用于检测PRRSV和PEDV双重RT‑PCR的方法及引物技术

本发明专利技术公开了一种用于检测PRRSV和PEDV双重RT‑PCR的方法及引物，该引物包括PRRSV引物对和PEDV引物对；PRRSV引物对包括引物PRRSV‑P1和引物PRRSV‑P2，所述PEDV引物对包括引物PEDV‑P1和引物PEDV‑P2；该方法通过对PRRSV的ORF7基因和PEDV的S基因序列设计特异性引物，保证扩增片段的准确性和引物的特异性；通过对反应体系中各组分的优化，实现了两种病毒在同一反应体系中的同时扩增。本发明专利技术建立的双重RT‑PCR方法能快速有效地对PRRSV和PEDV进行诊断，对实际生产有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物领域，具体地说，涉及一种用于检测PRRSV和PEDV双重RT-PCR的方法及引物。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与综合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevires，PRRSV)引起的猪的一种高度接触性传染病，我国俗称猪“蓝耳病”。PRRSV具有宿主专一性，仅感染猪，引起母猪繁殖障碍，仔猪呼吸系统疾病。PRRS1996年在我国首发，2001年我国爆发普通蓝耳病，而后继续发展成2006年的高致病性蓝耳病大流行。PRRS对我国养猪业带来巨大威胁，造成严重经济损失。猪流行性腹泻病(porcineepidemicdiarrhea,PED)是危害我国养猪业的另一种高度接触性病毒传染病。1980年，我国首次出现猪流行性腹泻的相关报道，而后多省不断有流行性腹泻的发生，2010年，猪流行性腹泻再次在我国大规模爆发。近年来，猪流行性腹泻的流行趋势逐渐扩大，季节性越来越不明显。猪感染流行性腹泻病毒(porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV)可感染各品种、各年龄段的猪，发病猪表现为食欲饮欲下降、呕本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测PRRSV和PEDV的引物，其特征在于，包括PRRSV引物对和PEDV引物对；PRRSV引物对包括引物PRRSV‑P1和引物PRRSV‑P2，所述PEDV引物对包括引物PEDV‑P1和引物PEDV‑P2；所述引物PRRSV‑P1、引物PRRSV‑P2、引物PEDV‑P1和引物PEDV‑P2的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测PRRSV和PEDV的引物，其特征在于，包括PRRSV引物对和PEDV引物对；PRRSV引物对包括引物PRRSV-P1和引物PRRSV-P2，所述PEDV引物对包括引物PEDV-P1和引物PEDV-P2；所述引物PRRSV-P1、引物PRRSV-P2、引物PEDV-P1和引物PEDV-P2的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。2.根据权利要求1所述的用于检测PRRSV和PEDV的引物，其特征在于，所述PRRSV引物对用于检测PRRSV，所述PEDV引物对用于检测PEDV。3.一种用于检测PRRSV和PEDV双重RT-PCR的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)提取待测样品中病毒RNA；2)将步骤1)得到的RNA反转录为cDNA；3)将步骤2)得到的cDNA进行PCR扩增，回收目的片段克隆到pMD19-T载体，转入DH5α中，筛选，摇菌，抽提质粒；4)将步骤3)所得质粒经PCR鉴定为阳性后-20℃保存备用；5)对扩增产物测序，以确定其中是否含有目的基因；所述目的基因分为PRRSV目的基因和PEDV目的基因，其中所述PRRSV目的基因是PRRSV的ORF7蛋白基因，所述PEDV目的基因是PEDV的S蛋白基因。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤1)中提取待测样品中病毒RNA具体...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱玲，李小璟，徐志文，孙贤刚，龚双燕，杨泽晓，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51