甜菊糖苷制造技术

本发明专利技术涉及一种产品，其是包含甜味剂组合物的食品、饮料、药物组合物、烟草、营养品、口部卫生组合物或化妆品，其中所述甜味剂组合物包含一种或更多种发酵生产的甜菊糖苷。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术涉及包含甜味剂组合物的产品以及制备这种产品的方法。本专利技术还涉及甜味剂组合物在制备产品中的用途以及含甜菊糖苷的组合物。专利技术背景消费者对使用人工甜味剂(例如甘素、环氨酸钠、阿斯巴甜、安赛蜜和糖精)的需求已有一段时间较低。然而，对天然来源的无热量高效甜味剂例如甜菊糖苷的需求不断增长。此外，甜的甜菊糖苷具有优于许多高效甜味剂的功能特性和感官性状。甜菊糖苷(MasayaOhta等人,J.Appl.Glycosci,第57卷,(2010),第199-209页)是一组不同的甜的二萜糖苷，它们具有单一的基础—甜菊醇二萜且差异在于C13和C19位碳水化合物残基的存在。莱鲍迪甙A以及一些其它甜菊糖苷的物理特性和感官性状已被研究(CarolineHellfritsch等J.AgricFoodChem,第60卷,(2012),第6782-6793页)。已检验了它们在碳酸饮料中的稳定性并发现它们具有热稳定性和pH稳定性(Chang和Cook,1983)。Reb-A的甜味效能(sweetnesspotency)为蔗糖的200-400倍。然而，除了其高水平的甜味之外，它们还具有后苦味(post-bittertaste)以及金属和酒精后味(aftertaste)的固有特性。由于其它物质例如多酚和甜菊植物提取物中存在的其它风味化合物的污染，甜菊糖苷具有一些不期望的味道特征。因此，关于植物来源的甜菊糖苷提取物的使用存在限制。专利技术概述改善味道品质的主要方法之一是发酵生产甜菊糖苷。生产具有期望的纯粹味道特征和最低含量的伴随化合物的高度纯化的各糖苷的另一种方法是在发酵生产宿主及其发酵中通过经设计的生物合成来定制特定的甜菊糖苷。因此，本专利技术涉及通过发酵来微生物生产甜菊糖苷的方法和特定产品规格(specification)的发酵生产的甜菊糖苷(例如莱鲍迪甙A(rebA))及其用途。也就是说，本专利技术涉及用于生产高度纯化rebA的微生物发酵方法及其在多种食品和饮料中的用途。公开了发酵生产二萜糖苷和从微生物发酵液回收二萜糖苷从而获得产品规格的方法。特别地，描述了从微生物发酵液回收rebA的方法。从微生物发酵方法可获得各甜的糖苷。甜的甜菊糖苷的混合物还可获自经设计的微生物发酵方法并可通过下游纯化工艺被进一步处理以移除使用过(spent)的发酵培养基组分。相较于植物提取的甜菊糖苷，发酵生产的rebA可容易地以高度纯化等级以及具有较少残余苦味和后味的形式被生产。因此，本专利技术涉及发酵生产高纯度rebA的方法。所述方法用于生产具有至少约95％rebA(基于干重)的产品规格的高纯度rebA。这种产品规格的发酵生产的rebA在多种食品和饮料组合物中用作无热量的甜味剂并与其它有热量和无热量的甜味剂组合使用。这种发酵生产的rebA在食用和可咀嚼组合物(例如任何饮料、糕点、烘烤食品、饼干、口香糖等等)中用作无热量的甜味剂。因此，本专利技术的一个目标是提供有商业价值的由微生物生产系统生产具有已知产品规格的高度纯化甜味剂的发酵生产方法及其在多种食品和饮料中，从而克服已知的植物提取甜菊糖苷的缺点的用途。特别地，发酵生产的rebA可被用于增加柑橘或酸味属性、总香气作用(totalaromaimpact)、甜芳香复合物(sweetaromaticcomplex)、乙基麦芽酚(草莓味)或棕果(brownfruit)(香味(flavor)/香气(aroma))。本文描述了通过微生物发酵生产甜菊糖苷的发酵方法。本文还描述了用于回收发酵生产的甜菊糖苷以及具有给定产品规格的高度纯化rebA的下游纯化和回收方法。(特定产品规格的)发酵生产的甜菊糖苷可被用在多种食品和饮料中作为甜味剂。也就是说，本专利技术基于适用于多种食品和饮料应用的发酵生产的甜菊糖苷。因此，本专利技术提供发酵来源的产品，所述产品是包含甜味剂组合物的食品、饮料、药物组合物、烟草、营养品、口部卫生组合物或化妆品，其中所述甜味剂组合物包含一种或更多种发酵生产的甜菊糖苷。本专利技术还提供制备产品的方法，所述产品是包含甜味剂组合物的食品、饮料、药物组合物、烟草、营养品、口部卫生组合物或化妆品，所述方法包括：制备所述产品和掺入包含一种或更多种发酵生产的甜菊糖苷的甜味剂组合物。所述方法还可包括：发酵本文所述的微生物和从所述微生物和/或细胞外基质回收莱鲍迪甙A。本专利技术还提供包含一种或多种发酵生产的甜菊糖苷的甜味剂组合物在制备包含甜味剂组合物的食品、饮料、药物组合物、烟草、营养品、口部卫生组合物或化妆品中的用途。本专利技术还提供一种组合物，其包含基于干燥固体至少约95％发酵生产的莱鲍迪甙A。附图说明图1展示了质粒pUG7-EcoRV的示意图。图2展示了设计ERG20、tHMG1和BTS1过表达盒(A)，并将其整合至酵母基因组(B)的方法的示意图。(C)显示了利用Cre重组酶移除KANMX标记后的最终状态。图3展示了ERG9敲除构建体的示意图。所述构建体由500bpERG9的3’部分、98bpTRP1的启动子、TRP1的开放阅读框和终止子以及之后的400bpERG9的下游序列组成。由于在ERG9的开放阅读框的终点引入了Xbal位点，因此最后的氨基酸变成了丝氨酸，终止密码子变成了精氨酸。新的终止密码子位于TRP1的启动子中，这导致延长了18个氨基酸。图4展示了将UGT2整合至基因组的示意图。A.转化中使用的不同片段；B.整合后的状态；C.Cre重组酶表达后的状态。图5展示了将GGPP到RebA的途径整合至基因组的示意图。A.转化中使用的不同片段；B.整合后的状态。图6展示了生物合成甜菊糖苷的可行途径的示意图。图7展示了从发酵液回收甜菊糖苷的方法。图8显示了每种应用(酸化水、近水(nearwater)、汁(juice)和可乐(cola))中发酵RebA与基于植物的RebA的甜味强度分数。图9显示了酸化水中发酵RebA相对于基于植物的RebA的强度分数。图10显示了近水中发酵RebA相对于基于植物的RebA的强度分数。图11显示了汁中发酵RebA相对于基于植物的RebA的强度分数。序列表说明表1展示了序列说明。本文描述的序列可以引用序列表或数据库访问号(同样展示于表1)来定义。专利技术详述由下文中给出的详细的描述，本专利技术的优点将变得得更明显。然而，应该理解的是：详细的描述和具体实施例在指出本专利技术的优选实施方案的同时仅仅通过示例的方式给出，因为在本专利技术的精神和范围内的各种变化和修改从该详细描述中对本领域的技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种产品，其是包含甜味剂组合物的食品、饮料、药物组合物、烟草、营养品、口部卫生组合物或化妆品，其中所述甜味剂组合物包含一种或更多种发酵生产的甜菊糖苷。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.07.31 US 13/956,2261.一种产品，其是包含甜味剂组合物的食品、饮料、药物组合物、烟草、营养品、口部卫
生组合物或化妆品，其中所述甜味剂组合物包含一种或更多种发酵生产的甜菊糖苷。
2.根据权利要求1所述的产品，其中所述一种或更多种发酵生产的甜菊糖苷中的至少
一种是莱鲍迪甙A。
3.根据权利要求1或2所述的产品，其中所述甜味剂组合物包含基于干重至少约95％的
发酵生产的莱鲍迪甙A。
4.根据在前的权利要求中的任一项所述的产品，其是零卡路里、低卡路里或糖尿病患
者用的产品。
5.根据在前的权利要求中的任一项所述的产品，其是专供人消耗的或者是动物饲料或
料草。
6.根据在前的权利要求中的任一项所述的产品，其是酒精饮料、天然的汁、碳酸软饮
料、节食饮料、零卡路里饮料、低卡路里饮料或食物、酸奶饮料、速溶汁、速溶咖啡、粉末型速
溶饮料、罐装食品、糖浆、发酵豆酱、酱油、醋、调味品、蛋黄酱、番茄酱、咖喱粉、汤、速食汤、
酱油粉、醋粉、饼干、米饼、薄脆饼干、面包、巧克力、焦糖、糖果、口香糖、果冻、布丁、果脯或
咸菜、鲜奶油、果酱、橘子酱、花酱、奶粉、冰激凌、冰糕、瓶装蔬菜或水果、罐装豆或煮豆、甜
酱煮肉或食物、农业蔬菜食品、海鲜、火腿、香肠、鱼肉火腿、鱼肉香肠、鱼酱、油炸鱼制品、干
海鲜制品、冷冻食品、腌海藻、腌肉、烟草或药品。
7.根据在前的权利要求中的任一项所述的产品，其是非碳酸或碳酸饮料例如可乐、源
于水果或蔬菜的果汁、果汁、含水果颗粒的果汁、水果饮料、果汁饮料、含果汁的饮料、果味
饮料、蔬菜汁、含蔬菜的汁、含水果和/或...

【专利技术属性】
技术研发人员：曼杰·库马尔，马利克·奈梅亨，
申请(专利权)人：帝斯曼知识产权资产管理有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL