本发明专利技术公开了航天诱变获得厚垣普可尼亚菌突变菌株及其制剂和在生物防治中的应用。本发明专利技术将厚垣普可尼亚菌搭载神舟8号飞船进行航天诱变，以未搭载的原始菌株为对照，将初步筛选得到的厚垣普可尼亚菌航天诱变菌株进行了包括菌落生长速度、菌丝干重、产孢量和致病力等生物学检测并测定了耐盐性以及对苯菌灵的抗性，最终筛选得到一株产孢子量高、对根结线虫卵的致病能力强的突变株Pc‑m‑38。本发明专利技术进一步提供了用所述航天诱变菌株Pc‑m‑38制备的生防制剂及其在防治根结线虫中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及厚垣普可尼亚菌(Pochoniachamydosporia)航天诱变突变株，尤其涉及厚垣普可尼亚菌航天诱变突变株Pc-m-38及由其制备的生防制剂，本专利技术进一步涉及该突变株在生物防治根结线虫中的应用，属于厚垣普可尼亚菌突变株的筛选及其应用领域。
技术介绍
厚垣普可尼亚菌(Pochoniachamydosporia＝Verticilliumchlamydosporium)属半知菌亚门(Deuteromycotina)丝孢纲(Hyphomycetes)，是一种重要的噬植物线虫真菌(林茂松,沈素文.厚壁轮枝菌防治南方根结线虫研究初报[J].生物防治通报,1994,10(1):7-10)，能够有效防治南方根结线虫(Meloidogyneincognita)、花生根结线虫(Meloidogynearenaria)、大豆胞囊线虫(Heteroderaglycines)等植物寄生线虫(汪来发,杨宝君,关文刚等.淡紫拟青霉和厚壁轮枝霉防治南方根结线虫[J],四川农业大学学报,1998,16(2):231-233；刘畅.厚垣轮枝菌V10菌株对南方根结线虫的寄生和防治作用.广西农业科学,2004,35(2)：135-137.)。厚垣普可尼亚菌主要通过内寄生的方式寄生于卵及雌虫体内，通过大量繁殖使线虫死亡，其对植物寄生线虫卵和雌虫的寄生，在自然条件下对植物寄生线虫的控制起着重要的作用，是最具潜在开发价值的生防真菌之一(裘维蕃,高仁恒,刘杏忠.根结线虫的生物防治简介[J].贵州农学院学报,1996,15(2):51-55.)，厚垣普可尼亚菌具有较广的适应能力，易于培养，且可以寄生多种植物线虫，因而有利于田间防治的应用。同时，其作为线虫生防菌替代化学农药在一些国家已经开始推广应用，并取得了一些成绩。但由于土壤生态系统的复杂性，特别是土壤抑菌作用，导致生防菌的应用受到限制。航天诱变育种技术作为一种有效的诱变育种新技术，已经在创造特异突变基因资源和培育作物新品种方面显示出重要的作用。已有报道，中国神舟八号飞船搭载松褐天牛幼虫上分离的球孢白僵菌，筛选出了杀虫速度较快，致病力高的诱变菌株，在林间防治松褐天牛具有很大的应用潜力(王曦茁,汪来发,马建伟,郭民伟,刘洪剑,董广平.松褐天牛球孢白僵菌高毒力航天诱变菌株的筛选[J].昆虫学报,2014,(11):1299-1305.)；同时，神舟八号飞船搭载植物线虫生防菌淡紫拟青霉山东菌株后，也使诱变菌株生物学特性与原始菌株存在不同程度的分化，筛选出了在生长特性和致病力方面发生较大幅度正向变异的优良菌株(王源,汪来发,王曦茁,朱天辉,.航天搭载淡紫拟青霉的生物学效应[J].核农学报,2014,(11):1933-1940.)。由此说明，航天诱变的变异率高，变异类型丰富，有益变异增多，为选育优良菌株提供更多的机会，为选育符合生产需求且抗逆性强的优良菌株提供了新的途径。航天诱变育种技术作为一种有效的诱变育种新技术，同其它诱变育种一样，航天诱变处理后必需通过各种性状的检测，以判断航天诱变的效应和筛选得到特定变异的目标品种(农向群,张泽华,胡攀,高松,张礼生.航天诱变对昆虫病原真菌的生物学效应[J].菌物学报,2006,25(4):674-681.)。作为生物农药，厚垣普可尼亚菌同其它植物线虫生防菌一样尽管具有化学农药不可比拟的诸多优点，但同时也存在生长缓慢、且受环境影响较大，防治效果不稳定以及自身抗逆性较差等缺点，因此有必要对线虫生防真菌厚垣普可尼亚菌进行航天诱变，筛选出产孢子量高、杀线虫能力强、对农药有很好抗性的的诱变菌株，使其更好地发挥防治植物线虫的效果。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是将厚垣普可尼亚菌(Pochoniachamydosporia)进行航天诱变以期筛选获得一株生长速度块、对根结线虫卵的致病能力强的性能优异的突变株；本专利技术的另一目的是将所获得的性能优异的突变株应用于根结线虫的生物防治。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案来实现的：本专利技术将培养活化的厚垣普可尼亚菌进行航天搭载(神舟八号)；航天诱变完成后，以未搭载的厚垣普可尼亚菌原始菌株作为对照，比较航天诱变菌株在菌落形态、色素变化、孢子形态、生长速度、产孢量、致病力、耐盐性和苯菌灵抗性等方面的变异性。本专利技术发现将厚垣普可尼亚菌经航天诱变后，产生了丰富的性状变异。从总体上看，航天诱变对生长速度、产孢量、致病力、耐盐性和苯菌灵抗性等很多性状表现出了不同的的变异趋向和幅度。生长速度、产孢量和致病力等是筛选生物防治菌株的最重要指标，航天诱变使这些特性表现出不同变异趋向和幅度，证明了航天诱变是非定点的、广泛性的、正负双向性的，且诱变位点多、诱变率高，所导致的生物体变异有生理性变异也可能有遗传性变异(农向群，张泽华，胡攀，高松，张礼生.航天诱变对昆虫病原真菌的生物学效应[J].菌物学报，2006，25(4)：674～681)。为筛选得到产孢量高、对根结线虫卵的致病能力有显著提高、耐盐性好的适合于生物防控的突变株，本专利技术对筛选得到的多株厚垣普可尼亚菌航天诱变菌株进行了形态、色素、菌丝及孢子形态、菌落生长速度、菌丝干重、产孢量和致病力等生物学检测并测定了各航天诱变菌株的耐盐性以及对苯菌灵的抗性：经航天诱变后的菌株在生长速率上出现了不同趋向和幅度的变异，方差分析显示，突变菌株Pc-m-38在前9d的生长速率较快，与原始菌株Pc之间差异显著(P<0.05)。航天诱变菌株培养过程中菌丝干重出现了正负双向变异，其中，突变株Pc-m-38的产孢量较原始菌株Pc有明显提升。厚垣普可尼亚菌航天诱变菌株对南方根结线虫的致病力产生了明显的变异。突变菌株Pc-m-38对南方根结线虫卵的寄生率较原始菌株对于南方根结线虫卵的寄生率有显著提升；方差分析显示，Pc-m-38对根结线虫卵的寄生率与原始菌株之间差异显著(P<0.05)，其较高的寄生率对于田间生防实践具有重要的意义。经航天诱变后的菌株对耐盐性出现了不同类型的变异。第一种类型为随着盐浓度的升高生长速率加快，到达一定值后随着盐浓度的升高生长速率减慢，其最适生长的盐浓度为0.10-0.15mol/L。第二种类型为随着盐浓度的升高生长速率减慢。方差分析显示，Pc-m-38对高盐环境(0.50mol/L)的耐受性与原始菌株Pc之间差异显著(P<0.05)，且能在高盐环境下稳定生长。最终，本专利技术从多株航天突变体菌株中筛选得到一株性能优异的适用于生物防控的突变株Pc-m-38，该突变株生长速率块、产孢子量高、能在高盐环境下稳定生长、对根结线虫卵的致病能力有显著提高，因此，该突变株Pc-m-38作为生防菌剂在根结线虫的防治应用上具有重要的前景。本专利技术将厚垣普可尼亚菌(Pochoniachamydosporia)航体诱变突变株Pc-m-38提交保藏，其微生物保藏号是：CGMCCNo.12512；分类命名：厚垣普可尼亚菌Pochoniachamydosporia；保藏时间：2016年6月14日；保藏单位是：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。本专利技术进一步提供了一种防治根结线虫的生防制剂，包括：防治上有效量的厚垣普可尼亚本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株厚垣普可尼亚菌(Pochonia chamydosporia)航天诱变突变株Pc‑m‑38，其特征在于，其微生物保藏号是：CGMCC No.12512。
【技术特征摘要】
1.一株厚垣普可尼亚菌(Pochoniachamydosporia)航天诱变突变株Pc-m-38，其特征在于，其微生物保藏号是：CGMCCNo.12512。2.权利要求1所述的厚垣普可尼亚菌航天诱变突变株Pc-m-10在防治植物害虫中的应用。3.按照权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的植物害虫是线虫。4.按照权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的线虫是根结线虫。5.一种防治植物害虫的生防制剂，其特征在于，包括：权利要求1所述的厚垣普可尼亚菌航天诱变突变株Pc-m-38的孢子粉或发酵液以及载体。6.按照权利要求5所述的生防制剂，其特征在于：...
【专利技术属性】
技术研发人员：汪来发，王曦茁，林彩丽，孟繁丽，刘洪剑，李永，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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