黄芪在制备促进IFN-γ分泌的药物的用途制造技术

本发明专利技术涉及黄芪在制备促进IFN-γ分泌的药物的用途，所述的黄芪的制剂为：水煎液或含有黄芪甲苷或/和黄芪多糖的制剂。

Application of astragalus root in preparing medicine for promoting IFN- gamma secretion

The invention relates to the application of Astragalus in the preparation of a medicament for promoting the secretion of IFN- gamma. The preparation of the Astragalus is a decoction or a preparation containing astragalus glucoside or / and Astragalus polysaccharide.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及黄芪的新用途，特别涉及黄芪在制备具有促进IFN-γ分泌的药物中的应用。
技术介绍
IFN-γ是一种具有高度生物学活性的糖蛋白，具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多方面的功能，使许多常规药物治疗无效的疾病或体质弱、免疫功能低下的病人使用IFN-γ治疗后，收到良好的治疗效果，越来越受到人们的广泛关注。由于外源性基因工程产品的半衰期短，要达到治疗水平必须持续大剂量注射，由此会产生一系列的毒副作用[14]，直接利用外源性的IFN-γ有很大的风险，而且进入血液中的IFN-γ很难通过各种屏障作用到达组织细胞。因此增加机体内源性IFN-γ的含量具有更重要的意义。然而IFN-γ是诱生蛋白，正常细胞一般不自发产生，只具有合成的潜能。有报道指出，电针刺激后被认为不合成IFN-γ的神经细胞内IFN-γ样免疫阳性反应物质的表达显著提高。Wei在老龄小鼠脑MVECs内检测到了IFN-γmRNA的表达。这些结果为我们的研究提供了试验依据。但至今未见中药激活RIMVECs分泌IFN-γ的报道。因此，研究诱导具有合成IFN-γ潜能的机体细胞产生IFN-γ的方法、寻找高效的中药刺激物、尤其探寻能使MVECs分泌IFN-γ的方法和药物，对相关疾病的防治具有十分重大的意义。
技术实现思路
本专利技术涉及黄芪的新用途，特别涉及黄芪在制备具有促进IFN-γ分泌的药物中的应用。本专利技术目的是通过如下技术方案实现的：黄芪在制备促进IFN-γ分泌的药物的用途，所述的黄芪的制剂为：水煎液或含有黄芪甲苷或/和黄芪多糖的制剂黄芩水煎液或含有黄芪甲苷或/和黄芪多糖的制剂。所述的水煎液的制备方法为：加入黄芪重量8-10倍量的水，浸泡，煎煮0.5～2h，过滤既得。加入黄芪重量10倍量的水，浸泡，煎煮1h，过滤，除菌既得。所述的促进IFN-γ分泌诱导是指通过所述的促进IFN-γ分泌诱导是指γ诱导RIMVECs产生IFN-γ。本专利技术的有益效果为：1、通过黄芪诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IFN-γ的研究发现：当黄芪药液浓度为25mg/L～3200mg/L时产生增殖效应，增殖率从30.81％～49.53％，与对照组相比，浓度为25mg/L和3200mg/L时增殖效果显著(P<0.05)，当浓度在400mg/L时增殖效果最佳。2、通过黄芪甲苷和黄芩多糖诱导RIMVECs分泌IFN-γ的研究发现：黄芪甲苷25μg/mL组和黄芪多糖25μg/mL组表现一致，在6h、12h、24h时诱导RIMVECs分泌IFN-γ量与空白对照组相比较均有所增加，但6h时诱导量差异不显著(P>0.05)，12h时诱导量差异显著(P<0.05)，24h时差异极显著(P<0.01)；黄芪甲苷50μg/mL组与对照组比较在6h和12h检测时能显著诱导RIMVECs分泌IFN-γ(P<0.05)，在24h能极显著诱导RIMVECs分泌IFN-γ(P<0.01)；黄芪多糖50μg/mL组与对照组比较6h和24h检测时能显著诱导RIMVECs分泌IFN-γ(P<0.05)，在12h能极显著诱导RIMVECs分泌IFN-γ(P<0.01)。附图说明图1为不同浓度黄芪药液对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IFN-γ的影响(n＝5)；图2图2黄芪甲苷对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IFN-γ的影响(n＝5)；图3为黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IFN-γ的影响(n＝5)；具体实施方式以下实验例和实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实验例1：黄芪诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IFN-γ的研究1、黄芪水煎液的制备：采用实施例4制成的样品。2、细胞分组与处理MTT试验：试验分为试验组(黄芪水煎液处理RIMVECs，共设11个浓度梯度，各剂量段设6个平行孔)和对照组(未经处理的RIMVECs，设6个平行孔)。细胞孔中加入含有黄芪药液的的DMEM维持培养液，使其终浓度依次为25.6、12.8、6.4、3.2、1.6g/L、800、400、200、100、50、25mg/L，对照组加入不含中药药液的维持培养基。IFN-γ检测：取生长至汇合状态的第二代RIMVECs，0.05％胰蛋白酶-0.005％EDTA溶液消化吹打脱壁，调整密度为2×105cells/mL，接种于96孔板中，静置培养至80％汇合，将培养基更换为DMEM维持培养基，孵育过夜，吸弃维持培养基，加入含有黄芪药液的DMEM维持培养液，使其终浓度依次为30、6、1、0.1mg/mL，空白对照组加入不含黄芪药液的维持培养基，每组五孔重复。孵育6h、12h、24h后检测IFN-γ。3、MTT法测定细胞增殖活性取经不同浓度黄芪处理24h的细胞孔，加入5mg/mL的MTT20μL，继续培养4h，各孔加DMSO100μL，室温避光震荡10min，使结晶充分溶解后于酶标仪上测定490nm处每孔的吸光度值。4、采样将细胞置于37℃、5％CO2培养箱中继续培养，12h时采集细胞上清液。采集的样品经3000r/min离心10min，将离心后的细胞上清液无菌分装于0.6mL的离心管中，置于-80℃保存备用。5、IFN-γ的ELISA检测IFN-γ的测定(双抗夹心ELISA法)严格按照试剂盒说明书进行操作，步骤简述如下：(1)将所有样品、标准品溶液和酶标板取出，恢复至室温后，每孔加入100μL样品或者标准品溶液，其中每一浓度的标准品溶液做2孔重复，最后另取2孔做空白显色孔，不加任何样品或标准品溶液，加完后用封板胶纸封住酶标板，37℃温箱孵育90min。(2)甩去酶标板内液体，用洗涤液浸洗4次。(3)每孔加入100μL37℃预热的生物素化抗体工作液，空白显色对照孔不加液体，轻敲板壁混匀，用封板胶纸封住酶标板，37℃温箱孵育60min。(4)甩去酶标板内液体，用洗涤液浸洗4次。(5)每孔加入100μL37℃预热的酶结合物工作液，空白显色对照孔不加液体，轻敲板壁混匀，用封板胶纸封住酶标板，37℃温箱孵育30min。(6)甩去酶标板内液体，用洗涤液浸洗4次。(7)每孔加入100μL37℃预热的显色剂，孔内液体立即转为蓝色，37℃避光反应20min。(8)每孔本文档来自技高网...

【技术保护点】
黄芪在制备促进IFN‑γ分泌的药物的用途，其特征在于：所述的黄芪的制剂为：水煎液或含有黄芪甲苷或/和黄芪多糖的制剂。

【技术特征摘要】
1.黄芪在制备促进IFN-γ分泌的药物的用途，其特征在于：所述的
黄芪的制剂为：水煎液或含有黄芪甲苷或/和黄芪多糖的制剂。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的水煎液的制备方
法为：加入黄芪重量8-10倍量的水，浸泡，煎煮0.5～2h...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡格，穆祥，张磊，董虹，张涛，
申请(专利权)人：北京农学院，
类型：发明
国别省市：北京;11