一种粒毛盘菌黑色素作为抗肾衰药物的用途制造技术

本发明专利技术公开了粒毛盘菌YM156胞内黑色素作为抗肾衰药物的用途，特征是菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌YM156的胞内黑色素在制备抗肾衰药物中的应用。药效学证明，粒毛盘菌YM156胞内黑色素LIM可显著降低小鼠的血清SCR、BUN、水平，升高TP和ALB含量，且呈一定的量效关系；且可提高其血清中SOD活性，降低MDA含量，减少炎性因子TNF‑α等水平，表现出明显的抗肾衰功能，无毒副作用，可用于制备抗肾衰药物，根据需要按药剂学的常规制备方法制成各类剂型，服用方便。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于粒毛盘菌黑色素在药物制备中的应用
，具体涉及菌种保藏编号为CCTCCNo:M2011054的粒毛盘菌的胞内黑色素(简称LIM)作为抗肾衰药物的用途。
技术介绍
黑色素一般存在动植物和微生物体内，它不仅是一类光保护剂、抗辐射剂、鳌合剂、生物抗氧化剂和免疫促进剂,具有抗蛇毒、抗癌、抑制艾滋病毒复制、治疗帕金森症等作用,因此黑色素在医药、化妆品、食品等方面有着广泛的应用前景。如中国《食品科学》(2009,30(17):185-189)、《中国食品添加剂》(2007(2):116-119)及《中国食品学报》(2012,12(10):62-66)分别介绍了粒毛盘菌黑色素、葡萄皮色素以及乌贼墨黑色素作为抗氧化物质的用途。《微生物学通报》(2014,41(2):334-343)介绍了细菌黑色素具有抗紫外辐射、清除自由基等功能，对于生物的生长发育虽非必需，却能极大提高生物体的生存竞争能力。据《公共科学图书馆》(PublicLibraryofScience)(2013,8(2):181-182)文献报道，慢性肾功能衰竭与肾组织的氧化应激反应有关。中国专利号ZL201110072469.2公开了本专利技术人课题组保藏日期2011年3月2日保藏在位于武汉市武昌珞珈山武汉大学生命科学学院的中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)的一种菌种保藏编号为CCTCCNo:M2011054的粒毛盘菌(Lachnum)。该粒毛盘菌属(Lachnum)隶属于柔膜菌目(Helotiales)晶杯菌科(Hyaloscyphaceae)，是一类腐生性真菌，其深层发酵可产生大量的黑色素。目前国内外未见有公开文献提及将粒毛盘菌黑色素作为制备抗肾衰药物的应用方面的报道。目前国内外报道的关于慢性肾衰药物的研究主要是中药，未见对粒毛盘菌黑色素作为慢性肾衰治疗药物方面研究的报道。据《现代中西医结合杂志》(2014,23(2):217-220)报道，近年来慢性肾衰的发病率呈逐年上升趋势，增长速度加快，趋势十分严峻。挖掘与开发天然、有效的抗肾衰药物，对预防和治疗慢性肾衰具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种菌种保藏编号为CCTCCNo:M2011054的粒毛盘菌的胞内黑色素(简称LIM)作为制备抗肾衰药物的用途。本专利技术的粒毛盘菌胞内黑色素(简称LIM)在制备抗肾衰药物中的用途，其特征在于：所述粒毛盘菌胞内黑色素，是将菌种保藏编号为CCTCCNo:M2011054的粒毛盘菌接种于100L发酵罐，培养基成分为：酪氨酸浓度为1.0mmol/L，铜离子浓度为1.1mmol/L，葡萄糖质量为25.0g/L，酵母膏5.0g/L，蛋白胨5.0g/L，pH8.0，培养温度为27℃，装料系数体积比为0.7，接种量为5％(v/v)，通气量为1.0L/min，搅拌转速为180r/min，发酵12d后获得发酵液；将发酵液抽滤，收集菌丝体，50℃烘干，按菌丝体的质量(g)与浓度为1mol/L的氢氧化钠(mL)比为1:100混匀，室温静置12h，抽滤得浸提液；向上述浸提液加入1mol/LHCl调节pH为1～2，静置12h后将上述悬浮液离心，所得到的沉淀经去离子水洗涤至pH为7后，真空冷冻干燥，即得黑色素粗品；再将该黑色素粗品加入7mol/LHCl于100℃酸解2h，除去与黑色素结合的蛋白质及碳水化合物，酸解后抽滤得到的沉淀经双蒸水洗涤至上清液pH值为7时重新溶于1mol/LNH3·H2O溶液，采用旋转蒸发仪蒸去NH3至溶液pH为中性后，依次经乙酸乙酯、氯仿、无水乙醇萃取，除去脂类物质，萃取后旋转蒸发除去有机相，水相调pH值为2，以4500r/min离心15min，分离得到的沉淀经去离子水反复洗涤至上清液Cl–定性检测为阴性后，真空冷冻干燥，得到粒毛盘菌胞内黑色素LIM；通过将其对腺嘌呤诱导的慢性肾衰小鼠的药理实验，确立粒毛盘菌胞内黑色素LIM具有抗慢性肾衰作用；从而按药剂学的常规制备方法，将有效量的该粒毛盘菌胞内黑色素LIM与药用辅料混合加工制备成口服片剂或胶囊服用。本专利技术的有益效果体现在：经药效学证明，该粒毛盘菌胞内黑色素LIM可显著降低肾衰小鼠血清肌酐(SCR)、尿素氮水平(BUN)，增加血清总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)含量，提高肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)的水平，降低丙二醛(MDA)含量以及降低炎性因子：肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的表达以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平，改善肾衰患者肾组织形态的病理改变，且呈一定的量效关系。粒毛盘菌胞内黑色素LIM表现出明显的抗肾衰功能，且无毒副作用，因此可以用于制备抗肾衰药物。可根据需要按药剂学的常规制备方法，制成各类剂型，服用方便。附图说明图1为小鼠肾脏组织病理学检查照片(400×)。具体实施方式实施例1：(一)粒毛盘菌胞内黑色素(LIM)的制备将菌种保藏编号为CCTCCNo:M2011054的粒毛盘菌接种于100L发酵罐，培养基成分为：酪氨酸浓度为1.0mmol/L，铜离子浓度为1.1mmol/L，葡萄糖质量为25.0g/L，酵母膏5.0g/L，蛋白胨5.0g/L，pH8.0，培养温度为27℃，装料系数体积比为0.7，接种量为5％(v/v)，通气量为1.0L/min，搅拌转速为180r/min，发酵12d后获得发酵液；将发酵液抽滤，收集菌丝体，50℃烘干，按菌丝体的质量(g)与浓度为1mol/L的氢氧化钠(mL)比为1:100混匀，室温静置12h，抽滤得浸提液；向上述浸提液加入1mol/LHCl调节pH为1～2，静置12h后将上述悬浮液离心，所得到的沉淀经去离子水洗涤至pH为7后，真空冷冻干燥，即得黑色素粗品；再将该黑色素粗品加入7mol/LHCl后于100℃酸解2h，除去与黑色素结合的蛋白质及碳水化合物。酸解后，抽滤得沉淀，沉淀经双蒸水洗涤至上清液pH值为7时重新溶于1mol/LNH3·H2O溶液，采用旋转蒸发仪蒸去NH3至溶液pH为中性后，依次经乙酸乙酯、氯仿、无水乙醇萃取，以除去脂类物质，萃取后旋转蒸发除去有机相，水相调pH值为2，以4500r/min离心15min，分离得到的沉淀经去离子水反复洗涤至上清液Cl–定性检测为阴性后，真空冷冻干燥，即得到粒毛盘菌胞内黑色素LIM。(二)粒毛盘菌胞内黑色素LIM的抗肾衰作用药理实验动物：昆明小鼠100只，体重20±2g，生长环境：温度23±2℃，湿度55±5％，12h的光照和12h的黑暗交替饲养。试剂盒：血肌酐(SCR)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)，为南京建成科技有限公司产品。阳性药物：海昆肾喜胶囊(HC)，为辉南长龙生化药业股份有限公司产品。方法：把100只昆明小鼠适应性喂养7d后，随机取10只本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种粒毛盘菌YM156胞内黑色素作为制备抗肾衰药物中的用途，其特征在于：将菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌YM156的胞内黑色素用于制备抗肾衰药物。

【技术特征摘要】
1.一种粒毛盘菌YM156胞内黑色素作为制备抗肾衰药物中的用途，其特征在于：将菌种保藏编号为CCTCCNo:M2011054的粒毛盘菌YM156的胞内黑色素用于制备抗肾衰药物。2...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶明，李盛兰，石芳，杨柳青，李井雷，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34