包括非天然氨基酸的方法和组合物技术

本发明专利技术公开了检测非天然氨基酸和包含至少一个非天然氨基酸的多肽的方法。自身或作为多肽的一部分的非天然氨基酸可包含多种官能团，包含(但不限于)肟基、羰基和/或羟胺基。本发明专利技术也揭示了经进一步翻译后修饰的非天然氨基酸多肽和检测所述多肽的方法。

【技术实现步骤摘要】
相关申请案的交叉参考本申请案主张2005年11月16日申请的标题为“MethodsofDetectingNon-NaturalAminoAcidPolypeptidesinvivoandinvitro”的美国临时申请案第60/737,855号的权利。相关分案申请本专利申请是申请号为200680043001.8的名称为“包括非天然氨基酸的方法和组合物”的专利技术专利申请的分案申请，原申请的申请日是2006年11日16日。
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技术介绍
将非遗传编码的氨基酸(即，“非天然氨基酸”)并入蛋白质中的能力允许引入化学官能团，其可提供天然存在官能团(诸如赖氨酸的ε-NH2、半胱氨酸的巯基-SH、组氨酸的亚氨基等)的有价值替代物。已知某些化学官能团对20种常见遗传编码氨基酸中存在的官能团为惰性的，但与可结合于非天然氨基酸上的官能团明确且有效地反应以形成稳定键联。如今可用方法来选择性地引入蛋白质中不存在的对20种常见遗传编码氨基酸中所存在的所有官能团呈化学惰性且可用于与包括某些官能团的试剂有效且选择性地反应以形成稳定共价连接的化学官能团。
技术实现思路
本文中描述且以引用的方式并入用于制造、纯化、检测、表征以及使用非天然氨基酸、非天然氨基酸多肽以及经修饰非天然氨基酸多肽的方法、组合物、技术以及策略。本专利技术提供检测多肽的方法，其包括检测多肽中的非天然编码氨基酸侧链。在一些实施例中，多肽是由核糖体合成的。本专利技术也提供检测多肽的方法，其包括检测已经翻译后修饰的多肽中的非天然编码氨基酸侧链。也提供检测所述多肽中非天然编码氨基酸侧链的方法，其包括使非天然编码氨基酸侧链与包括与非天然编码氨基酸侧链特异性相互作用的官能团的分子接触。也提供纯化多肽链中具有非天然编码氨基酸的多肽的方法。在一些实施例中，所述方法包括使多肽和与多肽中的非天然编码氨基酸侧链相互作用的物质接触。在其它实施例中，所述纯化多肽链中具有非天然编码氨基酸的多肽的方法包括使多肽沉淀，其中当与多肽链中无非天然编码氨基酸的多肽的溶解性相比时，非天然编码氨基酸改变多肽的溶解性。也提供纯化核糖体制造的多肽侧链中具有非天然编码氨基酸的多肽的方法，其包括使多肽电泳，其中当与多肽侧链中无非天然编码氨基酸的多肽的电泳迁移率相比时，非天然编码氨基酸改变多肽的电泳迁移率。在其它实施例中，纯化核糖体制造的多肽侧链中具有非天然编码氨基酸的多肽的方法包括使多肽透析，其中当与多肽链中无非天然编码氨基酸的多肽的扩散速率相比时，非天然编码氨基酸改变多肽的扩散速率。本专利技术也提供筛检分子文库的方法，其包括：a)在允许分子文库与包括非天然编码氨基酸的多肽相互作用的条件下使包括非天然编码氨基酸的多肽与分子文库组合，和b)鉴别与包括非天然编码氨基酸的多肽相互作用的分子文库。在一些实施例中，筛检包括多个具有不同氨基酸序列的多肽的核糖体制造的多肽的文库，其中各多肽都包括非天然氨基酸。本专利技术也提供包括以下步骤的方法：a)在具有至少一种已知生物活性的预选定多肽中的单个预选定位点处用非天然编码氨基酸取代天然编码氨基酸；和b)测量包括非天然编码氨基酸的预选定多肽的生物活性；以及c)比较步骤b)的预选定多肽与已在预选定多肽链的不同位置处用非天然编码氨基酸取代天然编码氨基酸的预选定多肽或多肽链中无取代非天然编码氨基酸的预选定多肽的生物活性。在一些实施例中，选择预选定多肽的供翻译后修饰的位置的方法包括：a)在具有至少一种已知生物活性的预选定多肽中的单个预选定位点处用非天然编码氨基酸取代天然编码氨基酸；和b)测量包括非天然编码氨基酸的预选定多肽的生物活性；以及c)比较步骤b)的预选定多肽与已在预选定多肽链的不同位置处用非天然编码氨基酸取代天然编码氨基酸的预选定多肽或多肽链中无取代非天然编码氨基酸的预选定多肽的生物活性。应了解，本文中所述且以引用的方式并入的方法和组合物不限于本文中所述的特定方法、方案、细胞株、构筑体以及试剂且同样可改变。同样应了解，本文中所使用的术语仅出于描述特定实施例的目的，且并非意欲限制本文中所述的方法和组合物的范畴，所述范畴应仅由随附权利要求书来限制。定义除非上下文另外明确指出，否则如本文中和随附权利要求中所使用的单数形式“一”和“所述”包含复数提及。除非另外定义，否则本文中使用的所有技术术语和科学术语具有如本文中所述的本专利技术所属领域的技术人员通常所了解相同的含义。尽管与本文中所述的那些类似或等效的任何方法、装置以及材料可用于本文中所述的本专利技术的实施或测试中，但现在描述优选方法、装置以及材料。本文中提及的所有公开案和专利是为了描述和揭示(例如)公开案中所述的构筑体和方法的目的以引用的方式全部并入本文中，其可结合本文中所述的本专利技术使用。仅提供本文所讨论的公开案在本专利技术申请日期之前的揭示内容。本文中的任何内容不应被解释为承认本文所述的专利技术者因先前专利技术或任何其它原因而无权提前公开本专利技术。术语“烷氧基”、“烷基氨基”以及“烷硫基”(或硫代烷氧基)是以其常规意义使用，且指的是分别通过氧原子、氨基或硫原子与分子其余部分连接的那些烷基。除非另外指出，否则自身或作为另一取代基的部分的术语“烷基”意谓直链或支链或环状烃基，或其组合，其可为完全饱和、单不饱和或多不饱和的且可包含具有指定碳原子数目(即C1-C10意谓1至10个碳)的二价基团和多价基团。饱和烃基的实例包含(但不限于)以下基团，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基、(例如)正戊基、正己基、正庚基、正辛基以及其类似基团的同系物和异构体。不饱和烷基为具有一个或一个以上双键或三键的烷基。不饱和烷基的实例包含(但不限于)乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(1,4-戊二烯基)、乙炔基、1-丙炔基和3-丙炔基、3-丁炔基以及更高级的同系物和异构体。除非另外指出，否则术语“烷基”也意谓包含下文中更详细定义的烷基的那些衍生物，诸如“杂烷基”。限于烃基的烷基称为“均烷基”。自身或作为另一取代基的部分的术语“亚烷基”意谓衍生自烷烃的二价基团，例如(但不限于)结构-CH2CH2-和-CH2CH2CH2CH2-且进一步包含下文中描述为“亚杂烷基”的那些基团。烷基(或亚烷基)通常将具有1至24个碳原子，其中具有10个或10个以下碳原子的那些基团是本文中所述的方法和组合物的特定实施例。“低碳烷基”或“低碳亚烷基”是通常具有8个或8个以下碳原子的较短链烷基或亚烷基。术语“氨基酸”指的是天然存在和非天然氨基酸，以及以类似于天然存在氨基酸的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然编码氨基酸为20种常见氨基酸(丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸以及缬氨酸)以及焦赖氨酸和硒半胱氨酸。氨基酸类似物指的是具有与天然存在氨基酸相同的基本化学结构(即，与氢、羧基、氨基以及R基团结合的α-碳)的化合物，诸如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。所述类似物可具有经修饰R基团(诸如，正亮氨酸)或经修饰肽主链，但仍保留与天然存在氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测多肽的方法，其包括检测所述多肽中的非天然编码氨基酸侧链。

【技术特征摘要】
2005.11.16 US 60/737,8551.一种检测多肽的方法，其包括检测所述多肽中的非天然编码氨基酸侧链。2.一种检测多肽的方法，其包括检测已经翻译后修饰的多肽中的非天然编码氨基酸侧链。3.一种检测多肽中非天然编码氨基酸侧链的方法，其包括使所述非天然编码氨基酸侧链与包括与所述非天然编码氨基酸侧链特异性相互作用的官能团的分子接触。4.一种筛检分子文库的方法，其包括：a)使包括非天然编码氨基酸的多肽与所述分子文库在允许所述分子文库与所述包括非天然编码氨基酸的多肽相互作用的条件下组合，b)鉴别所述与所述包括非天然编码氨基酸的多肽相互作用的分子文库。5.一种核糖体制造的多肽的文库，其包括多个具有不同氨基酸序列的多肽，其中各多肽包括非天然氨基酸。6.一种纯化多肽链中具有非天然编码氨基酸的多肽的方法，其包括使所述多肽和与所述多肽中的非天然编码氨基酸相互作用的物质接触。7.一种纯化多肽链中具有非天然编码氨基酸的多肽的方法，其包括使所述多肽沉淀，其中当与多肽链中无非天然编码氨基酸的所述多肽的溶解性相比时，所述非天然编码氨基酸改变所述多肽的溶解性。8.一种纯化多肽侧链中具有非天然编码氨基酸的核糖体制造的多肽的方法，其包括使所述多肽电泳，其中当与多肽侧链中无非天然编码氨基酸的所述多肽的电泳迁移率相比时，所述非天然编码氨基酸改变所述多肽的电泳迁移率。9...

【专利技术属性】
技术研发人员：苗振伟，田锋，安娜·玛莉亚·A·海斯·蒲楠，英·布彻勒，
申请(专利权)人：AMBRX公司，
类型：发明
国别省市：美国;US