一种转基因玉米种子中羊凝乳酶的表达方法技术

本发明专利技术公开了一种转基因玉米种子中羊凝乳酶的表达方法，包括以下步骤：通过PCR法克隆玉米globulin-1基因的启动子Glzm1，在启动子上下游分别添加HindIII和NcoI酶切位点，亚克隆到植物表达载体pCAMBIA3301上，替换GUS基因前面的35S启动子；在羊凝乳酶基因编码氨基酸的N端添加6个组氨酸，根据玉米密码子偏好性对进行密码子优化，并在基因上下游分别添加NcoI和BstEII酶切位点，序列设计好后进行合成；合成后的序列替换植物表达载体上的GUS基因，最终成功构建玉米籽粒特异性表达载体pC330-Gprochymosin。本发明专利技术的有益效果为：(1)生产的重组蛋白可进行翻译后修饰如糖蛋白和多亚基蛋白，与天然蛋白产物具有相同或相似的结构和生物学功能；(2)具有本质的安全性，不会传播动物病毒或是感染病原菌。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种羊凝乳酶的表达方法
，尤其是涉及一种转基因玉米种子中羊凝乳酶的表达方法。
技术介绍
凝乳酶是一种从未断奶的小牛皱胃中发现的天门冬氨酸蛋白酶，可以专一地切割乳中κ-酪蛋白的Phe105-Met106之间的肽键，破坏乳中的酪蛋白胶束引起蛋白质凝聚，因此在乳制品尤其是在干酪加工制作中应用广泛。目前，凝乳酶的年均需求量约占全世界酶制剂总量的15％，居第二位。凝乳酶主要为动物来源的凝乳酶，约占市场上凝乳酶总量的70％，同时还有植物来源的凝乳酶、微生物来源的凝乳酶和利用基因工程技术生产的重组凝乳酶。动物凝乳酶，除来源于小牛外，研究者还在乳猪、羔羊、小狗、海豹、骆驼、鳖鱼、金枪鱼等胃中提取出了凝乳酶。刘文宗等发现乳猪胃酶具有凝乳性；张富新等通过实验证实羔羊皱胃酶也有较低的凝乳性。植物凝乳酶，无论从植物种类(木瓜、无花果、波萝、南瓜、朝鲜蓟、大豆、银杏、合欢树、甘薯和生姜等)还是植物组织的部位(果实、叶、茎和根等)，植物凝乳酶来源都十分广泛。许多植物蛋白酶能使牛乳本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种转基因玉米种子中羊凝乳酶的表达方法，其特征在于：包括以下步骤：通过PCR法克隆玉米globulin‑1基因的启动子Glzm1，在启动子上下游分别添加HindIII和NcoI酶切位点，亚克隆到植物表达载体pCAMBIA3301上，替换GUS基因前面的35S启动子；在羊凝乳酶基因编码氨基酸的N端添加6个组氨酸，根据玉米密码子偏好性对进行密码子优化，并在基因上下游分别添加NcoI和BstEII酶切位点，序列设计好后进行合成；合成后的序列替换植物表达载体上的GUS基因，最终成功构建玉米籽粒特异性表达载体pC330‑Gprochymosin。

【技术特征摘要】
1.一种转基因玉米种子中羊凝乳酶的表达方法，其特征在于：包括以下步骤：通过PCR
法克隆玉米globulin-1基因的启动子Glzm1，在启动子上下游分别添加HindIII和NcoI酶切
位点，亚克隆到植物表达载体pCAMBIA3301上，替换GUS基因前面的35S启动子；
在羊凝乳酶基因编码氨基酸的N端添加6个组氨酸，根据玉米密码子偏好性对进行密码
子优化，并在基因上下游分别添加NcoI和BstEII酶切位点，序列设计好后进行合成；合成后
的序列替换植物表达载体上的GUS基因，最终成功构建玉米籽粒特异性表...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘文国，王云鹏，路明，张志军，王敏，吕庆雪，赵万庆，岳尧海，刘宏伟，张建新，马英杰，周旭东，孟令聪，李岩，
申请(专利权)人：吉林省农业科学院，
类型：发明
国别省市：吉林;22