一种鲣鱼抗氧化复合物及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种鲣鱼抗氧化复合物的制备方法，是调节鲣鱼肉浆料pH 7.0～pH8.0，酶解后，酶解液经离心、两次过滤后即得鲣鱼抗氧化复合物；两次过滤是第一次用陶瓷膜过滤，第二次用纳滤膜过滤。鲣鱼抗氧化复合物中1000道尔顿以下的肽组分占95%以上，容易吸收与消化；浓度为5mg/mL时的还原力与0.125mg/mL的谷胱甘肽相当；对 1,1‑二苯基苦基苯肼自由基、超氧阴离子自由基与羟自由基清除活性的IC50值分别为2.68mg/mL、16.14mg/mL与21.04mg/mL；该制备过程工艺简单，易于产业化；产品经过了体外实验、体内实验证实具有良好的抗氧化效果，显示了良好的开发利用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及海洋生物制品制备
，更具体地，涉及一种鲣鱼抗氧化复合物及其制备方法。
技术介绍
近二十年来，活性氧和自由基的研究成为现代生命科学的前沿和热点，评价和筛选具有强抗氧化活性的天然资源成为生物学、医学和食品科学研究的新趋势。生物体内的天然抗氧化剂主要有还原型谷胱甘肽和肌肽，但含量很低，寻找外源性抗氧化剂一直是研究的重点，其中抗氧化肽的研究最为热点。海洋与淡水水产资源已成为获取及制备活性肽的重要来源，一方面是水产蛋白的肽链中普遍蕴含着功能区，即氨基酸以特定序列通过肽键连接而成的肽段，该肽段为活性肽的前体物质，经释放后可具有特殊的生物活性，另一方面是水产蛋白作为动物蛋白，氨基酸组成比例平衡，必需氨基酸含量高，蛋白质消化吸收率达85～90%。天然抗氧化肽具有较强的抗氧化活性、很高的安全性，在食品、医药和饲料行业的应用显示出优势，近年来已成为国内外研究的热点。酶解法是目前生产抗氧化活性肽的主要方法。研究者已经从鱼肉、鱼皮、鱼鳞、鱼加工下脚料等原料中分离纯化制备抗氧化肽。主要的制备过程包括蛋白酶酶解、离心、微孔过滤、超滤、活性炭吸附、层析、浓缩、喷雾干燥等方法，相关专利有鲨鱼皮胶原蛋白制备的抗氧化多肽（CN201110128241.0）、带鱼抗氧化肽的制备方法（CN201210215984.6）、一种利用鲣鱼加工副产物制备抗氧化肽的方法（CN201310476243.8）等。抗氧化活性评价方法有体外实验、体内实验两种。体外实验需要的样品量少，花费不大，周期短，大多的研究采用体外实验。体内实验需要的样品量大，花费大，周期长，少有研究采用。但是，体外实验结果只能是作为初步筛选用，只有体内实验结果具有抗氧化活性的才具有进一步开发利用的可能。鲣鱼俗称炮弹鱼，属鲈形总目金枪鱼科鲣属，主要分布于印度洋、太平洋和大西洋水域，是一种低值金枪鱼，鲣鱼产量约占世界金枪鱼总产量的48%以上，其年产量约100万吨。鲣鱼营养丰富，高蛋白低脂肪，具有多种保健功能，是国际营养协会推荐的绿色无污染健康食品。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种鲣鱼抗氧化复合物。本专利技术的第二个目的是提供鲣鱼抗氧化复合物的制备方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案予以实现的：一种鲣鱼抗氧化复合物的制备方法，包括以下步骤：S1.调节鲣鱼肉浆料pH为7.0～pH8.0，加入胰蛋白酶进行酶解；S2.升温灭酶活，酶解液经离心、两次过滤后即得鲣鱼抗氧化复合物；所述两次过滤是第一次用陶瓷膜过滤，第二次用纳滤膜过滤。本专利技术根据鲣鱼的特点，筛选利用两次过滤的方式对其进行分离纯化，利用酶解技术将鲣鱼蛋白降解为分子量大小不等的多肽、小肽及游离氨基酸的酶解液，采用离心分离去除渣和油脂，经陶瓷滤膜微滤分离去掉大分子，并能达到澄清脱色的目的，再经纳滤膜分离得到的肽、氨基酸的混合物，其中分子量在1000道尔顿以下的肽组分占95%以上。优选地，S1所述胰蛋白酶的加入量为每克鲣鱼肉16IU～25IU，酶解的温度为50℃～55℃，酶解时间为2.5～4.5小时。优选地，S1所述鲣鱼肉浆料是去除内脏、去鳃、清洗、切块后绞碎的鲣鱼肉与水按料液比1：1～1：4混匀获得。优选地，S2所述陶瓷膜过滤膜的孔径为50nm～200nm。优选地，S2所述纳滤膜的截留分子量为200道尔顿～300道尔顿。优选地，S2所述升温灭酶活是酶解结束，升温至85℃～95℃保温10分钟灭酶，冷却即可。本专利技术还提供上述方法获得的鲣鱼抗氧化复合物。本专利技术还提供所述鲣鱼抗氧化复合物的应用，具体地，可以利用鲣鱼抗氧化复合物制备食品和/或药品和/或化妆品。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了一种鲣鱼抗氧化复合物的制备方法，包括以下步骤：S1.调节鲣鱼肉浆料pH为7.0～pH8.0，加入胰蛋白酶进行酶解；S2.升温灭酶活，酶解液经离心、两次过滤后即得鲣鱼抗氧化复合物；所述两次过滤是第一次用陶瓷膜过滤，第二次用纳滤膜过滤。所述鲣鱼抗氧化复合物是具有抗氧化活性的肽和氨基酸的混合物，该混合物中1000道尔顿以下的肽组分占95%以上，容易吸收与消化；具有良好的体外抗氧化活性：浓度为5mg/mL时的还原力与0.125mg/mL的谷胱甘肽相当；对1,1-二苯基苦基苯肼自由基、超氧阴离子自由基与羟自由基清除活性的IC50值分别为2.68mg/mL、16.14mg/mL与21.04mg/mL；该制备过程工艺简单，易于产业化；产品经过了体外实验、体内实验证实具有良好的抗氧化效果，显示了良好的开发利用前景。具体实施方式下面将结合具体实施例进一步说明本专利技术的内容，但不应理解为对本专利技术的限制。不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤、条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。若无特别说明，实施例中所用的实验方法均为本领域技术人员所熟知的常规方法和技术，试剂或材料均为通过商业途径得到。实施例1鲣鱼抗氧化复合物的制备方法取去内脏、去鳃、清洗、切块绞碎后的鲣鱼肉2.5kg，按料液比（重量比）1：4加入水，混合均匀，用氢氧化钠溶液调节pH为7.5，将调节好pH的物料倒入酶解罐中，打开电源，启动加热和搅拌开关，待升温到50℃后，按照每克鲣鱼肉加入胰酶25IU，在50℃的条件下酶解4小时，然后升温至90℃保温10分钟灭酶。酶解液冷却后，采用三足式离心机离心过滤，去掉杂质和不溶物，采用膜孔径为200nm的无机管式陶瓷膜对离心后的酶解液进行循环式微滤，当残留液体积约为进料液的10%时，停止操作，得到透过液，透过液经截留分子量为200道尔顿～300道尔顿的纳滤膜纳滤，得到纳滤透过液，将纳滤透过液真空旋转蒸发浓缩后，经喷雾干燥制备成干粉即为鲣鱼抗氧化复合物，其分子量在1000道尔顿以下的肽组分占96.04%，300道尔顿以下的占80.0%。实施例2鲣鱼抗氧化复合物的体内抗氧化实验与结果SPF级NIH小鼠，雄性，30只，始体重为25～30g。根据体重将动物随机分为3组（每组10只），分别为空白对照组、模型对照组、鲣鱼复合物组。鲣鱼复合物剂量为0.5g/kg体重，按照0.2mL/10g体重进行灌胃给药，模型对照组及空白对照组灌胃给予等体积的超纯水。每天一次，连续30天。末次灌胃后，模型对照组、鲣鱼复合物组禁食16小时（过夜），然后一次性灌胃给予50%乙醇12mL/kgBW，6小时后颈椎脱臼法处死，取肝脏；空白对照组不做处理，不禁食取肝脏。备用待检测，检测结果如表1。根据国家食品药品监督管理局《抗氧化功能评价方法》中的结果判定：脂质氧化产物、蛋白质氧化产物、抗氧化物和抗氧化酶4项指标中有3项阳性，则可判断受试样品抗氧化功能动物实验结果阳性。因此，鲣鱼复合物抗氧化功能动物实验结果阳性。该鲣鱼复合物浓度为5mg/mL时的还原力与0.125mg/mL的谷胱甘肽相当；对1,1-二苯基苦基苯肼自由基、超氧阴离子自由基与羟自由基清除活性的IC50值分别为2.68mg/mL、16.14mg/mL与21.04mg/mL。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鲣鱼抗氧化复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1. 调节鲣鱼肉浆料pH为7.0～pH8.0，加入胰蛋白酶进行酶解；S2. 升温灭酶活，酶解液经离心、两次过滤后即得鲣鱼抗氧化复合物；所述两次过滤是第一次用陶瓷膜过滤，第二次用纳滤膜过滤。

【技术特征摘要】
1.一种鲣鱼抗氧化复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.调节鲣鱼肉浆料pH为7.0～pH8.0，加入胰蛋白酶进行酶解；S2.升温灭酶活，酶解液经离心、两次过滤后即得鲣鱼抗氧化复合物；所述两次过滤是第一次用陶瓷膜过滤，第二次用纳滤膜过滤。2.根据权利要求1所述的鲣鱼抗氧化复合物的制备方法，其特征在于，S1所述胰蛋白酶的加入量为每克鲣鱼肉16IU～25IU，酶解的温度为50℃～55℃，酶解时间为2.5～4.5小时。3.根据权利要求1所述的鲣鱼抗氧化复合物的制备方法，其特征在于，S1所述鲣鱼肉浆料...

【专利技术属性】
技术研发人员：周春霞，杨萍，洪鹏志，刘唤明，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：广东;44