐酚样品和标准品的HPLC图谱具体实施例方式实施例1(1) 取啤酒厂的酿造颗粒啤酒花用植物粉碎机粉碎成粉状；(2) 将上述100g粉粹的啤酒花用1000ml石油醚(沸程60 90'C)水浴回流提取啤酒花 中的脂溶性成分，提取温度63'C，提取时间45分钟，重复提取2次，过滤分离石油醚溶液，得到脱脂啤酒花；(3) 在脱脂啤酒花中加入1000ml 95% (v/v)乙醇超声提取黄腐酚，提取温度60'C，提 取时间40分钟，超声功率200W，重复提取2次。过滤，合并提取液，减压浓縮至稠膏；(稠 膏真空干燥后，HPLC测定其黄腐酚含量为4.09Yn)。(4) 在上述稠膏中加入300ml乙酸乙酯，搅拌，溶解后加入200ml水进行分配，静置分 层，分离两相，向酯相中再次加入200ml水进行分配，分离两相，重复操作2次。分配后的 乙酸乙酯相减压浓縮、真空干燥得到黄腐酚粗提物3.93g;采用HPLC测定黄腐酚粗提物中黄腐酚含量为7.53%，同时对分配后的水相也进行同样的 HPLC分析，分析结果表明，采用乙酸乙酯/水的体系进行分配，可以高选择地将黄腐酚富集 到乙酸乙酯相中；有效地去除了大量水溶性杂质，使粗提物中的黄腐酚含量由4.09%提高到 7.53%,而水相中黄腐酚残留量很低，为0.08ppm。HPLC的色谱条件为Symmetry C18， 5pm， 4.6xl50mm色谱柱；温度室温；2487双 波长紫外检测器，检测波长为370nm;流速lml/min;流动相乙腈和1%乙酸溶液；梯度洗脱时间(min)乙腈1%乙酸0~20500/"0%50%~20%20—3080%20%(5) 第一步高速逆流色谱对黄腐酚粗提物进行分离纯化经醇提、乙酸乙酯/水分配后得到的黄腐酚粗提物仍然是一个复杂的混合物，本专利技术采用 了两步高速逆流色谱的分离纯化，得到了高纯度黄腐酚单体。首先在第一步中，采用由石油 醚一乙酸乙酯一甲醉一水(5: 4: 4.8: 4， V/V/V/V)组成的两相溶剂体系进行分离称取步骤(4)的黄腐酚粗提物150mg溶于10ml等体积的上下相溶剂混合物中进样，按紫外图谱检测 峰(图l)收集各流分，经HPLC检测，2号流分中含有目标成份；(6) 第二步高速逆流色谱对2号流分进行分离纯化 采用正己烷一正丁醇一甲醇一水(3.6: 1: 1.8: 3， V/V/V/V)体系对步骤(5)的2号流分进行第二步分离纯化将收集的2号流分真空浓縮回收溶剂后，溶于10ml等体积的第二 步溶剂体系(正己烷一正丁醇一甲醇一水)的上下相混合物中进样，按紫外图谱检测峰(图 2)收集XN流，，经HPLC测定，XN流分中黄腐酚的纯度为99.35% (图3)，黄腐酚含量 为7.9mg。由此可计算出本专利技术啤酒花中黄腐酚的提取得率达0.21%。 高速逆流色谱仪及其操作采用上海同田生化技术有限公司的TBE-300A型高速逆流色谱仪，聚四氟乙烯柱，20ml进样阀，柱体积为300ml; AKTAPrime泵、检测器和记录仪。预先配制溶剂体系于分液漏斗中，摇匀后静置分层。使用前，将上相和下相分开，取上 相作为固定相，下相作为流动相。进样前，先将固定相充满整个柱子；调整主机转速800rpm,检测波长254nm,以1.5ml/min 的流速将流动相泵入柱内；待整个体系建立动态平衡后，由进样阀进样；然后根据检测器紫 外谱图接收目标流份。对高速逆流色谱分离纯本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从啤酒花中提取黄腐酚的方法，其特征在于，包括如下步骤： （１）将啤酒花粉碎； （２）将１００ｇ粉碎的啤酒花用８００－２０００ｍＬ石油醚回流提取，提取温度６０－６５℃，提取时间０．５－１小时，过滤除去石油醚溶液，重复提取２－３次，得到脱脂啤酒花； （３）将上述脱脂啤酒花用８００－２０００ｍＬ体积浓度９０～１００％的乙醇进行超声提取，超声功率２００Ｗ，提取温度５５－６５℃，提取时间３０－５０分钟，提取液过滤，重复提取２－３次，合并滤液、减压浓缩至稠膏； （４）在上述稠膏中加入２５０－３５０ｍＬ乙酸乙酯，搅拌，溶解后加入１５０－２５０ｍＬ水进行分配，静置分层，分离两相，弃去水相，乙酸乙酯相重复加水分配２－３次，而后乙酸乙酯相减压浓缩，真空干燥，得黄腐酚粗提物； （５）将上述黄腐酚粗提物进行第一步高速逆流色谱分离，分离溶剂体系为石油醚－乙酸乙酯－甲醇－水，其体积比为５∶４∶４．８∶４，上相为固定相，下相为流动相，按紫外检测图谱收集目标流分； （６）将目标流分真空浓缩回收溶剂后，进行第二步高速逆流色谱分离，分离溶剂体系为正己烷－正丁醇－甲醇－水，其体积比为３．６∶１∶１．８∶３，上相为固定相，下相为流动相，按紫外检测图谱收集黄腐酚流分，真空浓缩、冷冻干燥得到粉末状黄腐酚。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨小兰，毛立新，郑海鹰，杨磊，胡仕屏，罗正明，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：14[中国|山西]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。