一种L-苹果酸的生产方法技术

本发明专利技术公开了一种L-苹果酸生产方法，属于生物工程技术领域。本发明专利技术在大肠杆菌BER108纯厌氧生产琥珀酸的基础上通过有氧诱导，将培养基中的琥珀酸、乙酸作为底物催化，转化为苹果酸。并且对苹果酸有氧转化阶段的转化条件如温度、催化底物浓度等进行了优化。最终有氧转化温度在35℃，转化时长在48h左右，苹果酸浓度能够达到82g/l以上，显著提高了大肠杆菌生产苹果酸性能，为苹果酸的生产与研究提供了借鉴与思路。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物化工领域，更具体的，本专利技术涉及一种L-苹果酸的生产方法。
技术介绍
苹果酸作为生物炼制中重要的有机酸及碳四平台化合物，被广泛应用于化工、医药、食品及材料等行业，其发展空间巨大。目前，苹果酸的生产方法有：化学合成法、酶转化法、微生物发酵法等。化学合成法生产的苹果酸，一般是以石油基为原料，经过化学合成的方法生产。主要包括反丁烯二酸或顺丁烯二酸经高温高压催化加水等几种方法。虽然化学合成法生产成本较低，但其生产的苹果酸产品为DL型，不易被人体吸收且具有一定的毒副作用，限制了其在食品、医药行业的广泛应用。酶转化法生产L-苹果酸主要以富马酸酶转化富马酸为主，因此原料依然依赖于高纯度化学合成的富马酸，其生产过程存在原料价格昂贵、生产污染大、产品中杂酸含量偏高等缺点。微生物发酵法因具有原料来源丰富、产品成本低廉、杂酸含量低、食用安全性高等优势今年来日益受到重视。在主要的L-苹果酸生产菌株中，野生菌方面：黄曲霉发酵具有较高的产物浓度达到113g/l及生产速率(0.59g/l/h)，但因生产菌株具有潜在代谢毒素隐患影响产品在食品等领域的应用；利用根霉进行生产具有一定优势，但缺点亦本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种L‑苹果酸的生产方法，其特征在于：在大肠杆菌（Escherichia coli）BER108 （CCTCC NO: M2012068）纯厌氧法产琥珀酸过程结束后进行有氧诱导，将培养基中的琥珀酸、乙酸作为底物催化，转化为苹果酸。

【技术特征摘要】
1.一种L-苹果酸的生产方法，其特征在于：在大肠杆菌（Escherichiacoli）BER108（CCTCCNO:M2012068）纯厌氧法产琥珀酸过程结束后进行有氧诱导，将培养基中的琥珀酸、乙酸作为底物催化，转化为苹果酸。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：大肠杆菌BER108纯厌氧法产琥珀酸具体过程为：将大肠杆菌BER108按体积比1%（v/v）的接种量接入种子培养基中有氧培养，有氧培养菌体至OD=3时，按接种量10%（v/v）接入装有2L发酵培养基的3L发酵罐中厌氧培养，通入CO2，接种后一次性补加葡萄糖至120g/l，发酵条件为37℃，pH=6.8，搅拌速度为200r/min。3.根据权利要求2所述的方法，所述的种子培养基的配方为：蛋白胨10g/l，酵母粉5g/l，NaCl5g/l；所述发酵培养基的配方为：CitricAcid，3.0g/L；Na2HPO4∙7H2O，3.0g/L；KH2PO4，8.00g/L；(NH4)2HPO4，8.00g/L；NH4Cl，0.20g/L；(NH4)2SO4，0.75g/L；MgSO4∙7H2O，1...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜岷，练宇晴，马江锋，姜友明，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32