一种黄梁木蔗糖转运蛋白同源基因的克隆方法技术

本发明专利技术属于分子生物学及基因工程技术领域，公开了一种黄梁木蔗糖转运蛋白同源基因(NcSUT2、NcSUT3、NcSUT4)的克隆方法。克隆方法包括以下操作步骤：应用如SEQ ID NO：1所示的引物F，如SEQ ID NO：2所示的引物R，进行PCR扩增NcSUT2；应用如SEQ ID NO：3所示的引物F，如SEQ ID NO：4所示的引物R，进行PCR扩增NcSUT3；应用如SEQ ID NO：5所示的引物F，如SEQ ID NO：6所示的引物R，进行PCR扩增NcSUT4。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学及基因工程
，具体涉及一种黄梁木蔗糖转运蛋白同源基因(NcSUT2、NcSUT3、NcSUT4)的克隆方法。
技术介绍
黄梁木(Neolamarckiacadamba)，又称团花树，茜草科团花属树种，在食用、药用以及工业用途等众多方面都发挥着不容小觑的作用，是一种重要的速生经济树种。而蔗糖为根部、生殖结构、储存和发育器官等的异养细胞提供大量的营养物质，为了确保这些异样的库组织的生长和发育接收到足够量的蔗糖，蔗糖转运蛋白在整个植物中对蔗糖的膜运输及分布起到关键作用。因此，对黄梁木的蔗糖转运蛋白基因的研究，有助于进一步了解蔗糖在黄梁木中转运机制和作用机理以便充分加以利用。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺点与不足，本专利技术的首要目的在于提供一种黄梁木蔗糖转运蛋白同源基因(NcSUT2、NcSUT3、NcSUT4)的克隆方法。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种黄梁木蔗糖转运蛋白同源基因的克隆方法，包括以下操作步骤：应用如SEQIDNO：1所示的引物F，如SEQIDNO：2所示的引物R，进行PCR扩增NcSUT2；应用如SEQIDNO：3所示的引物F，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种黄梁木蔗糖转运蛋白同源基因的克隆方法，其特征在于包括以下操作步骤：应用如SEQ ID NO：1所示的引物F，如SEQ ID NO：2所示的引物R，进行PCR扩增NcSUT2；应用如SEQ ID NO：3所示的引物F，如SEQ ID NO：4所示的引物R，进行PCR扩增NcSUT3；应用如SEQ ID NO：5所示的引物F，如SEQ ID NO：6所示的引物R，进行PCR扩增NcSUT4。

【技术特征摘要】
1.一种黄梁木蔗糖转运蛋白同源基因的克隆方法，其特征在于包括以下操作步骤：应用如SEQIDNO：1所示的引物F，如SEQIDNO：2所示的引物R，进行PCR扩增NcSUT2；应用如SEQIDNO：3所示的引物F，如SEQIDNO：4所示的引物R，进行PCR扩增NcSUT3；应用如SEQIDNO：5所示的引物F，如SEQIDNO：6所示的引物R，进行PCR扩增NcSUT4。2.根据权利要求1所述的一种黄梁木蔗糖转运蛋白同源基因的克隆方法，其特征在于：所述PCR的反应条件是：94℃预变性2min，98℃变性10sec，50℃退火30sec，68℃延伸2min，将变性、退火和延伸三个步骤重复40个循环；循环结束后，68℃再延伸2min，4℃冷却10min；反应后加3μLdNTPs、0.5μLTaq酶，72℃反应20min。3.根据权利要求1所述的一种黄梁木蔗糖转运蛋白同源基因的克隆方法，其特征在于：所述PCR的体系是：4.根据权利要求3所述的一种黄梁木蔗糖转运蛋白同源基因的克隆方法，其特征在于：所述cDNA第一链模板是按照以下方法合成：(1)基因组DNA去除：在RNasefree离心管中配配置下列溶液：RNasefreeddH2Oto16μL4×gDNAwiperMix4μL模板RNA1000ng移液器吹打混匀42℃，2min，(2)在步骤(1)中的PCR管中直接加入5×HiScriptⅡqRTsuperMixⅡ4μL，溶液吹打均匀，以以下条件进行反转录扩增：25℃反转录引物和模板RNA退火结合10min，50℃延伸30min，85℃保持5min把合成的cDNA和RNA变性打开得到cDNA，然后4℃恒温保存。5.根据权利要求4所述的一种黄梁木蔗糖转运蛋白同源基因的克隆方法，其特征在于：所述RNA是按照以下提取方法得到：(1)收集100mg研磨冰冻的黄梁木韧皮部样品在离心管中，在组织解冻之前，加入500μL的裂解液RLT和50μLPLANTaid混匀，用手立即剧烈震荡20s，使样品充分混匀；(2)接着室温下以速度130...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭昌操，杨紫薇，任陈希，刘思雯，朱其金，黄甜，董甜甜，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44