【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种多能干细胞的培养方法、该方法中所使用的多能干细胞的培养用试剂盒及培养基。
技术介绍
以损伤组织的功能恢复等为目的开发了各种再生医疗。其中，报告了大量关于以组织本身的再生等为最终目的的灵长类尤其人类的全能或多能干细胞的技术。尤其，诱导型多能干细胞(iPS细胞)与胚胎干细胞不同是从体细胞诱导，因此具有伦理方面的问题少的优点。在培养这些灵长类的全能或多能干细胞(对这两者进行统称，本专利技术中简称为“多能干细胞”。)的情况下，要求在未分化状态下经长期维持。为了长期培养未分化状态的多能干细胞，通常使用小鼠成纤维细胞等饲养细胞。然而，指出因使用如所述小鼠成纤维细胞的来源于异种动物的饲养细胞，培养液中可能混入来源于异种动物的抗原性物质等的异物。因此，在将全能或多能干细胞用于医疗用途或与此相当的用途的情况下，要求将这些细胞在不存在饲养细胞的条件下进行培养。鉴于这种情况，进行了代替饲养细胞功能的细胞粘附性材料的开发。例如NatureBiotechnology,2001,Vol19,pp.971-974中公开了作为饲养细胞的代替物使用小鼠肉瘤提取成分即基质胶，始终良好地对维持了未分化状态的人胚胎干细胞进行培养。日本专利公开2001-17183号公报中公开有不含饲养细胞且含有增殖的灵长类原始细胞的细胞性组合物，作为优选方式公开有还含有细胞外基质的细胞性组合物。并且，日本专利公开2010-291...
【技术保护点】
一种多能干细胞的培养方法，其包含：在支撑体的细胞培养表面赋予(a)具有由序列号1表示的氨基酸序列的多肽、(b)具有与由序列号1表示的氨基酸序列的同源性为80％以上的氨基酸序列且具有多能干细胞的培养性能的多肽、或(c)具有序列号1中缺失、取代或附加1或数个氨基酸的氨基酸序列且具有多能干细胞的培养性能的多肽，以获得多肽包覆培养表面的阶段；及在所述多肽包覆培养表面上接种多能干细胞并使用抗坏血酸衍生物的含量为1.5mmol/L(mM)以上的培养基进行培养的阶段。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.09.10 JP 2013-1874411.一种多能干细胞的培养方法，其包含：
在支撑体的细胞培养表面赋予
(a)具有由序列号1表示的氨基酸序列的多肽、
(b)具有与由序列号1表示的氨基酸序列的同源性为80％以上的氨基酸
序列且具有多能干细胞的培养性能的多肽、或
(c)具有序列号1中缺失、取代或附加1或数个氨基酸的氨基酸序列且
具有多能干细胞的培养性能的多肽，
以获得多肽包覆培养表面的阶段；及
在所述多肽包覆培养表面上接种多能干细胞并使用抗坏血酸衍生物的含量
为1.5mmol/L(mM)以上的培养基进行培养的阶段。
2.根据权利要求1所述的多能干细胞的培养方法，其中，
所述(b)的多肽具有与由序列号1表示的氨基酸序列的同源性为90％以
上的氨基酸序列且具有多能干细胞的培养性能。
3.一种多能干细胞的培养方法，其包含：
在支撑体的细胞培养表面赋予下述(d)的多肽，以获得多肽包覆培养表
面的阶段，及在所述多肽包覆培养表面上接种多能干细胞并使用抗坏血酸衍生
物的含量为1.5mmol/L(mM)以上的培养基进行培养的阶段，其中，(d)包
含：
(1)包含选自由CSYYQSC即序列号2表示的氨基酸序列及由RGD表示的
氨基酸序列中的至少一个的第1区域、及
(2)包含(2-i)由PRPSLAKKQRFRHRNRKGYRSQRGHSRGRNQN即序列号3表
示的氨基酸序列、(2-ii)与由序列号3表示的氨基酸序列具有80％以上的同
源性且具有对支撑体的细胞培养表面的吸附能力的氨基酸序列、或(2-iii)
相对由序列号3表示的氨基酸序列缺失、取代或附加1或数个氨基酸残基且具
有对支撑体的细胞培养表面的吸附能力的氨基酸序列的第2区域，
且由40个～450个氨基酸残基构成。
4.根据权利要求3所述的多能干细胞的培养方法，其中，
所述(d)的多肽的第1区域包含由CSYYQSC即序列号2表示的氨基酸序
\t列及由RGD表示的氨基酸序列两者。
5.根据权利要求3所述的多能干细胞的培养方法，其中，
所述(d)的多肽的第1区域包含由序列号1所表示的氨基酸序列的第25
个～第47个氨基酸残基构成的氨基酸序列。
6.根据权利要求3所述的多能干细胞的培养方法，其中，
所述(d)的多肽的第1区域为(1-i)由序列号1所表示的氨基酸序列中
的第1个～第55个氨基酸残基构成的氨基酸序列、
(1-ii)由与由所述氨基酸序列(1-i)构成的氨基酸序列的同源性为8
0％以上的氨基酸序列构成且具有对多能干细胞的细胞粘附能力的氨基酸序列、
或
(1-iii)由所述氨基酸序列(1-i)中缺失、取代或附加1或数个氨基酸
的氨基酸序列构成且具有对多能干细胞的细胞粘附能力的氨基酸序列。
7.根据权利要求3～6中任一项所述的多能干细胞的培养方法，其中，
所述(d)的多肽由40个～400个氨基酸残基构成。
8.根据权利要求3～7中任一项所述的多能干细胞的培养方法，其中，
所述(d)的多肽还包含由选自下述(3a-i)～(3a-iii)中的一个氨基
酸序列构成的第3区域：
(3a-i)由序列号1表示的氨基酸序列中，由第56个～第341个氨基酸
残基构成的氨基酸序列或其部分氨基酸序列；
(3a-ii)与所述(3a-i)的氨基酸序列或其部分氨基酸序列具有80％以
上的同源性的氨基酸序列；及
(3a-iii)相对所述(3a-i)的氨基酸序列或其部分氨基酸序列缺失、取
代或附加1或数个氨基酸的氨基酸序列。
9.根据权利要求3～7中任一项所述的多能干细胞的培养方法，其中，
所述(d)的多肽还包含由选自下述(3b-i)～(3b-iii)中的一个氨基
酸序列构成的第3区域：
(3b-i)由序列号1表示的氨基酸序列中，由第269个～第341个氨基酸
残基构成的氨基酸序列或其部分氨基酸序列；
(3b-ii)与所述(3b-i)的氨基酸序列或其部分氨基酸序列具有80％以
上的同源性的氨基酸序列；及
(3b-iii)相对所述(3b-i)的氨基酸序列或其部分氨基酸序列缺失、取
代或附加1或数个氨基酸的氨基酸序列。
10.根据权利要求3～9中任一项所述的多能干细胞的培养方法，其中，
所述(d)的多肽还包含由选自下述(4a-i)～(4a-iii)中的一个氨基
酸序列构成的第4区域：
(4a-i)由序列号1表示的氨基酸序列中，由第374个～第459个氨基酸
残基构成的氨基酸序列或其部分氨基酸序列；
(4a-ii)与所述(4a-i)的氨基酸序列或其部分氨基酸序列具有80％以
上的同源性的氨基酸序列；及
(4a-iii)相对所述(4a-i)的氨基酸序列或其部分氨基酸序列缺失、取
代或附加1或数个氨基酸的氨基酸序列。
11.根据权利要求3所述的多能干细胞的培养方法，其中，
所述(d)的多肽由80个～450个氨基酸残基构成，且包含：
(1)由下述氨基酸序列构成的第1区域，所述氨基酸序列由序列号1所
表示的氨基酸序列的第25个～第47个氨基酸残基构成；
(2)由下述氨基酸序列构成的第2区域，所述氨基酸序列由序列号1所
表示的氨基酸序列的第342个～第373个氨基酸残基构成；以及
选自以下的第3区域及第4区域中的至少一个：
(3)由下述氨基酸序列或其部分氨基酸序列构成的第3区域，所述氨基
酸序列由序列号1所表示的氨基酸序列的第269个～第341个氨基酸残基构
成；及
(4)由下述氨基酸序列或其部分氨基酸序列构成的第4区域，所述氨基
酸序列由序列号1所表示的氨基酸序列的第374个～第459个氨基酸残基构<...
【专利技术属性】
技术研发人员：萩屋启太，村上裕太，芳野雄一，野见山早苗，半户里江，岩木义英，佐佐木翼，
申请(专利权)人：富士胶片株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP
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