一种紫花苜蓿总黄酮提取物的制备方法技术

本发明专利技术提供一种由紫花苜蓿制备紫花苜蓿总黄酮提取物的方法。所述方法包括以下步骤：1)材料处理，2)初提：经乙醇热回流后，收集滤液，进行减压蒸馏，回收溶剂，得乙醇浸膏，3)浸膏处理：浸膏用蒸馏水进行复溶水沉，离心后取上清液在室温下进行石油醚萃取，取水层。4)纯化：调节水层中总黄酮的浓度和pH，过大孔树脂，先用蒸馏水冲洗无色，然后用体积比为50‑60％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压蒸馏回收乙醇，得浸膏，将浸膏干燥，得到紫花苜蓿总黄酮提取物。本发明专利技术的制备方法主要采用水和乙醇提取，制备方法操作简单，产品含量较高，易于产业化，可以大大改善了紫花苜蓿总黄酮的提取现状。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种由紫花苜蓿制备紫花苜蓿总黄酮提取物的方法。
技术介绍
紫花苜蓿，又名紫苜蓿、苜蓿、南苜蓿、金花菜、光风草、草头等，为豆科(Leguminosae)蝶形花亚科(PapilionataeTaub)车轴草族(Trib.trifolieaeBronn)苜蓿属(MedicagaL)的多年生草本植物，该属约有70余种，分布于地中海区域、西南亚、中亚和非洲。紫花苜蓿在我国分布非常广泛，产量高，适应性强、营养极为丰富，主要在畜牧业作为饲料应用，享有“牧草之王”的美誉，其作为良好的天然植物资源备受重视。民间作为传统的草药用于治疗细菌性痢疾、肺热咳嗽、黄疸、膀胱结石等症，其中黄酮类化合物是主要功效成分类群。黄酮类化合物((Flavonoids))是一类植物次级代谢产物，广泛分布植物中。黄酮被证实具有许多生理活性如抗氧化性，抗癌活性，肝保护作用，雌激素作用等。紫花苜蓿属植物的黄酮类化合物成分主要有以下几种：黄酮及其苷类、黄酮醇及其苷类、异黄酮类、异黄烷、查耳酮、二氢黄酮和二氢异黄酮等。其糖基部分大多为葡萄糖或葡萄糖醛酸，也有半乳糖和鼠李糖的报道，还有的阿魏酰化或咖啡酰化物。苜蓿黄酮是苜蓿植物提取物的主要成分之一，其生物功效是多方面的，能有效去除人体自由基，具有轻度雌激素样的作用，在一定范围内增加机体的繁殖力和免疫力，同时苜蓿黄酮可以作为功能性食品的添加剂，动物饲料的添加剂，因此，苜蓿黄酮提取物在食品添加剂、天然药物、功能性食品等领域前景广阔。现有提取紫花苜蓿总黄酮的报道尚不多见，主要侧重于紫花苜蓿黄酮的含量测定。如徐文燕发表的“紫花苜蓿不同品种和不同季节黄酮量的比较研究”，该文献采用苜蓿素为对照品，对不同品种的紫花苜蓿在不同采收期的黄酮量进行测定比较。文献“苜蓿黄酮的分离及其生物转化研究进展”中提及了苜蓿黄酮的分离纯化方法有树脂吸附法、溶剂萃取法及逆流色谱等手段，但未对其进行进一步具体叙述。专利CN201110117883.0公开了一种紫花苜蓿总黄酮的制备方法，该工艺步骤包括：将紫花苜蓿药材粉碎，采用乙醇液回流提取1～3次，合并提取液经超滤膜滤过，收集滤过液，调碱后再经纳滤膜浓缩，浓缩液调酸沉淀，滤出沉淀，用热水分散，放冷后用石油醚萃取1～3次，除去脂溶性杂质，萃余液蒸干，再采用乙醇回流溶解结晶，干燥即得紫花苜蓿总黄酮。但是该方法需要使用超滤膜进行过滤和浓缩，工艺复杂，生产成本较高，并且根据文献所述的方法制得的黄酮提取物纯度低，与文献声称的结果不符。专利CN201110135630.6涉及一种从紫花苜蓿中同时提取总皂苷和总黄酮的方法，该方法包括以下步骤：(1)将紫花苜蓿切段，加入碳酸钠，再加入水，在80～100℃温度下提取数次，合并滤液；(2)将滤液减压浓缩后，加盐酸调节pH值至4～6，得到酸性溶液；(3)将酸性溶液放入液液连续萃取塔内，并加入正丁醇进行萃取，得到萃取液；(4)萃取液减压浓缩成稠膏，该稠膏经真空减压干燥后粉碎，过筛，即得紫花苜蓿提取物。然而该方法所用有机溶剂较多，容易对环境造成污染，并且有机溶剂容易残留在产物中，不利用进一步的应用。进一步地，该方法所得到的黄酮提取物纯度低。据研究，适时收获的苜蓿茎叶干物质中，黄酮含量约为0.53％，而沿用传统的工艺提取苜蓿黄酮时，得率少，纯化困难，研究报道所得紫花苜蓿提取物中黄酮含量仅为13.69％，限制了苜蓿黄酮在生产中的应用和其功能的进一步研究。
技术实现思路
因此，本专利技术的目的是提供一种由紫花苜蓿制备紫花苜蓿总黄酮提取物的方法。本专利技术的专利技术人发现，采用醇提水沉方法，可以实现对紫花苜蓿中总黄酮最大程度的提取，然后通过大孔树脂可以实现对黄酮类化合物的选择性分离，并经过浓缩、干燥处理，得到总黄酮含量大于18％的紫花苜蓿总黄酮提取物。本专利技术提供的方法工艺简洁，操作简单，不需要使用太多的有机试剂，适合工业化应用。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的。本专利技术提供一种由紫花苜蓿制备紫花苜蓿总黄酮提取物的方法，所述方法包括以下步骤：1)材料处理：取紫花苜蓿地上部分，去杂，烘干，粉碎，过筛，得到紫花苜蓿粉；2)初提：将步骤1)得到的紫花苜蓿粉使用乙醇溶液热回流，收集提取液，减压蒸馏以回收乙醇，得到浸膏；3)浸膏处理：将步骤2)得到的浸膏用蒸馏水进行复溶水沉，离心后取上清液，在室温下，使用石油醚对上清液进行萃取，除去石油醚层，收集水层；4)纯化：调节步骤3)得到的水层中总黄酮的浓度和pH值，然后过大孔树脂柱，所述大孔树脂柱先用蒸馏水冲洗至无色，然后用体积比为50-60％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压蒸馏以回收乙醇，得到浸膏，将浸膏干燥，得到紫花苜蓿总黄酮提取物。优选地，在所述步骤1)中：所述烘干在35℃-65℃下进行，优选地，所述烘干在65℃下进行；优选地，所述烘干进行12-48小时，更优选地进行24小时；优选地，烘干后所述紫花苜蓿中含有的水分小于6wt％；优选地，所述筛为40目筛，更优选地，所述40目筛的筛孔尺寸为425μm。优选地，所述步骤2)是通过包括下述步骤的方法进行的：将步骤1)得到的紫花苜蓿粉使用乙醇溶液热回流提取2-4次，得到提取液，将所述提取液合并，减压蒸馏以回收乙醇至无醇味，得到比重为1.1～1.3的浸膏。优选地，在所述步骤2)中，所述乙醇溶液的体积分数为50％-70％；优选地，所述紫花苜蓿粉和所述乙醇溶液的料液比为1:6-10(g：mL)，更优选地为1:7-8(g：mL)；优选地，所述步骤2)在60℃-80℃的温度下提取3次，每次提取3-5小时；优选地，所述减压蒸馏在65℃和-0.1MPa的条件下进行。优选地，所述步骤3)是通过包括下述步骤的方法进行的：在4℃下，将步骤2)得到的浸膏加入蒸馏水混合均匀，静置10-24小时后，离心取上清液，弃沉淀；将得到的上清液浓缩至比重为1.1～1.3，然后在室温下，按照体积比1:1-3加入石油醚萃取1-3次，收集水层。优选地，在所述步骤3)中，所述浸膏与蒸馏水的体积比为1:3-10，更优选地为1:5；优选地，所述静置时间为12小时；优选地，所述离心条件为在3000r/min下进行10分钟；优选地，在使用石油醚萃取后，收集石油醚层并回收石油醚；更优选地，所述回收在45℃，-0.1MPa的条件下进行；优选地，用于萃取的石油醚的温度为30～60℃。优选地，所述步骤4)是通过包括下述步骤的方法进行的：将得到的水层用3-6倍体积的蒸馏水稀释，调节pH值为4，然后过大孔树脂，上样速度为2BV/h，先用2-6BV的蒸馏水冲洗至无色，然后用2-6BV的50-60％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压蒸馏以回收乙醇，得浸膏；将得到的浸膏减压干燥、喷雾干燥或冷冻干燥，得到紫花苜蓿总黄酮提取物。优选地，在所述步骤4)中，所述树脂为苯乙烯型大孔树脂，优选为D101、DM-130、AB-8或HPD100；优选地，所述水洗或醇洗的速度为2BV/h；优选地，所述减压蒸馏在65℃和-0.1MPa的条件下进行。优选地，所述浸膏比重为1.1～1.3。本专利技术方法采用醇提水沉的方法，尽可能将苜蓿中黄酮类物质提取出来，实现了对紫花苜蓿中总黄酮最大程度的提取，从而提高了粗提物中黄酮的得率，然后通过适合分离黄酮类化合物的大孔树本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种由紫花苜蓿制备紫花苜蓿总黄酮提取物的方法，所述方法包括以下步骤：1)材料处理：取紫花苜蓿地上部分，去杂，烘干，粉碎，过筛，得到紫花苜蓿粉；2)初提：将步骤1)得到的紫花苜蓿粉使用乙醇溶液热回流，收集提取液，减压蒸馏以回收乙醇，得到浸膏；3)浸膏处理：将步骤2)得到的浸膏用蒸馏水进行复溶水沉，离心后取上清液，在室温下，使用石油醚对上清液进行萃取，除去石油醚层，收集水层；4)纯化：调节步骤3)得到的水层中总黄酮的浓度和pH值，然后过大孔树脂柱，所述大孔树脂柱先用蒸馏水冲洗至无色，然后用体积比为50‑60％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压蒸馏以回收乙醇，得到浸膏，将浸膏干燥，得到紫花苜蓿总黄酮提取物。

【技术特征摘要】
1.一种由紫花苜蓿制备紫花苜蓿总黄酮提取物的方法，所述方法包括以下步骤：1)材料处理：取紫花苜蓿地上部分，去杂，烘干，粉碎，过筛，得到紫花苜蓿粉；2)初提：将步骤1)得到的紫花苜蓿粉使用乙醇溶液热回流，收集提取液，减压蒸馏以回收乙醇，得到浸膏；3)浸膏处理：将步骤2)得到的浸膏用蒸馏水进行复溶水沉，离心后取上清液，在室温下，使用石油醚对上清液进行萃取，除去石油醚层，收集水层；4)纯化：调节步骤3)得到的水层中总黄酮的浓度和pH值，然后过大孔树脂柱，所述大孔树脂柱先用蒸馏水冲洗至无色，然后用体积比为50-60％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压蒸馏以回收乙醇，得到浸膏，将浸膏干燥，得到紫花苜蓿总黄酮提取物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤1)中：所述烘干在35℃-65℃下进行；优选地，所述烘干在65℃下进行；优选地，所述烘干进行12-48小时，更优选地进行24小时；优选地，烘干后所述紫花苜蓿中含有的水分小于6wt％；优选地，所述筛为40目筛，更优选地，所述40目筛的筛孔尺寸为425μm。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤2)是通过包括下述步骤的方法进行的：将步骤1)得到的紫花苜蓿粉使用乙醇溶液热回流提取2-4次，得到提取液，将所述提取液合并，减压蒸馏以回收乙醇至无醇味，得到比重为1.1～1.3的浸膏。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在所述步骤2)中，所述乙醇溶液的体积分数为50％-70％；优选地，所述紫花苜蓿粉和所述乙醇溶液的料液比为1:6-10(g：mL)，更优选地为1:7-8(g：mL)；优选地，所述步骤2)在60℃-80...

【专利技术属性】
技术研发人员：董晓芳，佟建明，荆常亮，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11