一种糖基功能化咪唑型离子液体固定相的制备方法技术

本发明专利技术提供一种糖基功能化咪唑型离子液体固定相的制备方法，先制备活化硅胶的甲醇匀浆备用，将D-葡萄糖酸内酯和N-（3-氨基丙基）咪唑溶解在乙醇后得到N-咪唑丙基葡糖酰胺，将其与3-异氰酸酯基丙基三甲氧基硅烷混合溶于乙醇后得到N-三甲基硅基丙基-N’-葡糖酰胺丙基咪唑+碘离子溶液；然后在该溶液中添加硅胶匀浆，加热后得到产物N，N’-三甲氧基丙基葡糖酰胺咪唑离子液体键合硅胶色谱固定相。糖基功能化咪唑型离子液体固定相色谱填料既有硅胶基质的优异物理结构又有功能化糖基的特殊色谱性能，对生物分子化合物有较强的分离性能，且分离效果稳定，该色谱填料具有耐有机溶剂，耐酸性，耐高温等，分离效率高的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及高效液相色谱固定相的
，特别涉及一种糖基功能化咪唑型离子液体固定相的制备方法。
技术介绍
目前大部分离子液体-功能化高效液相色谱固定相是基于咪唑类或吡啶阳离子，本专利技术通过葡萄糖基离子液体的合成受到启发，通过简单的糖基化键合反应，将糖基和咪唑型离子液体有机结合，产生基于糖基的新咪唑离子液体硅胶固定相，获得的糖基咪唑功能化固定相被用于HILIC模式下分析物的评价。有文献报道类似的葡萄糖基离子液键合体固定相，例如：葡萄糖基季胺型表面固载离子液体硅胶固定相、葡糖铵离子液体固定相，前者合成步骤复杂，工艺难度大；后者可分离分化合物很少，分离范围窄。本专利技术的这种新的糖基功能化离子液体除可以分离上述两种固定相提到的分析物，还对核苷、黄酮类化合物和人体多肽有很好的分离效果。
技术实现思路
综上所述，为了克服现有技术问题的不足，本专利技术提供了一种糖基功能化咪唑型离子液体固定相的制备方法，解决了功能化咪唑类离子液体高效液相色谱固定相在溶剂、缓冲液等条件下稳定性受限且目标分析物单一的问题，实现对同类生物分子化合物的高效率分离分析。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种糖基功能化咪唑型离子液体固定相的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：步骤一：色谱用多孔球形硅胶经盐酸酸化处理后，水洗至中性，真空干燥后得到表面活化的硅胶，溶于甲醇，得到甲醇匀浆，备用；步骤二：相等摩尔的D-葡萄糖酸内酯和N-(3-氨基丙基)咪唑溶解在乙醇里，加热回流，进行环氧开环反应，得到N-咪唑丙基葡糖酰胺；步骤三：将相等摩尔的N-咪唑丙基葡糖酰胺和3-异氰酸酯基丙基三甲氧基硅烷混合溶于乙醇，继续回流，进行甲基化反应，得到N-三甲基硅基丙基-N’-葡糖酰胺丙基咪唑+碘离子；步骤四：将步骤三中所得N-三甲基硅基丙基-N’-葡糖酰胺丙基咪唑+碘离子溶液进行机械搅拌，搅拌过程中添加步骤一中制备的硅胶的甲醇匀浆，所得悬浮液回流加热反应，得到的产物即为N，N’-三甲氧基丙基葡糖酰胺咪唑离子液体键合硅胶色谱固定相的乳白色悬浊液；步骤五：将步骤四中所得的乳白色悬浊液过滤，真空干燥，避光保存，所得产物即为N，N’-三甲氧基丙基葡糖酰胺咪唑离子液体键合硅胶色谱固定相。具体地，所述步骤一中，硅胶的酸化条件为用浓盐酸加热回流4～6h，用水洗至中性，在真空120℃，干燥6～8h，得到表面活化的硅胶，溶于甲醇，得到甲醇匀浆，备用。具体地，所述步骤二中，将40～60mM的D-葡萄糖酸内酯和同等摩尔的N-(3-氨基丙基)咪唑同时溶解在200～300ml的乙醇里，加热至70～90℃，回流20～30h，得到N-咪唑丙基葡糖酰胺。具体地，所述步骤三中，将5mM～8mM的N-咪唑丙基葡糖酰胺和同等摩尔的3-异氰酸酯基丙基三甲氧基硅烷混合溶于乙醇，回流2～4天，进行甲基化反应，得到N-三甲基硅基丙基-N’-葡糖酰胺丙基咪唑+碘离子。具体地，所述步骤四中，将步骤三中得到的N-三甲基硅基丙基-N’-葡糖酰胺丙基咪唑+碘离子溶液加入磁子进行机械搅拌，并加入步骤一中制备的含有2.5～3.5g硅胶的甲醇匀浆15～25ml，搅拌均匀后，搅拌10～15h后，加热至65～75℃，回流24h，得到乳白色悬浊液。具体地，所述步骤五中，将步骤四所得乳白色悬浊液过滤，并用体积比均为1：1的乙醇：水溶液和甲醇：水溶液进行清洗，过滤后所得的产物即为N，N’-三甲氧基丙基葡糖酰胺咪唑离子液体键合硅胶色谱固定相。将所得的产物放入真空干燥箱，在温度为70～100℃的情况下干燥8～12h，并且在进行表征之前存储在琥珀色的小瓶中。N，N’-三甲氧基丙基葡糖酰胺咪唑离子液体键合硅胶色谱固定相，中文惯称为糖基功能化咪唑型离子液体固定相，英文简称为Sil-GLy-Imdzl，以下简称为糖基功能化咪唑型离子液体固定相或者Sil-GLy-Imdzl。本专利技术采用的技术方案带来的有益效果是：Sil-GLy-Imdzl色谱填料既具有硅胶基质的优异物理结构又具有功能化糖基的特殊色谱性能，由于硅胶表面键合的功能化糖基长链的结构使得Sil-GLy-Imdzl具有很强的亲水性能，因此对水溶性的生物大分子化合物具有较强的分离性能，不同流动相的选择可以减弱对核苷和核苷酸、人体多肽和黄酮苷类化合物的保留，并且通过将功能化糖基键合的方法修饰到硅胶表面上，实现分离的稳定性，耐高温，耐有机溶剂等优势，实现目标分离的高效性，从而获得具有优良的分离分析性能的糖基功能化咪唑型离子液体固定相。采用本专利技术实施例提供的一种糖基功能化咪唑型离子液体固定相的制备方法所制得的固定相具有以下优点：1)制备的Sil-GLy-Imdzl高效液相色谱填料既具有硅胶基质的优异物理结构又具有葡萄糖的特殊色谱性能；2)Sil-GLy-Imdzl硅胶表面键合葡萄糖基长链的结构，说明该固定相具有很强的亲水性能，所以对生物分子化合物具有较强的分离性能；3)并且通过将功能化糖基键合的方法修饰到硅胶表面上，实现分离的稳定性，耐有机溶剂，耐酸性，耐高温等优势，分离效率高，应用广泛。附图说明图1是本专利技术的制备过程图；图2是本专利技术对实施例中制备的Sil-GLy-Imdzl抽样进行参数表征的红外光谱图；图3是本专利技术对实施例中制备的Sil-GLy-Imdzl抽样进行参数表征的热重力分析图；图4是本专利技术实施例2提供的对11种核苷和核苷酸的色谱分析图；图5是本专利技术实施例2提供的对7种黄酮苷类化合物的色谱分析图；图6是本专利技术实施例2提供的对6种人体多肽在7种不同流动相色谱条件下的色谱分析图。具体实施方式下面结合附图和具体的实施例对本专利技术作进一步详细的说明，但本专利技术的保护范围并不限于此。为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得，下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。实施例1如图1所示，一种糖基功能化咪唑型离子液体固定相的制备方法，按照如下步骤进行操作：步骤一：将3g硅胶用浓盐酸加热回流4h，用水洗至中性，120℃下真空干燥6h，得到表面活化的硅胶；步骤二：称重本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种糖基功能化咪唑型离子液体固定相的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：步骤一：色谱用多孔球形硅胶经盐酸酸化处理后，水洗至中性，真空干燥后得到表面活化的硅胶，溶于甲醇，得到甲醇匀浆，备用；步骤二：相等摩尔的D‑葡萄糖酸内酯和N‑（3‑氨基丙基）咪唑溶解在乙醇里，加热回流，进行环氧开环反应，得到N‑咪唑丙基葡糖酰胺；步骤三：将相等摩尔的N‑咪唑丙基葡糖酰胺和3‑异氰酸酯基丙基三甲氧基硅烷混合溶于乙醇，继续回流，进行甲基化反应，得到N‑三甲基硅基丙基‑N’‑葡糖酰胺丙基咪唑+碘离子；步骤四：将步骤三中所得N‑三甲基硅基丙基‑N’‑葡糖酰胺丙基咪唑+碘离子溶液进行机械搅拌，搅拌过程中添加步骤一中制备的硅胶的甲醇匀浆，所得悬浮液回流加热反应，得到的产物即为N，N’‑三甲氧基丙基葡糖酰胺咪唑离子液体键合硅胶色谱固定相的乳白色悬浊液；步骤五：将步骤四中所得的乳白色悬浊液过滤，真空干燥，避光保存，所得产物即为N，N’‑三甲氧基丙基葡糖酰胺咪唑离子液体键合硅胶色谱固定相。

【技术特征摘要】
1.一种糖基功能化咪唑型离子液体固定相的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
步骤一：色谱用多孔球形硅胶经盐酸酸化处理后，水洗至中性，真空干燥后得到表面活化的硅胶，溶于甲醇，得到甲醇匀浆，备用；
步骤二：相等摩尔的D-葡萄糖酸内酯和N-（3-氨基丙基）咪唑溶解在乙醇里，加热回流，进行环氧开环反应，得到N-咪唑丙基葡糖酰胺；
步骤三：将相等摩尔的N-咪唑丙基葡糖酰胺和3-异氰酸酯基丙基三甲氧基硅烷混合溶于乙醇，继续回流，进行甲基化反应，得到N-三甲基硅基丙基-N’-葡糖酰胺丙基咪唑+碘离子；
步骤四：将步骤三中所得N-三甲基硅基丙基-N’-葡糖酰胺丙基咪唑+碘离子溶液进行机械搅拌，搅拌过程中添加步骤一中制备的硅胶的甲醇匀浆，所得悬浮液回流加热反应，得到的产物即为N，N’-三甲氧基丙基葡糖酰胺咪唑离子液体键合硅胶色谱固定相的乳白色悬浊液；
步骤五：将步骤四中所得的乳白色悬浊液过滤，真空干燥，避光保存，所得产物即为N，N’-三甲氧基丙基葡糖酰胺咪唑离子液体键合硅胶色谱固定相。
2.根据权利要求1所述的一种糖基功能化咪唑型离子液体固定相的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，硅胶的酸化条件为用浓盐酸加热回流4～6h，用水洗至中性，在真空120℃，干燥6～8h，得到表面活化的硅胶，溶于甲醇，得到甲醇匀浆，备用。
3.根据权利要求1所述的一种糖基功能化咪唑型离子液体...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋琼，王旭生，邱红灯，杜慧芳，袁雪生，吴宁鹏，张书胜，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南;41