The invention belongs to the field of analytical chemistry, in particular to a simple method for detecting Aspergillus niger toxin. First of all, the aptamer was immobilized in the 96 hole plate, and the probe was immobilized on the 96 hole plate by the DNA hybridization. When there are objects of patulin, patulin and patulin have aptamer recognition function, and the transformation of enzyme modified aptamer complementary sequence probe probe solution and then take off, off to the centrifuge tube and adding sucrose, invertase in the probe under the action of sucrose into glucose for the detection of blood glucose meter, instrument use, realize the determination of patulin.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分析化学领域,具体涉及一种简便检测棒曲霉毒素的方法。
技术介绍
发展便捷、低廉的测定食源性致病菌的方法对于食品安全具有重要的意义。已经报道可以利用家庭用血糖仪测定一些非葡萄糖目标物。棒曲霉毒素是由青霉属、曲霉属、丝衣霉属产生的真菌代谢毒素,对人体有一系列急性毒性和致畸致癌等慢性毒性。研究表明棒曲霉素具有引起动物抽搐、肺、肝部出血、肾脏损害、肠道出血等急性毒性,并具有神经毒性、免疫毒性、基因毒性、致畸、致癌等慢性毒性[MoakeMM,Padilla-ZakourOI,WoroboRW.Comprehensivereviewofpatulincontrolmethodsinfoods.ComprRevFoodSciF,2005,4(1):8-21]。目前常用于检测棒曲霉素的方法主要有化学分析法如薄层层析法、高效液相色谱法、气相色谱法、色谱联用技术[ScottPM,LawrenceJW,VanWalbeekW.Detectionofmycotoxinsbythin-layerchromatography:applicationtoscreeningoffungalextracts.ApplMicrobiol,1970,20(5):839-42;ShephardGS,LeggottNL.Chromatographicdeterminationofthemycotoxinpatulininfruitandfruitjuices.JChrom
【技术保护点】
一种简便检测棒曲霉毒素的方法,包括以下步骤:(1)将100μL 5.0×10‑7mol/L的DNA1加入到链霉亲和素修饰的微孔板中,37℃条件下在摇床上振荡反应30分钟,弃去未反应的溶液,然后用100μL pH 7.4的Tris‑HCl缓冲液清洗三次;(2)将100μL含10mg NHS的水溶液和100μL含20mg EDC的水溶液混合,然后再加入500μL的1mg/mL的蔗糖转化酶溶液和100μL 5.0×10‑7mol/L的DNA2溶液;将所得的溶液混合,在室温下搅拌3h,得转化酶修饰的适体互补序列探针,4℃条件下保存备用;(3)将100μL的探针溶液加入到适体固定的微孔中,37℃条件下振荡反应2小时,将未反应的溶液除去,并用100μL pH 7.4的Tris‑HCl缓冲液清洗三次;然后,将含棒曲霉毒素的溶液100μL加入到微孔中,通过棒曲霉毒素与其适体的特异性结合把探针释放到溶液中,吸取微孔中的溶液于另外一个微孔中,并加入100μL 1.0mol/L的蔗糖溶液,37℃条件下振荡反应2小时;最后,取2μL的溶液利用血糖仪进行检测;优选的,所述的DNA1的部分序列为:5′‑bioti ...
【技术特征摘要】
1.一种简便检测棒曲霉毒素的方法,包括以下步骤:
(1)将100μL5.0×10-7mol/L的DNA1加入到链霉亲和素修饰的微孔板中,37℃条件下在
摇床上振荡反应30分钟,弃去未反应的溶液,然后用100μLpH7.4的Tris-HCl缓冲液清洗
三次;
(2)将100μL含10mgNHS的水溶液和100μL含20mgEDC的水溶液混合,然后再加入500μL
的1mg/mL的蔗糖转化酶溶液和100μL5.0×10-7mol/L的DNA2溶液;将所得的溶液混合,在室
温下搅拌3h,得转化酶修饰的适体互补序列探针,4℃条件下保存备用;
(3)将100μL的探针溶液加入到适体固定的微孔中,37℃条件下振荡反应2小时,将未反
应的溶液除去,并用100μLpH7.4的Tris-HCl缓冲液清洗三次;然后,将含棒曲霉毒素的溶
液100μL加入到微孔中,通过棒曲霉毒素与其适体的特异性结合把探针释放到溶液中,吸取
微孔中的溶液于另外一个微孔中,并加入100μL1.0mol/L的蔗糖溶液,37℃条件下振荡反
应2小时;最后,取2μL的溶液利用血糖仪进行检测;
优选的,所述的DNA1的部分序列为:5′-biotin...
【专利技术属性】
技术研发人员:混旭,钟华,王周平,
申请(专利权)人:青岛科技大学,
类型:发明
国别省市:山东;37
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。