CRYBB2基因在制备检测先天性白内障制品中的应用制造技术

本发明专利技术的目的是提供一种CRYBB2基因在制备检测先天性白内障诊断制品中的应用，本发明专利技术提供了CRYBB2基因的新的用途，从而提供了一种有效的进行先天性白内障疾病基因诊断、产前基因筛查及遗传咨询的途径，应用效果表明本发明专利技术所提供的基因的SNP位点及检测引物可以有效的用于临床患者及胎儿绒毛或羊水进行CRYBB2基因突变位点的快速检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因诊断制品
，具体涉及一种晶体蛋白βB2(CRYBB2)在制备检测先天性白内障基因诊断制品中的应用。专利技术背景先天性白内障(congenitalcataract)是导致儿童低视力和盲的常见眼病，发病率约为0.01％-0.06％，白内障能导致婴幼儿失明或弱视，失明儿童中有22％～30％为白内障所致，是一组严重的致盲疾病，严重影响儿童的视力发育，已成为儿童失明的第二位原因。先天性白内障可独立发生，也可作为眼部或全身综合征的伴发症状，常累及双眼，常伴发眼前节发育不良，如虹膜缺损、Peters异常、瞳孔异位及眼球震颤等，这些多发畸形常使大多数患者丧失视力，是先天性致盲的重要原因之一。该病目前尚缺乏有效的治疗手段，因此严重影响着患者的生活质量，给社会和家庭带来了沉重的经济和精神负担。迄今为止，已经发现200多个基因和位点与先天性白内障相关，先天性白内障基因/位点的鉴定对揭示先天性白内障疾病的致病机理及研究其防治措施具有重要意义。与先天性白内障相关的基因编码的蛋白涉及到晶状体蛋白、转录因子、连接蛋白及跨膜转运蛋白等。国内外的遗传学研究结果表明该病很大程度上是由于遗传因素导致的。先天性白内障具有显著的遗传异质性，存在多个候选致病基因，这已经成为先天性白内障的发病机制的研究以及针对病因的诊断和治疗研究的瓶颈。这种现状促使进一步去发现和了解该病新的致病基因，为后续的基因诊断、产前诊断及基因治疗提供基础。先天性白内障发病较早，病情逐渐进展，常双眼发病，对视力影响严重，早期治疗至关重要，但婴幼儿先天性白内障的延迟发现和治疗现象在我国十分严重，术后并发症多并且容易复发，加之手术费用昂贵，给患者家庭和社会带来沉重的经济和精神负担。建立先天性白内障的相关的基因突变检测系统，并应用于临床工作和优生优育，有助于遗传性先天性白内障的基因诊断和相应的基因治疗，有助于突变基因携带者的检出，有助于通过产前检查降低疾病的发生率，有助于有效地控制这种疾病的发生。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种CRYBB2基因在制备检测先天性白内障诊断制品中的应用，从而弥补现有技术的不足。申请人从一个3代呈常染色体显性遗传的先天性白内障家系中，对该家系中一名患者进行了视觉系统异常相关单基因遗传病的505个基因的二代高通量测序，经一代测序法验证找到了该家系的致病基因CRYBB2存在遗传上的致病突变，从而促成了本专利技术。本专利技术首先提供CRYBB2基因用途，是在制备用于检测先天性白内障诊断制品中的应用；上述的诊断制品，作为实施例的优选，是检测先天性白内障的引物。上述的引物对，其引物信息如下：CRYBB2-1F:GTCTCAAGGCCCCACAGAGSEQIDNO:1CRYBB2-1R:GAAGGGCAACTAAGTCTGGGSEQIDNO:2CRYBB2-2F:CCACGTCTACCACCCAGTTCSEQIDNO:3CRYBB2-2R:CACAACTTGATCACCTCACCCSEQIDNO:4CRYBB2-3F:CTGCCATAGGAAGCTTGGAGSEQIDNO:5CRYBB2-3R:GGTGGCAGAGAGAGAAAGTAGGSEQIDNO:6CRYBB2-4F:GAGCATGGGGTGGGAAGSEQIDNO:7CRYBB2-4R:GACCCCAGAGTCTCAGTTCCSEQIDNO:8CRYBB2-5F:GGCTTCACCCTTCCTAGTGGSEQIDNO:9CRYBB2-5R:CTGTTGCCCTACTCCTAGCACSEQIDNO:10。本专利技术还提供一种用于检测先天性白内障的试剂盒，包含有上述的引物对中的两种或几种。本专利技术还提供一种与先天性白内障疾病相关的SNP位点，为CRYBB2基因编码区域由起始密码子起第355位碱基。其中用于检测上述SNP位点的引物信息如下：CRYBB2-4F:GAGCATGGGGTGGGAAGSEQIDNO:7CRYBB2-4R:GACCCCAGAGTCTCAGTTCCSEQIDNO:8本专利技术提供了CRYBB2基因的新的用途，从而提供了一种有效的进行先天性白内障疾病基因诊断、产前基因筛查及遗传咨询的途径，应用效果表明本专利技术所提供的基因的SNP位点及检测引物可以有效的用于临床患者及胎儿绒毛或羊水进行CRYBB2基因突变位点的快速检测。附图说明图1：实施例1的先天性白内障家系内患者CRYBB2测序图，其中A：患者父亲，正常表型；B：患者。该家系中三名患者CRYBB2基因编码区域由起始密码子起第355位碱基发生了杂合突变，其碱基由G变为A。具体实施方式申请人在一个先天性白内障家系中发现CRYBB2基因的突变位点，并证实该基因的突变是该病的致病基因，从而促成了本专利技术。CRYBB2基因位于染色体22q11.23,可转录成大约618bp的mRNA(NCBI登录号为NM_000496.2)，直接翻译形成205个氨基酸组成的蛋白质。下面结合实施例对本专利技术进行详细的描述。实施例1：从先天性白内障家系中筛选CRYBB2基因的突变位点1、提取外周血基因组DNA：在符合国家相关政策规定，并在取样对象同意的基础上，抽取家系成员外周静脉血2-5ml，放入EDTA抗凝管内，-80℃冻存备用；冻存的EDTA抗凝血在室温融化后，取500μL放于离心管，加入等体积TE(pH8.0)，混匀，4℃，10000rpm离心10分钟，弃上清。加入180μLTE、20μLSDS(10％)、8μL蛋白酶K(l0mg/ml)混匀，置于37℃水浴过夜。从水浴中取出样品，瞬时离心沉淀样本。在反应管中加入等体积的Tris-饱和酚(约300μL)，充分混匀，室温下10000rpm离心10分钟，吸取上清液(约300μL)至一新离心管中。重复酚抽提一次，吸取上清液至一新离心管中。加入等体积的Tris饱和酚:氯仿混合液(酚、氯仿各150μL)，混匀，室温10000rpm离心10分钟，转移上清液至一新离心管。加入等体积的Tris饱和酚:氯仿:异戊醇混合液(酚、氯仿、异戊醇各100μL)，混匀，室温10000rpm离心10分钟，转移上清液至一新离心管。加入l/10体积3mol/L、pH5.2醋酸钠(约30μL)，2倍体积预冷100％乙醇，轻轻混合，可见白色絮状沉淀。室温10000rpm离心10分钟，使DNA沉淀于管底，弃上清。向DNA沉淀加入70％乙醇，漂洗一次，室温7000rpm离心5分钟，弃上清，置于室温中挥发剩余乙醇，最后加入50μLTE(pH8.0)，4℃过夜溶解DNA。对提取的DNA行琼脂糖胶电泳，并应用紫外分光光度计在260nm和280nm比色，检测DNA纯度及浓度。2、目标序列捕获高通量测序：目标序列捕获高通量测序技术是一种新型的基因组分析技术，使用一套核苷酸探针捕获基因组上的目标序列，然后使用通用引物对这些捕获到的序列进行扩增，再对这些扩增产物进行高通量生物信息学分析。取该家系中1名患者的基因组DNA，由北京德易东方转化医学研究中心有限公司应用探针捕获人类视觉系统异常相关单基因遗传病的505个基因的外显子区域，然后对富集的外显子文库进行高通量测序。将突变滤过4个正常人数据库：单核苷酸多态性数据库(ftp://ftp.ncbi.n本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种CRYBB2基因的应用，其特征在于，所述的应用是CRYBB2基因在制备用于检测先天性白内障诊断制品中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种CRYBB2基因的应用，其特征在于，所述的应用是CRYBB2基因在制备用于检测先天性白内障诊断制品中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的诊断制品为PCR检测引物。3.一种用于检测先天性白内障的引物对，所述的引物对的信息如下：4.一种用于检测先天性白内障的诊断试剂盒，其特征在于，所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈鹏，陈豪，夏玉军，单涛，
申请(专利权)人：青岛大学，
类型：发明
国别省市：山东;37