ZNF800基因在制备骨质疏松症早期筛查产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于骨质疏松症早期筛查的分子标记物，所述分子标记物为ZNF800基因或该基因的表达蛋白及其片段、类似物和衍生物。本发明专利技术公开了ZNF800基因在制备骨质疏松症早期筛查产品中的应用。利用该基因在人群中进行骨质疏松症的普查，不仅能够快速有效的做到骨质疏松症的早期筛查，而且为预测诊断骨质疏松症的发生发展，甚至是为今后在生物学水平治疗骨质疏松症提供了治疗靶点和重要依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物领域，具体涉及ZNF800基因在制备骨质疏松症早期筛查产品中的应用。
技术介绍
骨质疏松症(osteoporosis)是一种以骨量降低、骨组织微结构破坏为特征，导致骨脆性增加和易于骨折的代谢性骨病。骨质疏松症发病缓慢，以骨骼疼痛和脆性骨折为特征。随着社会发展和人口老龄化，骨质疏松症已经成为最为常见的疾病之一。目前骨质疏松症已经成为多发病和常见病，随着年龄增长而发病率增加。我国是世界人口和老年人口最多的国家，同时也是骨质疏松症和潜在骨质疏松症患者最多的国家。我国60岁以上骨质疏松症患者大约为2900万例，低骨量患者为1700万例。我国60岁以上骨质疏松骨折总患病率大20.1％，严重威胁人群健康并带来沉重的经济负担。目前骨质疏松症的治疗仍以健康教育和骨折处理为主，然而目前用于临床的多种药物多以抑制破骨细胞功能为主，但临床效果不满意，未来更看好以促进成骨的药物。但由于缺乏病因和致病机理的研究，还不能有效控制骨质疏松症的发生和发展。因此，深入研究骨质疏松症的病因和致病机理并探索新的治疗方法在我国有着非同寻常的意义。骨质疏松症的发生是遗传和环境因素共同作用的结果，是一个复杂的多因子疾病。近年来，对于骨质疏松症遗传机制和相关基因的研究已经成为骨质疏松症病因学研究的热点和难点。此前国内外学者对骨质疏松症的相关基因开展了大量的研究，试图通过研究确定其直接病因；找到敏感的遗传标记，预测发生骨质疏松的危险性；开发药物防止骨量丢失和逆转骨质疏松。但是，其相关基因和致病基因仍然尚未明确，而致病机制还有待于更加深入和广泛的探索。
技术实现思路
为了实现骨质疏松症的早期发现，早期干预，本专利技术的目的在于提供一种新的骨质疏松症相关基因，以及该基因的表达蛋白及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一目的是提供该骨质疏松症相关基因及其表达产物在骨质疏松症早期筛查中的应用。为实现上述目的，本专利技术首先提供了用于骨质疏松症早期筛查的分子标记物，所述分子标记物为ZNF800基因或该基因的表达蛋白及其片段、类似物和衍生物。更进一步地研究发现，所述ZNF800基因或该基因的表达产物在骨质疏松症患者生物学样本中表达上调。进一步地，本专利技术提供了所述分子标记物在制备骨质疏松症早期筛查产品中的应用。优选的，所述早期筛查产品包括基因水平的筛查产品和蛋白水平的筛查产品。优选的，所述基因水平的早期筛查产品是通过real-timePCR、Northernblot、Southernblot、基因芯片、原位杂交或RNA酶保护实验方法来检测ZNF800基因的表达水平；所述蛋白水平的早期筛查产品是通过免疫检测、Westernblotting或蛋白芯片来检测ZNF800基因表达产物的表达水平。进一步地，本专利技术提供了一种用于骨质疏松症早期筛查的试剂，所述试剂包括检测ZNF800基因表达水平的寡聚核苷酸或检测ZNF800蛋白表达水平的抗体。进一步地，本专利技术提供了一种用于骨质疏松症早期筛查的试剂盒，所述试剂盒包括检测ZNF800基因或ZNF800蛋白表达水平的试剂。优选的，所述试剂盒包括检测ZNF800基因的引物或检测ZNF800蛋白的抗体。优选的，所述检测ZNF800基因的引物包括SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示的引物对。优选的，所述试剂盒的组分包括：(1)组织样本或血液中总RNA提取试剂：Trizol、氯仿、异丙醇和75％乙醇等。(2)反转录试剂：逆转录缓冲液、M-MLV逆转录酶、热稳定DNA聚合酶活性的酶、RNA酶抑制剂和T重复寡核苷酸OligodT。(3)定量PCR试剂：PCR缓冲液、SYBRGreen荧光染料、dNTPs组成的SYBRGreen聚合酶链式反应体系，引物和RNaseFreeH2O。(4)正常标准品：所述的正常标准品采用正常人群中相应基因表达水平位于中位值的人群，以其相应基因通过特异性反转录引物扩增反转录成的cDNA作为标准品。本专利技术的有益效果如下：本专利技术公开了一种与骨质疏松症相关的基因ZNF800，并进一步证实该ZNF800基因或该基因的表达蛋白及其片段、类似物和衍生物在骨质疏松症患者生物学样本中表达上调。利用该基因在人群中进行骨质疏松症的普查，解决了现有技术中筛查与诊断措施敏感性和特异性差的问题，能够快速有效的做到骨质疏松症的早期筛查与诊断，而且为预测诊断骨质疏松症的发生发展，甚至是为今后在生物学水平治疗骨质疏松症提供了治疗靶点和重要依据。附图说明图1本专利技术中实施例2中骨质疏松症患者ZNF800基因表达上调；图2本专利技术中实施例3中骨质疏松症患者ZNF800蛋白表达上调。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用的试剂可以商业购买得到。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常为本领域常规方法，如按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆，实验手册(第三版)(科学出版社，2002)中的所述条件，或按照试剂制造厂家所建议的条件。本专利技术的专利技术人对26例骨质疏松症患者样本及22例对照样本进行高通量测序，结合生物信息学方法进行基因筛选，挑选出候选基因ZNF800，现有研究中并没有ZNF800和骨质疏松症相关的报道，进一步，专利技术人进行了分子生物学方法验证，证实了ZNF800在骨质疏松症患者生物学样品中表达上调，其相关制剂可用于筛查骨质疏松症。本专利技术的ZNF800基因是在本专利技术之前的已知基因，其基本信息如下：Genbank登录号：NCBIGeneID：168850，来源于人类基因组。ZNF800(zincfingerprotein800，锌指蛋白800，proteincoding)，位于第7号染色体上。锌指蛋白是一类对基因调控起重要作用的转录因子，具有手指状结构域，参与细胞分化、胚胎发育，并与许多疾病的发生相关。ZNF800属于C2H2型锌指蛋白家族，包含7个C2H2型锌指，参与基因转录调控。本专利技术还采用RT-PCR方法和Western-Blot方法检测上述基因在骨质疏松症患者和正常人群中的表达，并验证了该基因为骨质疏松症表达上调基因。本专利技术的ZNF800基因的核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据已公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA作为模板，扩增而得到有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次扩增，然后再将多次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。目前，已经可以完全通过化学合成来编码本专利技术的蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中的各种DNA分子(如载体)和细胞中。本专利技术蛋白的片段除了可用重组法产生之外，还可用固相技术通过直接合成肽而加以生产(Stewart等人，(1969)Soliod本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于骨质疏松症早期筛查的分子标记物，其特征在于，所述分子标记物为ZNF800基因或该基因的表达蛋白及其片段、类似物和衍生物。

【技术特征摘要】
1.用于骨质疏松症早期筛查的分子标记物，其特征在于，所述分子标记物为ZNF800基因或该基因的表达蛋白及其片段、类似物和衍生物。2.如权利要求1所述的分子标记物，其特征在于，所述ZNF800基因或该基因的表达产物在骨质疏松症患者生物学样品中表达上调。3.如权利要求1或2所述的分子标记物在制备骨质疏松症早期筛查产品中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述早期筛查产品包括基因水平的筛查产品和蛋白水平的筛查产品。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述基因水平的筛查产品是通过real-timePCR、Northernblot、Southernblot、基因芯片、原位杂交或RNA酶保护实验方法来检测ZNF800基因的表达水平；所述蛋白水平的筛查产品是通过免疫检测、West...

【专利技术属性】
技术研发人员：李强，邱贵兴，吴志宏，
申请(专利权)人：李强，
类型：发明
国别省市：北京;11