用于修饰脂肪酶的方法技术

本发明专利技术涉及用于修饰脂肪酶的一个或多个特征的方法，该方法包括使肽与脂肪酶结合的步骤，其中该肽与所述脂肪酶的前肽的至少一个主要脂肪酶接触区的氨基酸序列具有至少50％序列一致性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对序列表的引用本申请含有计算机可读形式的序列表。该计算机可读形式通过引用结合在此。专利
本专利技术涉及脂肪酶和修饰并使用它们的方法。专利技术背景脂肪酶是熟知的脂解酶，作为用于清洁、织物护理和/或其他处理的组合物中的成分。正连续开发适合的组合物，以便满足对有效去污、低能量消耗和可持续性的复杂需要。当下的组合物包含许多成分，这些成分创造出严苛的环境，在这样的环境中脂肪酶的活性很难保持。因此，对于找到用于修饰脂肪酶，生成在这些严酷的环境中保持活性的脂肪酶的适合的方法存在需要。专利技术概述多年来，脂肪酶一直被成功地用于各种应用中。然而，可以在清洁组合物中使用的有效的脂肪酶的选择仍然是相当有限的。人们一直努力试图通过修饰脂肪酶来获得有改变的特征比如活性、稳定性等的变体从而提供与清洁组合物中的成分有更好的相容性的脂肪酶。到目前为止，要提供不仅能在清洁组合物的严苛的环境中生存，同时又能表现出洗涤性能的脂肪酶仍然是一项挑战。本专利技术涉及用于产生具有增加的稳定性的脂肪酶制剂，该脂肪酶制剂在与洗涤剂和/或蛋白酶接触时可以被活化或重新活化，由此提供洗涤效果。附图简述图1示出了SEQIDNo:2、6、7和8的比对。专利技术详述定义脂肪酶：术语“脂肪酶(lipase)”、“脂肪酶(lipaseenzyme)”、“脂解酶”、“脂质酯酶”、“脂解多肽”以及“脂解蛋白”是指如酶命名法所定义的EC3.1.1类中的一种酶。它可以具有脂肪酶活性(三酰基甘油脂肪酶，EC3.1.1.3)、角质酶活性(EC3.1.1.74)、固醇酯酶活性(EC3.1.1.13)和/或蜡酯水解酶活性(EC3.1.1.50)。出于本专利技术的目的，根据实例中所述的程序确定脂肪酶活性，例如实例2中描述了对pNp底物的水解活性。在一方面，本专利技术的脂肪酶具有SEQIDNO:3的多肽的脂肪酶活性的至少20％，例如至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或100％。脂肪酶底物：术语“脂肪酶底物”可以是经受如以上所定义的脂肪酶的活性的任何底物。织物：如在此使用的术语“织物”是指用于如所描述的本专利技术目的的任何适合的织物、纺织品和/或亚麻布。洗涤性能：在本专利技术背景下，使用术语“洗涤性能”作为酶降解和/或去除存在于待清洁的织物上的脂质或含脂质污渍的能力。洗涤性能可以通过计算在以下方法部分中定义的Δ反射指数(deltaremissionindex)值来定量。洗涤性能可以在如所描述的所有类型的适合织物上测量，所述织物包括在衣物洗涤、和工业清洁及机构清洁中使用的任何织物。编码序列：术语“编码序列”意指直接指定一个脂肪酶的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由一个开放阅读框架决定，该开放阅读框架从一个起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以一个终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可以是一种基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。控制序列：术语“控制序列”意指对于表达编码本专利技术的脂肪酶的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该脂肪酶的多核苷酸来说可以是原生的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是原生的或外源的。这些调控序列包括但不限于前导序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号狀序列和转录终止子。至少，控制序列包括启动子以及转录和翻译终止信号。调控序列可以和用于引入特异性限制位点的接头一起提供，所述特异性限制位点促进调控序列与编码脂肪酶的多核苷酸的编码区的连接。表达：术语“表达”包括涉及脂肪酶产生的任何步骤，包括但不限于，转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰以及分泌。表达载体：术语“表达载体”意指线性或环状DNA分子，该分子包含编码脂肪酶的多核苷酸并且该多核苷酸可操作地与提供用于其表达的控制序列相连接。片段：术语“片段”意指在成熟多肽的氨基和/或羧基末端缺失一个或多个(例如，若干个)氨基酸的多肽；其中该片段具有脂肪酶活性。在一方面，片段包含SEQIDNO:3的氨基酸1至269的数目的至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％，但小于100％。宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包含本专利技术的多核苷酸的核酸构建体或表达载体转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。改进的特性：术语“改进的特性”意指与变体相关的与亲本相比得到改进的特征。这些改进的特性包括但不限于：稳定性，例如像热稳定性、在洗涤剂中的热稳定性、在洗涤剂中的稳定性；活性，例如像水解活性、在洗涤剂中的水解活性，底物特异性，污渍去除能力例如像脂质污渍去除能力和洗涤性能。成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。在一个方面，成熟多肽是SEQIDNO:2的1至269的氨基酸，其与SEQIDNO:3的1至269的氨基酸一致。成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有脂肪酶活性的成熟多肽的多核苷酸。在一个方面，成熟多肽编码序列是SEQIDNO:1的核苷酸292至1098。核酸构建体：术语“核酸构建体”意指单-链或双链的核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或以本来不存在于自然界中的方式被修饰成含有核酸的区段，或是合成的，该核酸分子包括一个或多个控制序列。可操作地连接：术语“可操作地连接”意指如下的构造，其中，控制序列相对于多核苷酸的编码序列安置在适当位置处，从而使得该控制序列指导该编码序列的表达。序列一致性：两个氨基酸序列之间或者两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列一致性”来描述。出于本专利技术的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件(TheEuropeanMolecularBiologyOpenSoftwareSuite)，赖斯(Rice)等人，2000，遗传学趋势(TrendsGenet.)16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的尼德尔曼-翁施(Needleman-Wunsch)算法(Needleman(尼德尔曼)和Wunsch(翁施)，1970，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列一致性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5，和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。尼德尔标注的“最长的一致性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比一致性，并且计算如下：(相同残基x100)/(比对的长度-在比对中的空位总数)出于本专利技术的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件，赖斯等人，2000，同上)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德尔曼-翁施算法(尼德尔曼和翁施，1970，同上)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列一致性。所使用的参数是空位开放罚分10本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于修饰脂肪酶的一个或多个特征的一种方法，该方法包括使肽与该脂肪酶结合的步骤，其中该肽与所述脂肪酶的前肽的至少一个主要脂肪酶接触区的氨基酸序列具有至少50％序列一致性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.27 IN 2612/CHE/20141.用于修饰脂肪酶的一个或多个特征的一种方法，该方法包括使肽与该脂肪酶结合的步骤，其中该肽与所述脂肪酶的前肽的至少一个主要脂肪酶接触区的氨基酸序列具有至少50％序列一致性。2.如权利要求1所述的方法，其中该主要脂肪酶接触区对应于SEQIDNO:2的氨基酸-57至-50、-40至-28、和-22至-15中的任一个。3.如权利要求1-2中任一项所述的方法，其中所述脂肪酶的前肽的至少一个主要脂肪酶接触区的氨基酸序列与SEQIDNO:2的序列一致性是至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％。4.如权利要求1-2中任一项所述的方法，其中该脂肪酶与SEQIDNO:2的氨基酸1至269具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至...

【专利技术属性】
技术研发人员：AV赖泽，VK巴蒂亚，K博尔奇，CI约恩森，B安德森，L鲍恩斯加德，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK