本发明专利技术属分析化学领域，涉及福多司坦及其对映体（杂质）的分离测定。本发明专利技术用ＲＰ－ＨＰＬＣ法，将手性金属配合剂加入色谱流动相系统中而形成三元非对映体配位化合物，由于产生的非对映体配位化合物结构稳定性和能量的差异，并与固定相发生立体选择性吸附和排斥反应，使两对映体得以分离。通过该方法能简单、快速和准确地的分离和测定福多司坦及含福多司坦制剂的对映体（杂质），使福多司坦及含福多司坦制剂质量可控。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属分析化学领域，具体涉及用高效液相色谱分离测定福多司坦及制剂对映体(杂质)的方法。福多司坦是一种新型的祛痰药，它属于由SSP制药株式会社在1988年创制的具有司坦(steine) 基本骨架的一类具有祛痰作用的化合物，其结构中含有封闭的巯基，在体内被代谢为活性游 离巯基衍生物而发挥作用。其基本作用是杯状细胞增生抑制作用及对呼吸道的粘液、粘膜正 常状态的调节作用。它于2001年12月17日首次在日本上市，由三菱制药和S.S制药生产。剂型 为200mg片剂，商品名分别为CleanalTABLETS (三菱制药株式会社)，SPELEARtablets 200 (S.S制药株式会社)。目前国内已有片剂批准上市，其它制剂也将陆续获准生产。福多司坦 对慢性呼吸系统疾病有多重药理作用，抑制呼吸道上皮细胞增生，可使痰中海藻糖/唾液酸的 比值正常化，改善痰的粘性和弹性，恢复纤毛输送气道分泌液的状态，促进浆液分泌，并有 抗炎作用。是目前唯一一个具有多重作用机制的祛痰药。福多司坦适用于治疗支气管哮喘、 慢性支气管炎、支气管扩张、肺结核、肺气肿、非典型耐酸杆菌感染症、弥漫性支气管炎等 慢性呼吸系统疾病的祛痰。手性药物对映体常具有不同药理活性和毒性，在体内过程往往也不同。因此，手性药物 大多以单一对映体应用于临床。手性药物对映体化合物间除对偏振光的偏转方向恰好相反外， 其它理化性质是完全相同的，因而难以分离。研究简单、快速和准确的手性药物识别方法成 为近年来手性分析主要方向。福多司坦(L-ftidosteine， S-(3羟基丙基-L-半光氨酸)为半光氨酸 的衍生物，即L-(-)-福多司坦；D-(+)-福多司坦无生物活性。其分子中含有一个手性碳原子， 化学合成中会生成2种立体构型不同的对映体。建立福多司坦对映体分离和检测方法对其进行 可靠和有效的质量控制有重要意义。
技术介绍
L-(-)-福多司坦和D-(+)-福多司坦对映体分子结构式<formula>formula see original document page 3</formula>手性药物对映构体分离和检测方法主要有:①手性固定相(CSP)法;②柱前手性衍生化 (CDR)法；③手性流动相(CMP)法。①法简单和快速，但CSP柱价格昂贵；②法需高光学纯度 手性衍生化试剂，衍生化反应往往比较繁琐费时；③法过程简单和价格便宜。在HPLC拆分 对映体的3种方法中,手性流动相添加剂法(CMP)有其独特的优点,不需以手性试剂衍生，也不 需价格昂贵的手性柱,只要将手性试剂添加到流动相中，就能用普通的正相或反相柱分离。由于 方法简单有效，己引起广泛的关注。CDR法已有女献报道(王莹，杭太俊.手性衍生化-反相HPLC 法测定福多司坦光学纯度.药学进展，2005， 29 (9): 421-425)。本专利技术用RP-HPLC法，手性金属配合剂加入色谱流动相系统中,形成三元非对映体配位化合物，并在紫外区产生明显吸收，使原无紫外吸收的福多司坦得以进行紫外分析测定，见图l-2。由于产生的非对映体配位化合物结构稳定性和能量的差异，并与固定相发生立体选择性吸附和排斥反应,使两对映体得以分离。通过该方法能简单、快速和准确地的分离和测定福多司坦及含福多司坦制剂的对映体(杂质)。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种福多司坦对映体的手性流动相添加剂RP-HPLC法拆分方法，从 而实现简单、快速和准确地的分离和测定福多司坦及含福多司坦制剂的对映体(杂质)。本专利技术所述的RP-HPLC分离和测定福多司坦及含福多司坦制剂的对映体(杂质)的方法， 是以键合硅胶为色谱柱；以^手性金属配合剂加入有机相与水相组成的色谱流动相系统。这里 所说的键合硅胶色谱柱包括、Cs、 Cl8、氰基、氨基、苯基等键合硅胶柱；有机相包括乙腈、甲 醇或四氢呋喃等；水相包括纯水或缓冲液，有机相与水相体积比为0:100% 90:10。这里所 说的手性配合试剂包括氨基酸及衍生物(如L-脯氨酸、L-苯丙氨酸等)和酒石酸及其衍生物等， 配位金属包括Cu" 、Zn2+ 、Ni2+ 、Cd2+等;手性金属配合剂由手性配合试剂重量比为0.5 2.0，优选0.8 1.3,最优1.3。这里所说的RP-HPLC法中所用检测器包括紫外、质谱、示差 折光、电化学或蒸发光闪烁检测器。本专利技术所述的方法的RP-HPLC色谱图中福多司坦及含福多司坦制剂的对映体出峰顺序 为:D-(+)-对映体在前，L-(-)-对映体在后，对映体之间的分离度大于1.5。记录的色谱图中对 映体前峰与后峰的面积比应为0.5 2。本专利技术所述的RP-HPLC'分离和测定福多司坦及含福多司坦制剂的对映体(杂质)的方法， 可按以下方法实现(1) 取福多司坦或福多司坦制剂适量，以水或流动相溶解(制剂必要时过滤)，制成每 1ml含有福多司坦0. 1 10mg的样品溶液。(2) 流动相流速为0.5 2.0ml/min，优选0.8ml 1.5ml /min;紫外检测波长为220 300nm，优选230 280nm，更优选240 270nm。(3)取(l)的样品溶液l 100^il注入高效液相色谱仪，优选10 20nl进样测试。本专利技术手性流动相添加剂RP-HPLC法拆分实现简单、快速和准确地的分离和测定福多司 坦及含福多司坦制剂的对映体(杂质)，使福多司坦及含福多司坦制剂质量可控,见图3-7。 附图说明图1 福多司坦水溶液紫外吸收图谱图2 福多司坦手性金属配位化合物紫外吸收图谱图3，8福多司坦消旋体HPLC图谱图4， 10福多司坦检测限HPLC图谱图5 福多司坦对照溶液HPLC图谱图6, 9福多司坦对映体鉴别和检査HPLC图谱图7 福多司坦片对映体鉴别和检査HPLC图谱具体实施例方式以下实施例表示本专利技术的实用性，本专利技术不受此限制。 实施例1 仪器与条件1岛津10Avp高效液相色谱仪,十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂，以L-苯丙氨酸溶液(取 L-苯丙氨酸1.0g，硫酸铜1.3g，加水1000ml溶解)为流动相，紫外检测波长为275nm,检出限lug/ml,见图4。实施步骤取福多司坦消旋体适量，加流动相溶液制成每lml中含5mg的溶液。取20P 1注入液相 色谱仪，出峰顺序为D-(+)-对映体在前，L-(-)-对映体在后，对映体之间的分离度大于1.5。理 论板数按L-(-)-对映体峰计算应不低于1000。记录的色谱图中对映体前峰与后峰的面积比应 为0.5 2。 一般D-(+)-对映体保留时间约9分钟左右，L-(-)-对映体保留时间约12分钟'左右， 见图3。 实施例2取福多司坦适量，加流动相溶液制成每lml中含福多司坦5mg的溶液，作为供试品溶液； 在实施例1的色谱条件下，量取供试品溶液20nl注入液相色谱仪，供试品溶液色谱图中主峰 保留时间应与消旋福多司坦的L-(-)-对映体峰保留时间一致，见图3，5-6。 实施例3取福多司坦片粉末适量，加流动相溶液制成每lml中含福多司坦5mg的溶液，作为供试 品溶液。在实施例1的色谱条件下，量取供试品溶液20pl注入液相色谱仪，供试品溶液色谱图中主峰保留时间应与消旋福多司坦的L-(-)-对映体峰保留时间一致，见图3, 5-7。 实施例本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种福多司坦对映体的手性流动相添加剂ＲＰ－ＨＰＬＣ法拆分方法，其特征在于：以键合硅胶为色谱柱；以手性金属配合剂加入有机相与水相组成的色谱流动相系统。样品溶液注入高效液相色谱仪，检测器测定。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周学敏，马静，袁丽华，陈婷，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：84[]
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