GmACT7基因片段作为秦艽叶在不同诱导子处理条件下稳定表达的内参基因的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种GmACT7基因片段作为秦艽叶在不同诱导子处理条件下稳定表达的内参基因的应用。本发明专利技术采用GmACT7基因片段作为秦艽叶在不同诱导子处理条件下的内参基因，通过荧光定量PCR技术检测表明，其在秦艽叶受到银离子、铜离子、水杨酸、花生四烯酸、茉莉酸甲酯、柠檬酸铵等诱导子处理下可作为分析基因表达时稳定的内参使用，为研究秦艽的功能基因以及次生代谢产物——龙胆苦苷代谢途径的关键酶基因的表达奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学
，具体涉及GmACT7基因片段作为中药秦艽的叶片在不同诱导子处理下稳定表达的内参基因的应用。
技术介绍
中药秦艽是我国传统名贵中药材，具有祛风湿、清湿热、止痹痛、和血舒筋、利尿等功效。随着社会发展，市场需求的逐年增大，以及乱采乱挖等原因，致使野生的秦艽资源遭到极大破坏。自1987年起，秦艽就被我国列为三级重点保护野生药材。秦艽的有效成分主要是以龙胆苦苷(gentiopicroside)为代表的裂环环烯醚萜苷类(Secoiridiodglycosides)，还包括獐牙菜苦苷(swertiamarin)、獐牙菜苷(sweroside)等。这些次生代谢产物有着广泛的生物药理性活性，例如健胃、利胆、抗炎、抗真菌、抗组胺等。植物常常会对诱导子处理产生不同程度的响应，对中药秦艽而言，可体现在次生代谢产物的含量升高或降低。从分子领域了解诱导子处理后次生代谢途径关键酶基因的表达，可在生产实际中，优化龙胆苦苷等裂环环烯醚萜苷类的代谢途径，产生更多有效的次生代谢产物。目前，秦艽转录组数据库的建立，为挖掘该种中药材的基因提供了大量的数据资源。研究基因的表达有多种方法，其中荧光实时定量PCR(RT-qPCR)因为其快速和可靠地定量分析基因表达研究而被广泛应用。但是，实时荧光定量PCR检测的准确性很大程度上依赖于筛选适合的内参基因对目标基因的表达数据进行校正和标准化。所谓内参基因(Endogenousreferencesgene)即内部参照，主要作为检测目的基因在特定条件下表达水平变化的参照物，相当于衡量基因表达的一个“标尺”。常用的内参基因应该在生物体各类细胞中均有表达，它们是在维持细胞基本生命活动中时刻表达的基因，自身表达相对稳定，不会随着实验材料不同而有较大差异，这样作为一个“标尺”才可靠。然而越来越多的实验研究发现，一些常用的内参基因并不是在所有的情况下均稳定表达，在特定的实验条件下，内参基因的表达会发生变化。因此，在选择使用某一个内参基因时，应首先验证其在特定的条件下是否能够持续稳定的表达。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供GmACT7基因片段作为秦艽叶在不同诱导子处理条件下稳定表达的内参基因的应用，所述GmACT7基因片段的核苷酸序列为GCAGTAGGAAAGCATCAAGTTCTTTGTTAAAGTACATGTTCCGCCAACTGGGAATAATAAAGTACATTCTCATACAACATAATATTGACAATTGTTCTCAAGACAACAAACAAAACTTCAATAATAAGAAAACCAAAACCAATAGTAATAATAATATGGATAAAAAAGAACCATCACAACCACTCTCCA。采用上述GmACT7基因片段作为秦艽叶在不同诱导子处理条件下稳定表达的内参基因时，使用的特异性引物为：GmACT7-F：5′-GCAGTAGGAAAGCATCAAGT-3′；和GmACT7-R：5′-TGGAGAGTGGTTGTGATGG-3′上述GmACT7基因片段由下述方法克隆得到：(1)从秦艽中提取总RNA，然后反转录合成cDNA；(2)根据转录组数据库中GmACT7基因的核苷酸序列：GTAAAGTCGATGCTAACTCGAAGCGTGGTGGCACGGTAGATTCATAATGCAGTAGGAAAGCATCAAGTTCTTTGTTAAAGTACATGTTCCGCCAACTGGGAATAATAAAGTACATTCTCATACAACATAATATTGACAATTGTTCTCAAGACAACAAACAAAACTTCAATAATAAGAAAACCAAAACCAATAGTAATAATAATATGGATAAAAAAGAACCATCACAACCACTCTCCAGCTACAAGCAACAACTCAAGCATGACAATGAAGCTCATTACATATCACAAGTGTTAACTGGATCGAATTGTGTCGAATTCGAACAACCATGACAACTGCAGATATATCCGAGTCGCATTATACCCAGCCCACTCTTAGAAGAAAACCCCAGCTCAAAACTTTATAACAACAGCAAACCGAAATTGTTTGTAACTTATCATAATAATGATACAAGGGCAGCAGCAGGAAAATAAAATAAAACTCACTATCCCAAGAAAGCAAATGAATCCTAAAAGCACTTCCTGTGGACAATAGATGGACCAGACTCTTCGTATTCAGCTTTCGAGATCCACATCTGCTGGAAAGTACTGAGGGAAGCGAGAATCGATCCTCCGATCCAAACACTGTACTTCCTCTCAGGTGGTGCAACAACCTTGATCTTCATGCTACTTGGAGCCAAAGCGGTGATCTCTTTGCTCATACGGTCAGCAATGCCCGGGAACATGGTTGAACCACCACTGAGAACAATGTTACCATAAAGATCCTTCCTGATATCGACGTCACATTTCATGATGGAATTGTAAGTAGTCTCGTGGATTCCTGCAGATTCCATTCCAATCATGCTAGGCTGAAACAGAACTTCAGGGCAACGGAATCTCTCGTTTGCTATTGTGATGACTTGTCCATCAGGCAATTCATAGTTCTTCTCGAGTGATGAGCTGCTTTTTGCAGTTTCAAGCTCCTGCTCGTAGTCAAGAGCAACATAAGCCAGCTTTTCCTTTATGTCACGGACAATTTCCCGCTCAGCAGAGGTGGTAAACATATATCCTCTCTCAGTGAGGATCTTCATGAGGTGATCGGTGAGATCACGACCAGCAAGGTCTAGACGAAGAATTGCATGGGGTAGAGCATACCCTTCATAGATTGGGACGGTATGAGACACACCATCACCAGAATCCAGGACAATACCGGTTGTACGGCCACTGGCATACAGAGACAGGACGGCCTGAATAGCAACATACATAGCCGGGGTATTGAAGGTCTCAAACATGATTTGAGTCATCTTCTCCCTATTGGCCTTTGGATTAAGAGGCGCCTCAGTGAGAAGTATAGGGTGCTCCTCAGGTGCAACACGAAGCTCGTTATAGAAAGTGTGATGCCATATCTTTTCCATATCATCCCAGTTGCTAACTATACCATGCTCAATCGGGTACTTCAAAGTCAAGATACCTCTTTTAGACTGAGCTTCATCACCCACATACGCGTCTTTCTGCCCCATTCCAACCATAACACCAGTGTGCCTTGGCCTACCCACAATACTGGGAAAGACTGCCCTTGGAGCATCATCACCAGCAAACCCAGCCTTCACCATTCCAGTTCCATTATCGCAAACAAGGGGTTGAATTTCCTCGGAATCGGCCATTTTCTATGAGCTTTGTTGGTAGAAAAGACGAGGA本文档来自技高网...

【技术保护点】
GmACT7基因片段作为秦艽叶在不同诱导子处理条件下稳定表达的内参基因的应用，所述GmACT7基因片段的核苷酸序列为GCAGTAGGAAAGCATCAAGTTCTTTGTTAAAGTACATGTTCCGCCAACTGGGAATAATAAAGTACATTCTCATACAACATAATATTGACAATTGTTCTCAAGACAACAAACAAAACTTCAATAATAAGAAAACCAAAACCAATAGTAATAATAATATGGATAAAAAAGAACCATCACAACCACTCTCCA。

【技术特征摘要】
1.GmACT7基因片段作为秦艽叶在不同诱导子处理条件下稳定表达的内参基因的应用，所述GmACT7基因片段的核苷酸序列为GCAGTAGGAAAGCATCAAGTTCTTTGTTAAAGTACATGTTCCGCCAACTGGGAATAATAAAGTACATTCTCATACAACATAATATTGACAATTGTTCTCAAGACAACAAACAAAACTTCAATAATAAGAAAACCAAAACCAATAGTAATAATAATATGGATAAAAAAGAACCATCACAACCACTCTCCA。2.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王喆之，何懿菡，陈康健，
申请(专利权)人：陕西师范大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61