lncRNA‑LOC100507195在菌阴肺结核诊断中的应用制造技术

本发明专利技术公开了lncRNA‑LOC100507195在菌阴肺结核诊断中的应用。本发明专利技术发现MTB感染MΦ后导致LOC100507195表达上调；对30例菌阴肺结核患者PBMC的检测结果则显示，其LOC100507195的表达水平显著低于健康志愿者；这可能是LOC100507195作为巨噬细胞抗结核的保护因子，其表达下调，导致机体对结核易感。受试者工作特征曲线分析结果表明，LOC100507195有望成为菌阴肺结核诊断新靶点。通过检测LOC100507195的表达水平，能够有效区分未感染人群与菌阴肺结核患者。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术具体涉及lncRNA-LOC100507195在菌阴肺结核诊断中的应用。
技术介绍
结核病至今仍是全球范围内感染率最高的传染病，防控形势十分严峻。快速、敏感诊断是提高治疗效果、有效控制结核病传播的关键。在全国肺结核患者中，菌阴肺结核患者占活动性肺结核患者的60％～70％，且多种其他肺部疾病的临床症状和影像学特征难以与结核病相区别。对菌阴肺结核有效诊断的方法缺乏，往往造成患者诊断延误或误诊。我国虽已制定诊断的若干标准，但在临床应用中仍存在许多困惑，并未解决有效诊断菌阴肺结核这一难题。因此，寻找菌阴肺结核诊断新标识、开创新诊断方法已成为当务之急！现有肺结核诊断方法主要为痰结核菌检查、结核菌素试验、特异性抗体测定、影像学检查等方法。痰结核菌检查耗时长，假阴性高；结核菌素试验假阳性高，不容易区分接种卡介苗人群和结核病人群；影像学检查难以区分肺结核病和其他肺部疾病。而找到核酸作为诊断标志物，使用PCR技术作为诊断方法，具有快速、敏感等优点，并且价格比特异性抗体便宜，制备和检测操作也方便。因此，寻找可以作为菌阴肺结核诊断的核酸标志物，意义非凡。结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)属于胞内寄生菌，主要寄生于巨噬细胞(macrophage)。结核分枝杆菌以气溶胶的形式，经人体呼吸道进入肺组织，被肺泡巨噬细胞吞噬(AM)，但MTB通过相应的机制逃避机体免疫系统的清除，MTB不会被AM完全清除。因此MTB能在巨噬细胞胞内生长繁殖，并借助巨噬细胞的迁徙，继续感染其他未被感染的巨噬细胞。LncRNA(longnoncodingRNA)是一类长度大于200nt的不编码蛋白的RNA，lncRNA能在表观遗传上、转录及转录后水平上调控基因表达，其功能广泛，参与调控机体的各种生命活动。已经有文献证明，lncRNA参与机体免疫的调控。目前已经有文献报道，lncRNA可以作为癌症诊断标志物。但尚未有以lncRNA作为诊断标志物检测肺结核的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种全新的lncRNA诊断标志物LOC100507195，用于快速诊断菌阴肺结核，且价格比目前的诊断方法低廉。本专利技术所采取的技术方案是：lncRNA核酸标志物在结核诊断中的应用，该lncRNA核酸标志物的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示，记为LOC100507195。优选的，所述结核诊断为肺结核诊断。优选的，所述肺结核诊断为菌阴肺结核诊断。一种菌阴肺结核诊断试剂盒，该试剂盒含有能够对lncRNA-LOC100507195的表达量进行定量的试剂。能够对lncRNA-LOC100507195的表达量进行定量检测的试剂在制备肺结核诊断试剂盒中的应用。优选的，所述定量检测的试剂含有能够实时荧光定量检测lncRNA-LOC100507195的引物序列。优选的，所述肺结核为菌阴肺结核。本专利技术的有益效果是：本专利技术通过前期的批量筛选，从中筛选获得的LOC100507195作为菌阴肺结核的诊断标志物，通过检测LOC100507195的表达水平，能够有效区分未感染人群与菌阴肺结核患者。本专利技术发现：MTB感染巨噬细胞后，引起巨噬细胞的各种反应，其中包括基因的转录和蛋白的合成，lncRNA的表达也受到调控。MTB感染巨噬细胞后，能引起LOC100507195的表达上调，说明LOC100507195在MTB感染巨噬细胞的过程中发挥着相应的作用。用荧光定量PCR(qPCR)检测菌阴肺结核病人和健康正常人的PBMC，相对于健康正常人的PBMC，LOC100507195在菌阴肺结核病人PBMC表达却是下调，并且两者有统计学差异，这可能是LOC100507195作为巨噬细胞抗结核的保护因子，其表达下调，导致机体对结核易感。因此LOC100507195可以作为诊断菌阴肺结核病人和健康正常人的诊断标志物。附图说明图1为实时荧光定量PCR检测MTB感染的MΦ中LOC100507195的表达水平；图2为实时荧光定量PCR检测菌阴肺结核患者PBMC中lncRNA-LOC100507195的表达；图3为ROC曲线分析。具体实施方式本专利技术发现：①MTB感染MΦ后导致LOC100507195表达上调；②对30例菌阴肺结核患者PBMC的检测结果则显示，其LOC100507195的表达水平显著低于健康志愿者；受试者工作特征曲线(receiveroperatingcharacteristiccurve,简称ROC曲线)分析结果表明，LOC100507195有望成为菌阴肺结核诊断新靶点。下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的说明，但并不局限于此。实施例1感染MTB的MΦ中LOC100507195的表达上调分离健康志愿者的PBMC，免疫磁珠分选CD14+单核细胞，用GM-CSF诱导单核细胞向MΦ分化，将所得的MΦ感染MTB。72h后，实时荧光定量PCR检测MΦ中LOC100507195的表达水平。检测结果如图1所示，从中可以看出，MTB感染后的MΦ的LOC100507195的表达水平明显上调，说明MTB感染促进了LOC100507195的表达。实施例2实时荧光定量PCR检测菌阴肺结核患者PBMC中LOC100507195的表达情况提取30例菌阴肺结核患者与32例健康志愿者PBMC的RNA，实时荧光定量PCR检测lncRNA-LOC100507195的表达。检测结果如图2所示，从中可以看出，菌阴肺结核患者PBMC中LOC100507195表达呈现显著下调趋势(P<0.001)。实施例3LOC100507195作为菌阴肺结核诊断的新靶点本研究发现，与健康人相比，LOC100507195在结核患者PBMC中表达呈现极显著下调趋势(P<0.001)。为了了解LOC100507195在PBMC的表达变化是否可以用于区分健康人与结核患者，我们使用ROC曲线分析LOC100507195在PBMC中的表达变化是否用于结核病的诊断。根据LOC100507195在健康人以及结核患者PBMC中的相对表达量，采用统计分析软件，建立横坐标为特异性、纵坐标为灵敏度的ROC曲线，见图3。结果显示，ROC曲线下面积AUC(A)＝0.8594，说明LOC100507195用于结核病人诊断具有较高的准确性(图3)。ROC曲线中A值意义说明：在A>0.5的情况下，A越接近于1，说明诊断效果越好。A在0.5～0.7时有较低准确性，在0.7～0.9时有一定准确性，在0.9以上时有较高准确性。对ROC曲线(累积频数分布)进行分析，结果见表1。表1ROC曲线分析结果(以上省略号表示原始数据太多，表中仅列出关键数据)。对表1结果分析发现：当LOC100507195的转录水平Cut-off值(域值)取7.368时，约登指数(Youden’sindx,YI)最大(YI＝62.5)，此时检测灵敏度可以达到81.25％，而特异性达到81.25％。所以，将LOC100507195用于结核病的诊断是可行的，对于提高结核病的诊断率具有重要意义。综上所述：lncRNA-LOC100507195可作为菌阴肺结核诊断新靶点。上述实施例为本专利技术较佳的实施方式，但本专利技术的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本文档来自技高网...

【技术保护点】
lncRNA核酸标志物在结核诊断中的应用，其特征在于：该lncRNA核酸标志物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，记为LOC100507195。

【技术特征摘要】
2016.03.16 CN 20161015102461.lncRNA核酸标志物在结核诊断中的应用，其特征在于：该lncRNA核酸标志物的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示，记为LOC100507195。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述结核诊断为肺结核诊断。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述肺结核诊断为菌阴肺结核诊断。4.一种菌阴肺...

【专利技术属性】
技术研发人员：马骊，杨晓帆，温茜，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东;44