本发明专利技术公开了一种食品中黄曲霉素B1的检测试剂盒，包括酶标板、黄曲霉素B1标准品、大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1工作液、底物液A双氧水、荧光底物液B甘氨酸修饰的硫化锌量子点和浓缩洗涤液；大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1是采用大豆过氧化氢酶对黄曲霉素B1进行酶标记而得。本发明专利技术通过样品中的黄曲霉素B1与大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1竞争性的与酶标板上固定的抗黄曲霉素B1单克隆抗体结合，通过大豆过氧化氢酶催化双氧水分解，降低对甘氨酸修饰的硫化锌量子点的荧光淬灭，根据荧光强度的大小来判断样品中黄曲霉素B1的含量。本发明专利技术的检测试剂盒操作简便，检测灵敏、准确、快速，可直接用于检测食品中的黄曲霉素B1，适用于大批量样品的检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及食品检测
，具体是一种食品中黄曲霉素B1的检测试剂盒。
技术介绍
黄曲霉毒素B1（aflatoxinB1称AFB1）是真菌的次级代谢产物，主要是由黄曲霉（Aspergillusflavus）、寄生曲霉（Aspergillusparasiticus）和特曲霉（Aspergillusnomius）产生。它易天然存在于花生、棉籽、玉米、小麦和稻米等农作物中，具有强烈的毒性和致癌性；它是目前化学致癌物中最强的一种致癌诱变剂，其毒性比氰化钾强10倍，其致癌性比二甲基亚硝胺强75倍。1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为I类致癌物，其作用的靶器官主要为肝脏。我国国标中规定，大米中的黄曲霉素含量不得高于10μg/kg。目前，黄曲霉素B1的检测方法主要有：薄层色谱法、高效液相色谱法。这类方法虽然检测精度较高，但存在仪器昂贵，检测成本高，操作不便捷等问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种低成本、操作简便、快速而准确的食品中黄曲霉素B1的检测试剂盒。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种食品中黄曲霉素B1的检测试剂盒，包括酶标板、黄曲霉素B1标准品、大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1工作液、底物液A双氧水、荧光底物液B甘氨酸修饰的硫化锌量子点和浓缩洗涤液；所述的大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1工作液的制备：用0.006～0.08mol/L、pH值7.0～7.2的磷酸盐缓冲液，将大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1稀释成1：4000而得；所述的大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1的制备，步骤为：取0.5mg黄曲霉素B1溶解于500μL、0.8mg/mL的四氢呋喃溶液中，加入0.9～1.1mgN-羟基丁二酰亚胺和1.8～2.0mg1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，室温避光反应45～50min；10000r/min离心15min，取上清挥发溶剂，取残留物溶于200μL二甲基甲酰胺中，得到活化产物；将活化产物缓慢滴加于含大豆过氧化氢酶浓度为3.6～3.8mg/mL的碳酸氢钠溶液中，室温避光剧烈振荡过夜，反应产物在0.01mol/L的磷酸盐缓冲液中透析3天，去除游离的黄曲霉素B1；透析结束后，将样品冷冻干燥得到大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1，分装，-20℃保存。作为本专利技术进一步的方案：所述的酶标板的制备：用0.042～0.045mol/L、pH值9.2～9.3的碳酸盐缓冲液作为包被液，将蛋白G稀释成18.5～19.5μg/mL，100μL/孔，1～4℃放置过夜；取出酶标板甩掉板内液体，用稀释后的浓缩洗涤液340μL/孔，洗板3次，30s/次；然后将抗黄曲霉素B1单克隆抗体稀释成0.65～0.72μg/mL，100μL/孔，37℃放置2h，取出酶标板甩掉板内液体，用稀释后的浓缩洗涤液340μL/孔，洗板3次，30s/次；最后加入0.5wt.%牛血清白蛋白封闭，340μL/孔，37℃放置2h，弃去封闭液，拍干后的酶标板置于常温条件下晾干；抽检合格后将酶标板真空密封后置4℃下保存。作为本专利技术进一步的方案：所述的黄曲霉素B1标准品配制浓度分别为0ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL。作为本专利技术进一步的方案：所述的底物液A双氧水的制备：用0.006～0.08mol/L、pH值7.0～7.2的磷酸盐缓冲液稀释至10μmol/L。作为本专利技术进一步的方案：所述的荧光底物液B甘氨酸修饰的硫化锌量子点的制备，步骤为：取新鲜配置的硫化钠溶液加入到醋酸锌溶液中，加入1mol/L的氢氧化钠溶液调pH值至11.2，向混合溶液中加入甘氨酸溶液做稳定剂，形成的硫化锌前体溶液水浴加热到95℃；前体溶液中加入各溶液的浓度为醋酸锌溶液的终浓度为8～9mmol/L，甘氨酸的终浓度为21～22mmol/L，硫化钠的终浓度为6～7mmol/L；用0.01mol/L、pH值7.4的磷酸盐缓冲液稀释成1：400倍。作为本专利技术进一步的方案：所述的浓缩洗涤液是10倍浓缩洗涤液，其包含0.42～0.45wt.％吐温-20、0.007～0.009mol/L的pH值7.1～7.3的磷酸盐缓冲液。利用所述的食品中黄曲霉素B1的检测试剂盒进行检测的方法，包括以下步骤：（1）样品前处理取粉碎好的样品过20目筛，并彻底混合；称取5g样品，加入12.5mL提取液（甲醇：水＝7：3），剧烈震荡30min；5000rpm离心10min，用滤纸过滤；取1mL滤液用1mL磷酸盐缓冲液稀释，备用。（2）用上述试剂盒检测样品中黄曲霉素B1残留量取酶标板，加标准品/样本50μL/孔到对应的微孔中；加入大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1工作液，50μL/孔，用盖板膜盖板后置室温37℃避光环境中反应45min；小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液340μL/孔，充分洗涤4～5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干；加入底物液A双氧水（10μmol/L）稀释液，100μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃避光环境中反应30min；加入荧光底物液B甘氨酸修饰的硫化锌量子点稀释液50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15min，设定荧光酶标仪于激发波长为340nm，发射波长为610nm处检测，测定每孔荧光值（请在5min内读完数据）；以标准品测试的荧光值与标准品的浓度对数值绘制标准曲线，对照标准曲线计算样品中黄曲霉素B1的含量。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术通过样品中的黄曲霉素B1与大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1竞争性的与酶标板上固定的抗黄曲霉素B1单克隆抗体结合，通过大豆过氧化氢酶催化双氧水分解，降低对甘氨酸修饰的硫化锌量子点的荧光淬灭，根据荧光强度的大小来判断样品中黄曲霉素B1的含量。如果样品中的黄曲霉素B1含量少，荧光强度高；反之，则荧光强度低。即荧光强度的高低与标准品或样品中黄曲霉素B1的含量成反比例关系。本专利技术的检测试剂盒操作简便，检测灵敏、准确、快速，可直接用于检测食品中的黄曲霉素B1，适用于大批量样品的检测。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1本专利技术实施例中，一种食品中黄曲霉素B1的检测试剂盒，包括酶标板、黄曲霉素B1标准品、大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1工作液、底物液A双氧水、荧光底物液B甘氨酸修饰的硫化锌量子点和浓缩洗涤液。酶标板的制备：用0.042～0.045mol/L、pH值9.2～9.3的碳酸盐缓冲液作为包被液，将蛋白G稀释成18.5～19.5μg/mL，100μL/孔，1～4℃放置过夜；取出酶标板甩掉板内液体，用稀释后的浓缩洗涤液340μL/孔，洗板3次，30s/次；然后将抗黄曲霉素B1单克隆抗体稀释成0.65～0.72μg/mL，100μL\本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种食品中黄曲霉素B1的检测试剂盒，其特征在于，包括酶标板、黄曲霉素B1标准品、大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1工作液、底物液A双氧水、荧光底物液B甘氨酸修饰的硫化锌量子点和浓缩洗涤液；所述的大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1工作液的制备：用0.006～0.08mol/L、pH值7.0～7.2的磷酸盐缓冲液，将大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1稀释成1：4000而得；所述的大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1的制备，步骤为：取0.5mg黄曲霉素B1溶解于500μL、0.8mg/mL的四氢呋喃溶液中，加入0.9～1.1mg N‑羟基丁二酰亚胺和1.8～2.0mg 1‑（3‑二甲氨基丙基）‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐，室温避光反应45～50min；10000r/min离心15min，取上清挥发溶剂，取残留物溶于200μL二甲基甲酰胺中，得到活化产物；将活化产物缓慢滴加于含大豆过氧化氢酶浓度为3.6～3.8mg/mL的碳酸氢钠溶液中，室温避光剧烈振荡过夜，反应产物在0.01mol/L的磷酸盐缓冲液中透析3天，去除游离的黄曲霉素B1；透析结束后，将样品冷冻干燥得到大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1，分装，‑20℃保存。...
【技术特征摘要】
1.一种食品中黄曲霉素B1的检测试剂盒，其特征在于，包括酶标板、黄曲霉素B1标准品、大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1工作液、底物液A双氧水、荧光底物液B甘氨酸修饰的硫化锌量子点和浓缩洗涤液；所述的大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1工作液的制备：用0.006～0.08mol/L、pH值7.0～7.2的磷酸盐缓冲液，将大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1稀释成1：4000而得；所述的大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1的制备，步骤为：取0.5mg黄曲霉素B1溶解于500μL、0.8mg/mL的四氢呋喃溶液中，加入0.9～1.1mgN-羟基丁二酰亚胺和1.8～2.0mg1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，室温避光反应45～50min；10000r/min离心15min，取上清挥发溶剂，取残留物溶于200μL二甲基甲酰胺中，得到活化产物；将活化产物缓慢滴加于含大豆过氧化氢酶浓度为3.6～3.8mg/mL的碳酸氢钠溶液中，室温避光剧烈振荡过夜，反应产物在0.01mol/L的磷酸盐缓冲液中透析3天，去除游离的黄曲霉素B1；透析结束后，将样品冷冻干燥得到大豆过氧化氢酶标记黄曲霉素B1，分装，-20℃保存。2.根据权利要求1所述的食品中黄曲霉素B1的检测试剂盒，其特征在于，所述的酶标板的制备：用0.042～0.045mol/L、pH值9.2～9.3的碳酸盐缓冲液作为包被液，将蛋白G稀释成18.5～19.5μg/mL，100μL/孔，1～4℃放置过夜；取出酶标板甩掉板内液体，用稀释后的浓缩洗涤液340μL/孔，洗板3次，30s/次；然后将抗黄曲霉素B1单克隆抗体稀释成0.65～0.72μg/mL，100μL/孔，37℃放置2h，取出...
【专利技术属性】
技术研发人员：张进，吴念绮，周朱晨，张根义，胡彬，朱倩倩，
申请(专利权)人：百奥森江苏食品安全科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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